紫外線對(duì)植物細(xì)胞的影響

1、紫外線對(duì)植物細(xì)胞的影響2009300087劉舒瑩生物技術(shù)【摘要】臺(tái)盼藍(lán)（C34H24N6O14S4Na4 ）是一種細(xì)胞活性染料，常用于檢測(cè)細(xì)胞膜的 完整性或檢測(cè)細(xì)胞是否存活?；罴?xì)胞不會(huì)被染成藍(lán)色，而死細(xì)胞會(huì)被染成淡藍(lán)色。其 作用機(jī)理是：正常的活細(xì)胞，胞膜結(jié)構(gòu)完整，能夠排斥臺(tái)盼藍(lán)，使之不能夠進(jìn)入胞內(nèi)； 而喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞，胞膜的通透性增加，可被臺(tái)盼藍(lán)染成藍(lán)色。通常 認(rèn)為細(xì)胞膜完整性喪失，即可認(rèn)為細(xì)胞已經(jīng)死亡，這與中性紅作用相反。因此，借助 臺(tái)盼藍(lán)染色可以非常簡(jiǎn)便、快速地區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。臺(tái)盼藍(lán)染色后，通過顯微鏡 下直接計(jì)數(shù)或顯微鏡下拍照后計(jì)數(shù)，就可以對(duì)細(xì)胞存活率進(jìn)行比較精確的定量。

2、【關(guān)鍵詞】臺(tái)盼藍(lán)煙草細(xì)胞MS培養(yǎng)基紫外線【前言】細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，一個(gè)細(xì)胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡(jiǎn)單的單細(xì)胞或極少 分化的多細(xì)胞。在理論知識(shí)的基礎(chǔ)上，我們對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)有了一定的了解，并且在平時(shí)實(shí)驗(yàn)中 也積累了一定的經(jīng)驗(yàn)。為進(jìn)一步提升動(dòng)手能力和獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的能力，我們對(duì)煙草細(xì)胞進(jìn)行懸浮 培養(yǎng)后進(jìn)行紫外線照射，研究紫外線對(duì)細(xì)胞膜通透性的影響，以期提高自己綜合能力的同時(shí) 能對(duì)懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞有進(jìn)一步的了解。實(shí)驗(yàn)器料和試劑1.1實(shí)驗(yàn)器材：吸管三角瓶標(biāo)簽紙燒杯天平玻璃棒移液器培養(yǎng)皿冰箱恒溫?fù)u床高壓滅菌桶 超凈工作臺(tái)酒精燈載玻片光學(xué)顯微鏡 槍頭棉線封口膜1.2實(shí)驗(yàn)試劑：NH4NO3 KNO3 KH2PO4

3、MgSO4 - 7H2O CaCl2 - 2H2O MnSO4 - 4H2O ZnSO4 - 7 H2O KI H3BO3 Na2MoO4 - 2 H2O CoCl2 - 6H2O CuSO4 - 5 H2O FeSO4.7H2O 乙二胺四乙酸鈉 肌醇（環(huán)己六醇）鹽酸硫胺素（維生素B1）煙酸 甘氨酸 鹽酸毗哆醇（維生素B6）1.3實(shí)驗(yàn)材料：煙草細(xì)胞m成分用量 (mg/L)配制母澈500 mL)用 *(200 X)配制母液(250mL)用 O配制母液如mL)用量(2OJX)nh4no316501KN01900/kh2po225*/nSO4-7HjO370/440/22.3/2MSO4-7HzO8

4、.6IKI0.83IH3BO6.2INajMbO-lO0.25/0.025/CMSO4-5HzO0.025/2.實(shí)驗(yàn)操作與步驟2.1計(jì)算所配制的各母液成分的需要量(稱取量)配制大量元素母液1L (20X)配制微量元素母液500mL (200X)配制鐵鹽母液500mL (200X)（4）配制有機(jī)母液250mL （200X）2.2植物生長(zhǎng)物質(zhì)母液的配制2,4 - D母液（1mg/mL）：準(zhǔn)確稱量2,4-D 100mg，先用13mL 90%乙醇完全溶解后，加蒸 餾水定容；也可以加入少量堿（如1mol/L氫氧化鉀、氫氧化鈉）溶液，使之中和成為鈉鹽 或鉀鹽，在水中溶解，再加水定容至100mL，即配成濃度

5、為1mg/mL的母液。計(jì)算出所配培養(yǎng)基所需各種母液的量。（取用量=需配培養(yǎng)基的體積/母液的擴(kuò)大倍數(shù)）將所需的各種儲(chǔ)存母液按順序放好，準(zhǔn)備好蒸餾水、各種潔凈器皿（燒杯、量筒、玻璃棒、 可調(diào)移液器、槍頭）。培養(yǎng)基的成分比較復(fù)雜，為避免配制時(shí)忙亂而將一些成分漏掉，可以 準(zhǔn)備一份配制培養(yǎng)基的成分單，將培養(yǎng)基的全部成分和用量填寫清楚。配制時(shí)，按表列內(nèi)容 順序，按項(xiàng)按量稱取，就不會(huì)出現(xiàn)差錯(cuò)。按需取各種母液置于500ml燒杯中，加350ml左右的蒸餾水，再加15g蔗糖，加熱攪拌溶 解。加入0.1ml 1mg/ml的2， 4-D，加蒸餾水定容至500ml。將準(zhǔn)備的待滅菌的器皿及培養(yǎng)基放入高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)（注意

6、鍋中外層的水位適當(dāng)），在汽 相121 C條件下，滅菌20分鐘。滅菌結(jié)束后關(guān)閉電源，待鍋內(nèi)溫度自行下降，壓力降至0時(shí)，打開排氣閥，開蓋，取出滅菌 物品，置超凈工作臺(tái)或溫箱中。接種前，用75%酒精擦拭超凈工作臺(tái)，將培養(yǎng)基和接種用的器具放入超凈工作臺(tái)；打開 超凈工作臺(tái)紫外燈，照射20-30分鐘后開送風(fēng)開關(guān)，10分鐘后可進(jìn)行無菌操作。用75%酒精對(duì)移液器和手進(jìn)行表面消毒。在酒精燈上對(duì)裝有培養(yǎng)基或培養(yǎng)物的三角瓶或培養(yǎng)皿進(jìn)行開封，用無菌的移液器取懸浮 培養(yǎng)的煙草細(xì)胞至不同的新鮮培養(yǎng)基中：10ml懸浮細(xì)胞至50ml新鮮液體培養(yǎng)基中；1ml懸 浮細(xì)胞在無菌EP管中放置、細(xì)胞自動(dòng)下沉后去掉約0.8ml上清液，用

7、移液器取細(xì)胞至固體 培養(yǎng)基上鋪板。將對(duì)三角瓶或培養(yǎng)皿進(jìn)行封口、標(biāo)記。培養(yǎng)：把培養(yǎng)瓶放到恒溫?fù)u床上進(jìn)行震蕩培養(yǎng)。調(diào)整搖床的旋轉(zhuǎn)速度，使之為120rpm。培養(yǎng)溫度 為28C，在黑暗中培養(yǎng)。培養(yǎng)一周后取出生長(zhǎng)良好的細(xì)胞懸浮液，在超凈臺(tái)內(nèi)分裝如小培養(yǎng)皿內(nèi)。輕搖三角瓶后用移 液器在每個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)加入900ul細(xì)胞懸浮液。分裝10個(gè)培養(yǎng)皿。將培養(yǎng)皿擺放好以后打開超凈臺(tái)的紫外燈進(jìn)行照射，每隔5min取出一個(gè)培養(yǎng)皿，加入100ul 臺(tái)盼藍(lán)染液染色3min。用吸管取一滴滴在載玻片上，加蓋蓋玻片。在顯微鏡下觀察。5min后鏡檢結(jié)果圖10min后鏡檢結(jié)果圖時(shí)間死細(xì)胞個(gè)數(shù)總細(xì)胞個(gè)數(shù)細(xì)胞死亡率0min （未照射）3763.9%5min4824.9%10min3803.8%15min5786.4%20min3754.0%25min3833.6%30min4785.1%35min3704.2%40min4894.5%從實(shí)驗(yàn)結(jié)果上看，經(jīng)過不同時(shí)間的紫外線照射的煙草懸浮細(xì)胞，細(xì)胞死亡率都接近于5%, 并沒有顯示出逐漸遞增的規(guī)律性，說明在該次實(shí)驗(yàn)中，煙草懸浮細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性不受改 強(qiáng)度的紫外線照射的影響既該強(qiáng)度下的紫外線對(duì)植物沒有影響?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1、