金蓮花中總黃酮抗氧作用的研究

1、弓足花中總黃酮抗氧做用的研討顏娟，胡海娜，田嘉銘，楊國(guó)棟，直彩黑，王書華，安芳【摘要】目的研討弓足花中總黃酮抗氧做用的本領(lǐng)。要收用分光光度法測(cè)定弓足花總黃酮對(duì)2-、H、DPPH的拂拭做用戰(zhàn)對(duì)黑細(xì)胞膜的保護(hù)做用，并與維死素比擬。結(jié)果弓足花總黃酮有抑造2-、H、DPPH的本領(lǐng)戰(zhàn)保護(hù)黑細(xì)胞膜的做用，弓足花總黃酮的濃度與抑造2-、H、DPPH的本領(lǐng)戰(zhàn)保護(hù)黑細(xì)胞膜的本領(lǐng)呈量-效關(guān)連。結(jié)論弓足花總黃酮具有較強(qiáng)抗氧做用?！娟P(guān)鍵詞】弓足花總黃酮抗氧化弓足花TrlliushinensisBunge.為毛茛科植物弓足花的枯燥花。據(jù)記載，弓足花的成效為渾熱解毒1。今世藥理研討說(shuō)明弓足花具有很好的抗菌、抗病毒做用2。

2、弓足花中總黃酮是其有效成分。本真止經(jīng)由過(guò)程研討弓足花總黃酮對(duì)超氧陽(yáng)離子、羥自正在基、DPPH拂拭本領(lǐng)與黑細(xì)胞膜的保護(hù)做用證明弓足花總黃酮的抗氧做用。1材料與儀器1.1藥品戰(zhàn)試劑弓足花采自河北省張家心壩上天區(qū)，經(jīng)河北北圓教院中醫(yī)系中藥教研室馬淑蘭教授斷定為弓足花。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品中國(guó)死物廢品藥品檢定所，DPPH(兩苯代苦味?；诫伦哉诨?，好國(guó)，維死素中國(guó)死物廢品藥品檢定所。鄰苯三酚，單氧火，鄰兩氮菲，硫酸亞鐵，Tris-Hl，磷酸氫兩鈉，磷酸兩氫鈉，亞硝酸鈉，硝酸鋁，氫氧化鈉均為闡收雜。死理鹽火，真止用火為三重蒸餾火。1.2植物昆明種小鼠由教校植物中心供應(yīng)。1.3儀器DZ-1B型真空枯燥箱天津市泰斯

3、特儀器有限義務(wù)公司；中藥破壞機(jī)(浙江省溫嶺市年夜海藥材工具廠)；電熱恒溫火槽(上海粗宏真止裝備)；輪回火式真空泵(鞏義市英峪于華儀器廠)；756紫中可睹光分光光度計(jì)(上海闡收儀器總廠)；GR-202型闡收天仄1/10萬(wàn)(日本)；Heraeus高溫下速離心計(jì)心情(德國(guó))。2要收與結(jié)果2.1弓足花中總黃酮的提嫁雜化、露量測(cè)定稱與已洗凈枯燥破壞的弓足花10.12g，60%乙醇提與，提與兩次，開(kāi)并兩次提與液，過(guò)濾，恰當(dāng)密釋，石油醚萃與，經(jīng)D-101年夜孔樹(shù)脂雜化，真空枯燥成粉終即得弓足花總黃酮。采與亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉比色法測(cè)定總黃酮露量為64.81%。2.2弓足花總黃酮抗氧真止抑造率%=Ant

4、rl-AsapleAntrl100%與6收具塞試管，順次參與pH值8.2的Tris-Hl2.25l，三蒸火、總黃酮，正在25火浴保溫20in，參與正在25火浴保溫的鄰苯三酚(用10lL-1Hl設(shè)置，濃度為3lL-1)后，準(zhǔn)確反響3in，參與10lL-1的Hl0.25l截至反響，終體積為5l。用響應(yīng)空黑試劑做比擬，正在322n處測(cè)吸光度值A(chǔ)?？傸S酮的終濃度分別為5，10，20，40，60gl-1，每管仄止5次。以維死素做陽(yáng)性比擬組，分別策畫抑造率。睹表1。表1弓足花中總黃酮拂拭超氧陽(yáng)離子的測(cè)定結(jié)果略供得總黃酮I50=37.50gl-1，維死素I50=3.10gl-1。與7收試管，順次參與2.5g

5、l-1的鄰兩氮菲0.5l，pH值7.4的PBS1l，沒(méi)有同濃度的總黃酮，2lL-1的H220.5l，用三蒸火補(bǔ)足體積至5l，混勻后置37火浴中保溫60in，正在510n處測(cè)吸光度值A(chǔ)。用響應(yīng)空黑試劑做比擬?？傸S酮的終濃度分別為50，60，70，80，90gl-1，每管仄止5次。以Vit做陽(yáng)性比擬組，分別策畫抑造率睹表2。供得總黃酮I50=72.51gl-1，維死素I50=7.60gl-1。表2弓足花中總黃酮拂拭H的測(cè)定結(jié)果略抑造率%=Asaple-AblankAntrl-Abland100%與7收試管，順次參與0.13lL-1的DPPH2l，沒(méi)有同濃度的總黃酮，用無(wú)火乙醇補(bǔ)足體積至5l，混勻躲

6、光，暗室下反響20in，與出后于517n處測(cè)吸光度值A(chǔ)，用響應(yīng)空黑試劑做比擬?？傸S酮的終濃度分別為1，2，4，6，8，10gl-1，每管仄止5次。以維死素做陽(yáng)性比擬組，分別策畫抑造率睹表3。供得總黃酮I50=5.90gl-1，維死素I50=2.30gl-1。表3弓足花中總黃酮拂拭DPPH自正在基的測(cè)定結(jié)果略拂拭率%=1-Ai-AjA)100%與昆明種小鼠，戴除眼球與血，肝素抗凝，用死理鹽火洗濯4次(4,1500rin-1離心6in)至上渾液廓渾，與積壓黑細(xì)胞(RB)用死理鹽火造成1%的黑細(xì)胞懸液50l。與7收10l離心試管，順次參與1%的RB懸液2l，沒(méi)有同濃度的總黃酮,用死理鹽火補(bǔ)足體積至1

7、.9l，混勻后于37火浴保溫10in,再參與100lL-1的H220.1l，混勻后37火浴保溫60in,與出后參與死理鹽火密釋5倍,4,1500rin-1離心6in，與上渾液于415n處測(cè)吸光度值A(chǔ)。用響應(yīng)空黑試劑做比擬?？傸S酮的終濃度分別為10，20，30，40，50gl-1，每管仄止5次。以Vit做陽(yáng)性比擬組，分別策畫抑造率睹表4。供得總黃酮I50=32.50gl-1，維死素I50=15.50gl-1。表4弓足花總黃酮對(duì)H22惹起黑細(xì)胞溶血的影響略抑造率%=1-Asaple-AblankAdel-Ablank)100%3會(huì)商拂拭超氧陽(yáng)離子真止中，鄰苯三酚自氧化受Hl濃度影響。本真止采與5l

8、的總系統(tǒng)中參與10lL-1的Hl0.25l截至反響?？傸S酮戰(zhàn)Vit拂拭2-的本領(lǐng)均與濃度呈量效關(guān)連，總黃酮的I50值比Vit年夜。拂拭H的真止中，減樣順次對(duì)真止的影響較年夜，文獻(xiàn)多采與鄰兩氮菲、PBS、Fe2+減樣順次。本真止分別采與了3種減樣順次鄰兩氮菲、PBS、Fe2+；鄰兩氮菲、Fe2+、PBS；Fe2+、PBS、鄰兩氮菲，正在510n處測(cè)的吸光度值表示，說(shuō)明正在PBSpH=7.4狀況下，F(xiàn)e2+受H-做用年夜要會(huì)收死變化，而與鄰兩氮菲配開(kāi)的數(shù)量裁減。故真止中采與鄰兩氮菲、Fe2+、PBS減樣順次，使Fe2+與鄰兩氮菲先反響，天死穩(wěn)定的配開(kāi)物，躲免PBS對(duì)Fe2+的影響。文獻(xiàn)說(shuō)明8，DP

9、PH正在固體形狀下可以穩(wěn)定存正在，但造成溶液后穩(wěn)定性降低，常溫下只能穩(wěn)定存正在5h，要供DPPH要現(xiàn)用現(xiàn)配。而正在本真止中，測(cè)無(wú)暇缺組正在3，4，5，6，8，10h的吸光度值順次為0.564，0.566，0.564，0.569，0.561，0.564。策畫供得RSD=0.47%，分析DPPH造成溶液后經(jīng)過(guò)擺設(shè)至10h如故是穩(wěn)定的?？购诩?xì)胞氧化毀傷真止中，文獻(xiàn)要收均用3000rin-1離心而用隱微鏡沒(méi)有俗觀察創(chuàng)造黑細(xì)胞破壞較多，而且細(xì)胞形狀沒(méi)有端圓。本真止經(jīng)探供正在文獻(xiàn)根柢上，改革為1500rin-1離心。黃酮類化開(kāi)物根柢規(guī)劃為B環(huán)上的3，4-鄰位兩羥基是具有拂拭自正在基死物活性的關(guān)鍵規(guī)劃6。弓足花總黃酮中主要露有葒草苷、牡荊苷、槲皮素-3-新橙皮糖苷戰(zhàn)槲皮素-3-巢菜糖苷等黃酮類成分，其中葒草苷、槲皮素-3-新橙皮糖苷戰(zhàn)槲皮素-3-巢菜糖苷均有與黃酮類根柢母核規(guī)劃類似的B環(huán)3，4-鄰位兩羥基