實(shí)驗(yàn)四小鼠精子畸形試驗(yàn)

1、關(guān)于實(shí)驗(yàn)四小鼠精子畸形試驗(yàn)第1頁，共13頁，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三目的 精子畸形試驗(yàn)是檢測受試化學(xué)毒物能否破壞哺乳動物精子正常形態(tài)的實(shí)驗(yàn)方法。通過該實(shí)驗(yàn)，學(xué)習(xí)和掌握小鼠精子畸形試驗(yàn)的原理和步驟。第2頁，共13頁，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三原理小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遺傳性，許多常染色體及X、Y性染色體基因直接或間接地決定精子形態(tài)。精子的畸形主要是指形態(tài)的異常，是決定精子形成的基因發(fā)生突變的結(jié)果。因此形態(tài)的改變提示有關(guān)基因及其蛋白質(zhì)產(chǎn)物的改變。第3頁，共13頁，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三器材和試劑器材： 眼科剪、眼科鑷、小平皿、顯

2、微鏡、擦鏡紙、帶橡皮頭吸管、載玻片、玻璃染缸試劑 生理鹽水、甲醇（分析純）、環(huán)磷酰胺第4頁，共13頁，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三操作步驟動物 雄性小鼠68 周齡，體重2030g藥物 環(huán)磷酰胺劑量 環(huán)磷酰胺40mg/kg腹腔注射，每天 1次，連續(xù)5天第5頁，共13頁，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三制 片在第1次染毒后第45周，小鼠脫頸椎處死，剪開腹腔，分離并摘取雙側(cè)附睪，將附睪放入有約1mL生理鹽水的小平皿中。第6頁，共13頁，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三制 片用眼科剪將附睪縱向剪12刀，用吸管將懸浮液輕輕吹打5-6次，靜置3-5min；用4層擦鏡

3、紙過濾除組織碎片，用膠頭滴管吸取精子懸液，滴一滴于清潔載玻片上，均勻推片；待玻片晾干后用甲醇固定5分鐘，干燥。第7頁，共13頁，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三先用低倍鏡粗檢，找到背景清晰、精子重疊較少的部位，用高倍鏡檢查精子形態(tài)。每只小鼠檢查精子1000條。精子畸形：主要在頭部，其次為尾部?；晤愋涂煞譃闊o鉤、香蕉形、雙頭、胖頭、無定形、尾折疊、雙尾等。分別記錄異常類型和數(shù)量，以便統(tǒng)計(jì)精子畸形率及精子畸形類型的構(gòu)成比。鏡 檢第8頁，共13頁，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三注意事項(xiàng)判斷雙頭、雙尾畸形時(shí)，要注意與兩條精子的部分重疊相鑒別，判斷無定形時(shí)要與人為剪碎及折疊相鑒別。使用的小鼠要健康，以免感染、體溫增高等可能導(dǎo)致精子畸形率增高，造成假陽性結(jié)果。 第9頁，共13頁，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三結(jié)果分析與評價(jià)計(jì)算精子畸形發(fā)生率，與陰性對照組比較，畸形率至少為陰性對照組的2倍或2倍以上；或經(jīng)統(tǒng)計(jì)有顯著性差異（P0.01），并有劑量反應(yīng)關(guān)系。一般陰性對照組的精子異常率為0.83.4。第10頁，共13頁，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三正常和畸形精子形狀第11頁，共13頁，2022年，5月20日，22點(diǎn)13分，星期三40 x第12頁，共13頁，