微生物實驗用菌種管理規(guī)程(含表格)

1、.。好好學(xué)習(xí)天天起上.。好好學(xué)習(xí)天天起上1好好學(xué)習(xí)社區(qū)；P好好學(xué)習(xí)天天起上；P好好學(xué)習(xí)天天起上好好學(xué)習(xí)社區(qū)更多優(yōu)惠資料下載：更多優(yōu)惠資料下載：德信誠培訓(xùn)網(wǎng)更多優(yōu)惠資料下載：更多優(yōu)惠資料下載：德信誠培訓(xùn)網(wǎng)更多優(yōu)惠資料下載：更多優(yōu)惠資料下載：德信誠培訓(xùn)網(wǎng)微生物實驗用菌種管理規(guī)程(ISO13485-2016/YYT0287-2017)1.0目的規(guī)范微生物學(xué)檢定用菌種的管理，最大限度降低變異率，確保菌種的溯源性與穩(wěn)定性，從而確保微生物學(xué)檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。2.0適用范圍適用于微生物實驗用菌種管理，包括菌種的申購、傳代、使用及銷毀等。3.0引用/參考文件ChP2015實用藥品微生物檢驗檢測技術(shù)指南4.0

2、職責(zé)質(zhì)量控制實驗室負(fù)責(zé)菌種的申購、傳代、使用、銷毀等工作，QA負(fù)責(zé)監(jiān)控和參與OOS調(diào)查。5.0程序術(shù)語和定義標(biāo)準(zhǔn)菌株由中國藥品生物制品檢定所醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理中心或者其他經(jīng)認(rèn)可的機構(gòu)提供的冷凍干燥菌。傳代菌株用標(biāo)準(zhǔn)菌種制備的采用特定保存方法長期固定保存的菌種，用于傳代及制備工作用菌種，3代后的傳代菌株在需要時可以作為工作菌株使用。工作菌株用標(biāo)準(zhǔn)菌種或傳代用菌種接種至普通瓊脂斜面培養(yǎng)后，作為日常工作使用的菌種。菌種的代將菌種接種至一新鮮培養(yǎng)基上或培養(yǎng)基內(nèi)，每萌發(fā)一次即稱為一代，從菌種保藏中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代。菌種來源標(biāo)準(zhǔn)菌株由中國藥品生物制品檢定所醫(yī)學(xué)菌種保藏中心（CMCC）或者其

3、他經(jīng)認(rèn)可的機構(gòu)提供的冷凍干燥菌種。質(zhì)量控制實驗室涉及到的菌種種類、代碼、保存方法及保存條件如下。菌種名稱菌種代碼保存方法保存溫度保存期限金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003TSA斜面281個月冷凍干燥管-201年銅綠假單胞菌CMCC(B)10104TSA斜面281個月冷凍干燥管-201年枯草芽孢桿菌CMCC(B)63501TSA斜面281個月冷凍干燥管-201年白色念珠菌CMCC(F)98001SDA斜面283個月冷凍干燥管-201年黑曲霉菌CMCC(F)98003SDA斜面283個月冷凍干燥管-201年生孢梭菌CMCC(B)64941TSA斜面281個月冷凍干燥管-201年菌種的申購、驗收

4、、保存菌種的申購好好學(xué)習(xí)天天起上好好學(xué)習(xí)社區(qū)好好學(xué)習(xí)天天起上好好學(xué)習(xí)社區(qū)好好學(xué)習(xí)天天起上好好學(xué)習(xí)社區(qū)好好學(xué)習(xí)天天起上好好學(xué)習(xí)社區(qū)國P國P好好學(xué)習(xí)天天起上1好好學(xué)習(xí)社區(qū)更多優(yōu)惠資料下載：更多優(yōu)惠資料下載：德信誠培訓(xùn)網(wǎng)更多優(yōu)惠資料下載：更多優(yōu)惠資料下載：德信誠培訓(xùn)網(wǎng)更多優(yōu)惠資料下載：更多優(yōu)惠資料下載：德信誠培訓(xùn)網(wǎng)微生物室QC依據(jù)菌種的庫存及菌種的使用情況，提出采購申請，申請需明確菌種的名稱，標(biāo)準(zhǔn)編號以及申購數(shù)量等信息。質(zhì)量部經(jīng)理對申購計劃進行審批，審批后由公司的商務(wù)部按要求進行采購，采購過程執(zhí)行采購控制程序。菌種的采購需向法定的業(yè)務(wù)部門或者認(rèn)可的機構(gòu)采購。購買菌種的同時應(yīng)保留相關(guān)證明資料，說明菌種

5、的名稱、代數(shù)、數(shù)量等。菌種的驗收微生物室QC負(fù)責(zé)對采購回的菌種以及相關(guān)的證明資料進行驗收；驗收應(yīng)包括菌種外包裝的完好性、具體驗收的依據(jù)為批準(zhǔn)后的申購計劃。驗收符合后簽字確認(rèn)并領(lǐng)回菌種，及時填寫菌種驗收、入庫記錄，并將菌種的相關(guān)證明資料貼在菌種接收登記表當(dāng)頁背面留存。如驗收不符合則拒絕簽字領(lǐng)用，商務(wù)部負(fù)責(zé)退貨處理。菌種的保存驗收合格的冷凍干燥菌種，應(yīng)保存在溫度設(shè)定為-20冰箱中保存，有效期可至1年。驗收后的菌種需在驗收合格接收后14天內(nèi)完成轉(zhuǎn)種。菌種的傳代菌種的傳代次數(shù)不得超過5代,從菌種保藏中心獲得的冷凍干燥的菌種為第0代（G0），冷凍干燥的原始菌種開啟后轉(zhuǎn)種，為第1代（G1）；標(biāo)準(zhǔn)菌種的復(fù)蘇

6、、確認(rèn)及傳代標(biāo)準(zhǔn)菌種的復(fù)蘇將一次性吸管數(shù)支、培養(yǎng)皿、鑷子、凍干菌種管、裝有TSB試管或SDB試管等移入生物安全柜中，開啟生物安全柜的紫外燈滅菌30min后關(guān)閉紫外燈，備用。將凍干菌種管外壁用75%的乙醇棉球擦拭一遍，放入培養(yǎng)皿中，待干。點燃酒精燈，將標(biāo)準(zhǔn)菌種管封口的一端過火后開啟，用一次性吸管吸取少量相應(yīng)液體培養(yǎng)基或者稀釋液，加入凍干管內(nèi)將菌種溶解。黑曲霉的菌種因為是孢子懸液管不需要加入液體培養(yǎng)基，直接擰開即可。將菌種加入到相應(yīng)的液體培養(yǎng)基中，根據(jù)菌種類型的不同將其置于不同溫度下培養(yǎng)不同時間。原凍干菌種管、使用過的一次性吸管待121，30min高溫濕熱滅活后處理。不同菌種稀釋液與培養(yǎng)條件見下表

7、。菌種名稱菌種代碼稀釋液培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時間金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003TSB30-3572h銅綠假單胞菌CMCC(B)10104TSB30-3572h枯草芽孢桿菌CMCC(B)63501TSB30-3572h生孢梭菌CMCC(B)64941硫乙醇酸鹽流體母親苴培養(yǎng)基30-3518-24h白色念珠菌CMCC(F)98001SDB20-25120h黑曲霉菌CMCC(F)98003SDB20-25120h.4取出培養(yǎng)物，觀察液體培養(yǎng)基是否渾濁，渾濁說明菌種復(fù)蘇，若不生長，應(yīng)繼續(xù)延長培養(yǎng)時間（細(xì)菌：至少7天，真菌和酵母菌至少15天），仍不渾濁，121，30min高溫濕熱滅菌后廢棄，需要時，啟動

8、偏差調(diào)查。菌種的確認(rèn)用已經(jīng)過消毒的接種環(huán)挑取上述培養(yǎng)物接種到TSA（細(xì)菌）或SDA（真菌和酵母菌）平板上，然后在相應(yīng)溫度下培養(yǎng)相應(yīng)的時間（細(xì)菌：3035,48-72h；酵母菌：2025,72120h；黑曲霉：2025,57d）,觀察菌落形態(tài)，與標(biāo)準(zhǔn)形態(tài)進行比對確認(rèn)，確認(rèn)結(jié)果應(yīng)及時記錄在菌種確認(rèn)記錄。標(biāo)準(zhǔn)菌種的傳代按照菌種說明書要求復(fù)溶菌粉，轉(zhuǎn)種至適宜的液體增菌培養(yǎng)基內(nèi)復(fù)蘇后的培養(yǎng)物稱為第1代（G1）,菌種傳代應(yīng)填寫菌種傳代記錄。菌種確認(rèn)后，如確認(rèn)符合，則從液體培養(yǎng)物中挑取培養(yǎng)物第1代（G1）轉(zhuǎn)接至相應(yīng)瓊脂培養(yǎng)基斜面上各數(shù)支（每種菌種至少3支），經(jīng)過相應(yīng)溫度培養(yǎng)時間（細(xì)菌：3035,72h；酵母

9、菌：2025,120h；黑曲霉：2025,57d）培養(yǎng)；同時G1在121,30min高溫濕熱滅菌后廢棄。取出其中2支作為傳代菌種，此為第2代（G2）,保存在溫度設(shè)定為28冷藏柜中保存；另外1只G2進行傳代，此為第3代（G3）,G3根據(jù)檢測需要確定傳代數(shù)量，斜面菌株均保存在28冷藏柜中，工作菌種和傳代用菌種分別包扎后保存。按照上述操作，G5為最后一代，不得繼續(xù)進行傳代，需要重新申購冷凍干燥菌種管，重復(fù)上述操作，保存和使用菌種。細(xì)菌每1個月傳代1次；霉菌、酵母菌及芽孢每3個月傳代一次。菌種傳代時注意無菌操作，使菌株不死亡、不污染、不丟失。同時微生物室QC也應(yīng)采取有效的預(yù)防措施進行自我保護，如工作時

10、須穿工作服，佩戴手套，口罩等。實驗完成后對實驗區(qū)域、設(shè)施設(shè)備、用具等進行適當(dāng)方式消毒。如發(fā)生意外，如菌種泄漏或人員受傷，微生物室QC應(yīng)及時向QA報告以便及時處理。工作菌種和傳代菌種無實質(zhì)區(qū)別，必要時，可作為另一種的備用菌種使用。菌種的編號菌種編號原則：英文縮寫字母-代次-順序號-傳代日期；菌種的英文縮寫字母：金黃色葡萄球菌（S.a）、銅綠假單胞菌、（P.a）、枯草芽孢桿菌（B.s）、白色念珠菌（C.a）、黑曲霉（A.n）。代數(shù)的表示用帶有下標(biāo)數(shù)字的字母表示，例如：G3表示菌種的第3代。每種菌種每次傳代順序號從01開始，例如一種菌種一次性轉(zhuǎn)種到4支試管上，那么順序號一次為01,02,03,04。

11、傳代日期用八位數(shù)字表示：年份四位數(shù)，月、日分別用兩位數(shù)表示。例如P.a-G2-03-20170306標(biāo)識2017年03月06日傳代的第2代銅綠假單胞菌的第3只。菌種的保藏菌種設(shè)專人加鎖保管，除銅綠假單胞菌于室溫保藏外，其他斜面菌種均在2-8條件下保藏。菌種的定期檢查與鑒定日常檢查菌種在保藏期間，工作日應(yīng)每天上午和下午兩次檢查保藏菌種冷藏柜的溫度是否正常、必要檢查菌種管的塞子是否松動、是否染菌，檢查結(jié)束應(yīng)及時填寫菌種日常檢查記錄。菌種的使用tSzvtSzvP好好學(xué)習(xí)天天起上好好學(xué)習(xí)社區(qū)；P好好學(xué)習(xí)天天起上；P好好學(xué)習(xí)天天起上好好學(xué)習(xí)社區(qū)更多優(yōu)惠資料下載：更多優(yōu)惠資料下載：德信誠培訓(xùn)網(wǎng)更多優(yōu)惠資料

12、下載：更多優(yōu)惠資料下載：德信誠培訓(xùn)網(wǎng)根據(jù)工作需要，領(lǐng)取工作用菌種或者傳代用菌種，同時填寫菌種使用記錄。菌液一般在制備完后當(dāng)天使用，制備方法參照ChP2015執(zhí)行。廢棄菌種的銷毀下列情況的菌種、培養(yǎng)物或者被污染的器具等，必須經(jīng)過121，30min高壓濕熱滅菌處理：新一代菌種制備成功后的上一代菌種；使用完后的菌種和帶有標(biāo)準(zhǔn)菌種的器具和培養(yǎng)物；超過有效期的菌種;凡是被污染、變異、可疑等異常情況菌種；其他應(yīng)廢棄的菌種。被污染的器具在污染后，濕熱滅菌前應(yīng)放置在密閉容器中防止對外界再污染。廢棄菌種的銷毀須有兩個人以上同時在場進行，并及時填寫廢棄菌種、物品銷毀記錄。安全要求菌種、菌液的保藏需要保藏于加鎖的冷藏柜或者冰箱中；操作人員在操作前應(yīng)該按照規(guī)定著裝，佩戴防護設(shè)