免疫組化技術IHC課件

1、免疫組化技術IHCImmunohistochemistry講解人：王萬林學號：2017021497免疫組化技術( IHC) 免疫組織化學技術，又稱免疫細胞化學。它是組織化學的分支，利用抗原抗體特異性結合的原理通過化學反應使標記抗體的顯色劑顯色以確定細胞內抗原，以此對組織切片或細胞標本中的某些化學成分進行定位、定性及定量的研究。發(fā)展簡史1.1941年 Coons 首先用熒光素標記抗體檢測肺組織內的肺炎雙球菌獲得成功。2. 60年代 Nakane建立酶標抗體技術鐵蛋白標記Ab技術。3. 70年代 Stemberger 改良上述技術，建立辣根過氧化物酶抗體過氧化物酶（PAP）技術，使免疫細 胞化學得

2、到廣泛應用。4. 80年代 Hsu 等建立了抗生物素生素（ABC）法之后，免疫金銀染色法、半抗原標記法、免疫電鏡 技術相繼問世。5. 90年代 分子雜交技術、原位雜交技術、免疫細胞化學分類方法迅速發(fā)展。6.2000年 各種免疫組化技術更加成熟，使免疫組化技術成為當今生物醫(yī)學中形態(tài)、功能代謝綜合研究的 一項有力工具。其應用范圍深達醫(yī)學各個學科，是目前生命科學工作者應該掌握的基本技術之一。原理 免疫組化正是利用抗體和抗原特異性結合特性，先將組織或細胞中的某些化學物質提取出來，以其作為抗原或半抗原去免疫小鼠等實驗動物，制備特異性抗體，再用這種抗體（第一抗體）作為抗原去免疫動物制備第二抗體，并用某種酶

3、（常用辣根過氧化物酶）或生物素等處理后再與前述抗原成分結合，將抗原放大，再借助組織化學方法將抗原抗體反應部位顯示出來（常用顯色劑DAB顯示）。通過抗原抗體反應及呈色反應，顯示細胞或組織中的化學成分，在顯微鏡下可清晰看見細胞內發(fā)生的抗原抗體反應產物，從而能夠在細胞或組織原位確定某些化學成分的分布、含量。WB & IHC對比樣品處理組織樣本 石蠟切片冷凍切片細胞樣品細胞塊石蠟切片 細胞爬片細胞涂片 組織切片分類IHC-P：石蠟包埋細胞團和組織免疫染色前，需收集細胞團樣品并將其固定于 10% 的中性緩沖福爾馬林 (NBF) 中，以維持細胞形態(tài)和抗原表位。將浸潤石蠟的樣品置于裝有少量液態(tài)石蠟的模子中，

4、將其冷卻。切片獲取樣品，并將其置于有助于樣品粘附的帶正電荷的載玻片上。IHC-F：冷凍組織切片前，應將冷凍組織儲存于 80 的溫度下，然后包埋入包埋劑。準備染色時，切片前將組織置于 20 環(huán)境中 平衡組織成分。切片獲取組織，并將其置于帶正電荷的載玻片上。免疫組化IHC-P染色步驟免疫組化各步驟及注意事項 注意：石蠟包埋的組織樣本一旦完成切片，要盡快進行染色如果過早切片，讓切片暴露在室溫太久，容易造成組織細胞抗原性受損應盡可能在切片后兩周內進行染色。蠟塊及切片的保存最好在4保存。注意：脫蠟前，對玻片進行烘烤，56 2-3h，可以徹底除去水分，并升高玻片溫度，幫助石蠟溶解，復水后的所有步驟，切片都

5、要處在水環(huán)境中，防止干片。IHC臨床應用與實例主要包括以下幾方面：惡性腫瘤的診斷與鑒別診斷；確定轉移性惡性腫瘤的原發(fā)部位；對某類腫瘤進行進一步的病理分型；軟組織腫瘤的治療一般需根據(jù)正確的組織學分類，因其種類多、組織形態(tài)相像，有時難以區(qū)分其組織來源，應用多種標志進行免疫組化研究對軟組織腫瘤的診斷是不可缺少的；發(fā)現(xiàn)微小轉移灶，有助于臨床治療方案的確定，包括手術范圍的確定。為臨床提供治療方案的選擇。IHC分析紫云英苷對氣道疾病的改善作用主要是圍繞著氣道疾病發(fā)生發(fā)展關鍵過程中的關鍵蛋白。如單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1），粘附分子ICAM-1和整合素integrin，CD11b，巨噬細胞標志物F4/80、CD6的表達量變化。小鼠明礬OVA致哮喘模型。MCP-1的變化看出紫云英苷對氣道疾病氧化應激過程影響的關鍵蛋白具有調控作用綠色和紅色信號分別反映了氣道組織關鍵蛋白F4/80和CD68（或CD