免疫抑制劑姜黃素逆轉(zhuǎn)胰島素抵抗的研究

1、免疫按捺劑姜黃素逆轉(zhuǎn)胰島素對(duì)抗的研究【摘要】【目的】為探究姜黃素(uruin)對(duì)胰島素對(duì)抗的治療作用及其機(jī)制。【要領(lǐng)】使用胰島素對(duì)抗的小鼠模子，不雅察姜黃素對(duì)小鼠胰島素對(duì)抗的程度、轉(zhuǎn)錄因子I-?資B?琢、循環(huán)細(xì)胞因子的變革。【效果】姜黃素能按捺TNF?琢刺激Fa細(xì)胞NF-?資B激活；姜黃素治療后小鼠的空腹血糖程度沒(méi)有顯著落落，但空腹胰島素的程度落落約30，葡萄糖耐量曲線的程度也顯著落落；循環(huán)中TNF?琢(34.53.4pg/Lvs31.31.1pg/L程度沒(méi)有顯著改變，而IL-1?茁33.93.2pg/Lvs15.61.1pg/L和IL-6(72.19.8pg/Lvs47.25.3pg/L程度

2、顯著被按捺；胰島素刺激的IRS-1酪氨酸的磷酸化程度顯著升高,而胰島素受體的磷酸化程度沒(méi)有顯著改變。與IRS-1酪氨酸的磷酸化程度平行，P85的磷酸化程度也顯著升高，AKT的磷酸化的程度也顯著升高?！窘Y(jié)論】姜黃素能進(jìn)步小鼠胰島素敏感性，有治療改進(jìn)胖胖誘導(dǎo)的胰島素對(duì)抗的作用。【關(guān)鍵詞】姜黃素；NF-?資B；胰島素；對(duì)抗)Abstrat：【bjetive】Tinvestigateinhibitryeffetfuruinanditsehanisninsulinresistane.【ethds】uruin-peratedhighfatdietseretestedfrtheeffetfuruinnbes

3、ityinduedinsulinresistaneinrdentdel.TransriptinfatrIandirulatingytkineserealsdetetedafteruruintreatent.【Results】1uruininhibitedTNF?琢-stiulatedNF-?資BativatininFaells.2Thefastingplasagluselevelasntbviuslydereasedafterthetreatentfuruin,butthelevelffastinginsulindereasedbyabut30%.Furtherre,thelevelfglus

4、etleraneurvedrppedsignifiantly.3ThelevelfTNF?琢(34.53.4)pg/Lvs(31.31.1)pg/Linirulatinasntbviuslyhanged,butthelevelfIL-1?茁(33.93.2)pg/Lvs(15.61.1)pg/LandIL-6(72.19.8)pg/Lvs(47.25.3)pg/Lassuppresseddraatially.4IRS-1tyrsinephsphrylatinlevelsstiulatedbyinsulinbviuslyinreased,butthephsphrylatinlevelfinsul

5、inreeptrdidnthange.BEingparallelithtyrsinephsphrylatinlevelsfIRS-1,thephsphrylatinlevelsfP85andAKTinreasedardingly.Signifiantlyiprvedinsulinsensitivityasbservedingrupsithuruin.【nlusin】uruininhibitsNF-?資Bdependentinflaatrypathayandreversesbesity-induedinsulinresistane.Keyrds:uruin,NF-?資B,insulin,resi

6、stane姜黃urualngaL是常用中藥，臨床上用于活血、行氣、通經(jīng)、止痛。姜黃素uruin是一種黃色色素，從姜黃中提獲得到的重要有用身分。比年來(lái)，大量研究創(chuàng)造它具有免疫調(diào)治、抗氧化、抗炎及抗腫瘤、抗動(dòng)脈粥樣硬化等生理和藥理作用1-4。在實(shí)行室資料中姜黃素是精良的免疫調(diào)治劑，并有用果提示姜黃素可以按捺宿主抗移植物反響，并且進(jìn)步受體動(dòng)物的存活率5，6。在實(shí)行研究中，炎癥又與胰島素對(duì)抗嚴(yán)密相干7，8。炎癥被證明是代謝綜合征的配合泥土，遐想到很多抗炎藥物如阿司匹林可以逆轉(zhuǎn)胰島素對(duì)抗，本文實(shí)行使用姜黃素治療胖胖歸并非常胰島素對(duì)抗的炎癥模子，并對(duì)姜黃素逆轉(zhuǎn)胰島素對(duì)抗的機(jī)制作開(kāi)端探究。1質(zhì)料與要領(lǐng)1.1

7、質(zhì)料1.2要領(lǐng)2效果2.1姜黃素按捺NF-?資B的量效和時(shí)效干系Fa細(xì)胞在102造就皿用10L在10%FBS+DE含有高濃度葡萄糖的造就液中造就至80%重疊，經(jīng)5L0.1%BSA孵育16h后擔(dān)當(dāng)姜黃素預(yù)處置懲罰：劑量干系用梯度濃度如圖所示，時(shí)效曲線用30l/L。預(yù)處置懲罰后擔(dān)當(dāng)鼠TNF10nl/L刺激處置懲罰，于20in后用預(yù)冷的FBS停頓，并網(wǎng)絡(luò)細(xì)胞，用于制作卵白勻漿。用免疫印跡檢測(cè)勻漿內(nèi)I-?資?注?琢的程度。如圖A所示：20l/L姜黃素20in預(yù)處置懲罰可以或許按捺TNF刺激的I?資?注?琢的落解。從姜黃素的時(shí)效干系圖1B可見(jiàn)，姜黃素有用劑量30l/L對(duì)NF-B的按捺作用在3060in時(shí)

8、最強(qiáng)。2.2姜黃素以逆轉(zhuǎn)胖胖小鼠的胰島素對(duì)抗顛末6周姜黃素的治療，小鼠的空腹血糖程度沒(méi)有顯著落落，但空腹胰島素的程度落落約30圖2，口服葡萄糖耐量曲線的程度也顯著落落圖2A，曲線下面積的比力有顯著差異P0.01。由空腹血糖和胰島素程度盤(pán)算的HA指數(shù)用FBS(l/L)胰島素l/L)/22.5盤(pán)算也呈顯著低落P0.05，圖2，提示小鼠對(duì)胰島素對(duì)抗的程度得到顯著改進(jìn)。2.3姜黃素對(duì)循環(huán)細(xì)胞因子的影響bb小鼠治療6周后的空腹血漿用LinResearhLuinex試劑盒同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞因子IL-1?茁，IL-6和TNF?琢的程度。如圖3所示：只管循環(huán)胰島素的程度顯著落落，但TNF?琢(34.53.4pg/L

9、vs31.31.1pg/L程度沒(méi)有顯著改變，與之對(duì)應(yīng)，循環(huán)中IL-1?茁33.93.2pg/Lvs15.61.1pg/L和IL-6(72.19.8)pg/Lvs47.25.3pg/L程度顯著被按捺P0.05。2.4姜黃素為胰島素信號(hào)的增效劑經(jīng)胰島素刺激的肝臟構(gòu)造在液氮下作破壞并以TritnX100RAPA含有全部卵白酶按捺劑，和卵白磷酸酶按捺劑緩沖液在冰點(diǎn)勻漿。經(jīng)全速4離心30in取上清液1g卵白質(zhì)作IRS-1和IR團(tuán)結(jié)免疫沉淀。經(jīng)上樣緩沖液開(kāi)釋的沉淀目的卵白質(zhì)經(jīng)6的SDS分散，轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。用4G10、P85、AKT抗體作免疫印跡。如圖4所示：胰島素刺激的IRS-1酪氨酸的磷酸化程度顯

10、著升高,而胰島素受體的磷酸化程度沒(méi)有顯著改變。與IRS-1酪氨酸的磷酸化程度平行，P85的磷酸化程度也顯著升高，AKT的磷酸化的程度也顯著升高。3討論胰島素對(duì)抗IR及胰島?茁細(xì)胞成效減退是2型糖尿病發(fā)病機(jī)理的緊張環(huán)節(jié)9，如今被以為是一個(gè)慢性非特異性炎癥歷程，胰島素對(duì)胰島素敏感構(gòu)造作用的缺陷肝臟、脂肪構(gòu)造、骨骼肌會(huì)導(dǎo)致慢性、低程度炎病癥態(tài)的惡化，任何與慢性炎癥有關(guān)的歷程都市減弱胰島素的作用，作為惡性循環(huán)，胰島素對(duì)抗又會(huì)使炎癥惡化10。在抗炎藥物對(duì)胰島素對(duì)抗有逆轉(zhuǎn)作用的報(bào)道之后,我們探究新的抗炎藥物對(duì)胰島素對(duì)抗的治療作用,姜黃素是繼阿司匹林后又一個(gè)具有雷同協(xié)同作用的活性身分11。在姜黃素治療6周后

11、，只管治療組和比較組的體重沒(méi)有顯著改進(jìn)，但小鼠空腹血糖的程度顯著落落，并且胰島素的程度也顯著低落，提示胰島素的敏感性顯著升高，葡萄糖耐量曲線在治療后也顯著改進(jìn)，說(shuō)明小鼠團(tuán)體對(duì)葡萄糖的處置懲罰本領(lǐng)顯著升高，即bb小鼠的胰島素對(duì)抗的程度得到顯著改進(jìn)。這些都進(jìn)一步說(shuō)明姜黃素治療改進(jìn)胖胖誘導(dǎo)的胰島素對(duì)抗。研究證明NF-?資B是啟動(dòng)和操縱炎癥的重要核轉(zhuǎn)錄因子，在非激活條件下，NF-?資B和胞漿內(nèi)一種被稱(chēng)為NF-?資B的按捺物I-?資B的卵白質(zhì)團(tuán)結(jié)處于無(wú)成效狀態(tài)。我們使用胰島素敏感構(gòu)造泉源的細(xì)胞系FA，驗(yàn)證了姜黃素可以或許按捺TNF?琢刺激的?資B?琢的落解，繼而按捺NF-?資B的活性,我們推測(cè)在高度胖胖

12、NF-?資B高度激活的胖胖小鼠bb體內(nèi)，姜黃素大概具有越發(fā)顯著的改進(jìn)代謝的作用。在NF-?資B激活的模子上我們證明炎癥引發(fā)的高程度循環(huán)細(xì)胞因子是體系性胰島素對(duì)抗的緣故原由。接納細(xì)胞因子的中和抗體可以逆轉(zhuǎn)胰島素對(duì)抗，在NF-?資B按捺型模子，胰島素敏感性升高，并且循環(huán)中細(xì)胞因子的程度較低。在胖胖產(chǎn)生歷程中，NF-?資B活性與動(dòng)物的體重呈正相干。bb小鼠的肝臟，脂肪以及淋巴構(gòu)造中NF-?資B的活性程度升高，循環(huán)細(xì)胞因子的程度增高，這些都說(shuō)明炎癥介質(zhì)與胰島素對(duì)抗的干系。經(jīng)姜黃素治療的胖胖動(dòng)物循環(huán)中細(xì)胞因子IL-1,IL-6水均勻顯著落落，由于IL-1和IL-6是NF-?資B活性調(diào)控的緊張因子，因此，

13、我們以為姜黃素在胞漿內(nèi)有多個(gè)作用靶點(diǎn)，通過(guò)對(duì)上述細(xì)胞因子的按捺作用，影響NF-?資B的活性，繼而到達(dá)逆轉(zhuǎn)胰島素對(duì)抗和改進(jìn)胰島素敏感性的作用。在肝臟構(gòu)造的胰島素信號(hào)檢測(cè)中，胰島素刺激的IRS-1酪氨酸磷酸化的程度顯著升高，AKT的活性也顯著加強(qiáng)。這些效果都進(jìn)一步說(shuō)明胖胖小鼠胰島素的敏感性在治療后得到了改進(jìn)，姜黃素能進(jìn)步bb小鼠胰島素的敏感性，姜黃素作為一個(gè)免疫調(diào)治劑用于按捺免疫排擠的同時(shí)，對(duì)體系性炎癥也有按捺作用，大概是通過(guò)按捺NF-?資B來(lái)改進(jìn)胰島素敏感性的?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】HUANGH,JANTR,YEHSF.Inhibitryeffetfuruin,ananti-inflaatryagent,

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