一種肝前性門靜脈高壓癥模型的制備

1、一種肝前性門靜脈高壓癥模型的制備【摘要】目的通過(guò)門靜脈主干部分結(jié)扎附加3周后脾靜脈縮窄及其屬支結(jié)扎的方法建立犬的動(dòng)物模型，觀察門靜脈系統(tǒng)變化，為該方法能否建立一種具有脾亢的門靜脈高壓癥大動(dòng)物模型提供根據(jù)。方法實(shí)驗(yàn)犬25只，隨機(jī)分為a組(正常組，n=5)、b組(對(duì)照組，n=10)、組(實(shí)驗(yàn)組，n=10)。a組僅予以剖腹探查，b組予以門靜脈主干部分結(jié)扎建立模型，組那么通過(guò)門靜脈主干部分結(jié)扎附加3周后脾靜脈縮窄及其屬支結(jié)扎的方法建立模型，建模后術(shù)前及術(shù)后每周動(dòng)態(tài)觀察兩組動(dòng)物血象的變化，b、組在預(yù)定時(shí)間點(diǎn)(術(shù)后第5、第9周)分別隨機(jī)選擇5只動(dòng)物開(kāi)腹觀測(cè)門靜脈自由壓、脾臟大孝門體側(cè)支循環(huán)形成情況，并切取

2、脾臟行組織病理學(xué)檢查，此外，術(shù)前及術(shù)后預(yù)定時(shí)間點(diǎn)理解骨髓增生情況變化。結(jié)果兩種方法建模后，門靜脈自由壓的增高明顯，血常規(guī)示b組紅細(xì)胞和血小板在術(shù)后3周明顯低于正常值，4周后開(kāi)場(chǎng)上升，而組血紅細(xì)胞和血小板的下降可以持續(xù)到術(shù)后第9周，且脾臟形態(tài)變化及術(shù)后脾臟組織病理學(xué)改變和骨髓增生情況證實(shí)組較b組可以形成良好的脾功能亢進(jìn)狀態(tài)。結(jié)論門靜脈主干部分結(jié)扎附加3周后脾靜脈縮窄及其屬支結(jié)扎的方法建模后門靜脈系統(tǒng)的變化符合門靜脈高壓癥的表現(xiàn)，尤其是脾亢狀態(tài)適宜，具有良好的科研應(yīng)用價(jià)值?！娟P(guān)鍵詞】高血壓，門靜脈;脾功能亢進(jìn);模型，動(dòng)物;犬keyrdshypertensin，prtal;hypersplenis;

3、dels，anial;dgs門靜脈高壓癥的外科治療經(jīng)歷了近百年的探究和研究，其手術(shù)方式經(jīng)過(guò)不斷的改進(jìn)和創(chuàng)新，得以廣泛應(yīng)用于臨床，然而門靜脈高壓癥的外科治療仍是當(dāng)今外科界極為關(guān)注的難題。此外由于脾臟功能日益受到重視，保脾術(shù)式已經(jīng)在脾外傷中得以應(yīng)用，而門靜脈高壓癥外科手術(shù)中是否予以切除脾臟成為目前爭(zhēng)論的焦點(diǎn)之一，保脾手術(shù)和切脾手術(shù)對(duì)繼發(fā)性脾亢的緩解以及患者術(shù)后血凝狀態(tài)、免疫功能、生存質(zhì)量等各方面影響的利弊關(guān)系尚無(wú)定論1-3。然而，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)顯示現(xiàn)有的門靜脈高壓癥模型都未能有效地形成脾功能亢進(jìn)，與人體實(shí)際的門靜脈高壓癥表現(xiàn)的模擬度不夠，因此在實(shí)驗(yàn)研究中迫切地需要一種可以形成脾亢的門靜脈高壓癥的大動(dòng)物

4、模型，為此我們?cè)O(shè)想通過(guò)犬門靜脈主干部分結(jié)扎附加3周后脾靜脈縮窄及其屬支結(jié)扎的方法來(lái)觀察門靜脈系統(tǒng)的變化以及脾臟形態(tài)功能的改變，試圖制備一種具有脾功能亢進(jìn)的門靜脈高壓癥模型。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組安康成年雄性雜種犬25只，體質(zhì)量1015kg，購(gòu)于溫州醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。按照隨機(jī)數(shù)字表法分為a組(正常組，n=5)、b組(對(duì)照組，n=10)、組(實(shí)驗(yàn)組，n=10)。1.2模型制備方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物術(shù)前禁食12h，禁水6h，腹部備皮后以速眠新(長(zhǎng)春市軍需大學(xué)獸醫(yī)研究所提供)肌肉注射(0.1l/kg)行全身麻醉，取劍突下正中切口約8，逐層進(jìn)腹，測(cè)量脾臟大小以及門靜脈自由壓，此后別離解剖暴露肝門部，游

5、離門靜脈主干約23，測(cè)量其直徑后，剪取一約1長(zhǎng)輸液皮管，修剪到使其內(nèi)徑為門靜脈直徑的0.4倍，隨后套住門靜脈主干予以絲線部分結(jié)扎4，完成門靜脈主干縮窄達(dá)80%85%，觀察5in腸道輕度淤血，無(wú)明顯發(fā)黑，再次測(cè)量脾臟大小后逐層關(guān)腹。組實(shí)驗(yàn)犬3周后再次進(jìn)腹，測(cè)量門靜脈自由壓及脾臟大小，在脾靜脈匯入門靜脈處以一樣的方法縮窄脾靜脈主干約50%，觀察脾臟側(cè)支代償情況，約10in后徹底結(jié)扎脾門處的代償側(cè)支(保存脾胃韌帶處的胃短血管)，完畢后逐層關(guān)腹，a組僅予以剖腹探查術(shù)。術(shù)前及術(shù)后3d青霉素肌注(34萬(wàn)單位/kg，每天2次)，飲水不限，加強(qiáng)護(hù)理。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按照預(yù)定時(shí)間點(diǎn)分別再次開(kāi)腹，觀察門靜脈自由壓、脾臟大

6、孝門體側(cè)支循環(huán)形成情況以及骨髓增生情況和脾臟組織病理學(xué)改變。b、組在預(yù)定時(shí)間點(diǎn)(術(shù)后第5、第9周)分別隨機(jī)選擇5只動(dòng)物開(kāi)腹觀測(cè)門靜脈自由壓、門體側(cè)支循環(huán)形成情況及脾臟和骨髓檢查等。1.3觀察指標(biāo)及方法活潑(有核細(xì)胞50%以上);明顯活潑(有核細(xì)胞10%以上);活潑(有核細(xì)胞5%左右);減低(有核細(xì)胞1%以下);極度減低(有核細(xì)胞0.5%以下)。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用方差分析。2結(jié)果2.1門靜脈自由壓的變化b、組實(shí)驗(yàn)犬門靜脈自由壓在術(shù)后即刻升高達(dá)術(shù)前近3倍左右，到第5周仍明顯升高，此后壓力有所下降但維持到術(shù)后第9周均高于術(shù)前，并且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見(jiàn)表1)，而b組與組之間比擬差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2

7、.2血常規(guī)b、組外周血紅細(xì)胞、血小板建模后開(kāi)場(chǎng)下降，直到第3周后，b組兩者開(kāi)場(chǎng)上升，而組可以持續(xù)下降到第9周rb(6.980.14)g/100l，術(shù)前為(7.410.25)g/100l;plt(42729.6)109/l，術(shù)前為(52410.4)109/l，與術(shù)前比擬差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。各組白細(xì)胞術(shù)后與術(shù)前比擬無(wú)明顯下降，術(shù)后前幾周反而有所上升，總體變化沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)圖13。2.3脾臟大小變化如表2所示，組脾臟長(zhǎng)軸在建模后明顯增大，并且可以持續(xù)到第9周，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而b組建模后脾臟長(zhǎng)軸亦明顯增大，但沒(méi)有持續(xù)到術(shù)后第9周，見(jiàn)表2。2.4脾臟組織病理學(xué)變化he染色：組建

8、模后5周動(dòng)物脾竇擴(kuò)張充血，同時(shí)巨噬細(xì)胞對(duì)紅細(xì)胞的吞噬現(xiàn)象多，可見(jiàn)到紅細(xì)胞被破壞后，部分有形成含鐵血黃素顆粒。術(shù)后9周的脾臟可見(jiàn)到淤血仍然存在，但程度已減輕，此時(shí)脾竇及外套叢增生，巢狀脾竇構(gòu)造增加，還可見(jiàn)到明顯的脾小梁增粗、脾竇上皮細(xì)胞排列嚴(yán)密，并形成了腺樣分支，脾臟呈纖維化改變。上述組織病理學(xué)表現(xiàn)符合慢性脾淤血改變。b組建模后5周脾臟亦呈慢性淤血性改變，但到第9周脾臟無(wú)明顯纖維化改變。2.5骨髓細(xì)胞涂片檢查組實(shí)驗(yàn)犬術(shù)后5周、9周骨穿檢查顯示骨髓細(xì)胞表現(xiàn)為增生明顯活潑到極度活潑之間(按照人類的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，正常犬骨髓細(xì)胞表現(xiàn)為增生活潑)，而b組實(shí)驗(yàn)犬第9周骨髓細(xì)胞增生程度明顯不如組。2.6門-體側(cè)支

9、循環(huán)情況術(shù)后第46周開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腹壁可見(jiàn)到1條或數(shù)條的曲張靜脈，在第5、9周我們觀察到胃底食管，腹膜后靜脈叢以及位于盆腔的痔靜脈叢等門靜脈系統(tǒng)與腔靜脈系統(tǒng)的交通支都有不同程度的曲張，并且個(gè)別實(shí)驗(yàn)犬還出現(xiàn)腸壁肥厚，腹膜后水腫。3討論門靜脈主干部分結(jié)扎法6-7是目前制備肝前型門靜脈高壓癥模型的主要方法，詳細(xì)操作如下：開(kāi)腹游離門靜脈主干后，并排放置一鈍頭注射針頭，連同血管和針頭予以結(jié)扎，隨后抽出針頭，完成縮窄。該方法適用于門靜脈較細(xì)的動(dòng)物，最常用的是大鼠。在該模型的根底上已經(jīng)對(duì)門靜脈高壓癥進(jìn)展了大量血流動(dòng)力學(xué)、病理生理學(xué)等方面的研究8-10，但不少作者提出現(xiàn)有的門靜脈高壓癥動(dòng)物模型對(duì)繼發(fā)性脾功能亢進(jìn)

10、的制備并不理想11。隨著近幾年國(guó)內(nèi)外對(duì)脾臟功能認(rèn)識(shí)的逐漸深化，對(duì)門靜脈高壓癥的治療，很多單位都積極采取各種行之有效的保脾術(shù)式12-14。為了更好地理解功能亢進(jìn)的脾臟在門靜脈高壓癥手術(shù)中是否予以切除，以及哪種保存脾臟的手術(shù)方式更加符合門靜脈高壓癥的治療原那么，制備一個(gè)理想的含有脾功能亢進(jìn)的門靜脈高壓癥動(dòng)物模型就顯得非常重要，而且該大動(dòng)物模型由于其解剖構(gòu)造明晰且與人有較好的同源性，也合適門靜脈高壓癥外科治療術(shù)式的改進(jìn)和豐富，尤其是保脾術(shù)式的討論和研究。國(guó)內(nèi)夏穂生、姜洪池教授等15認(rèn)為脾亢應(yīng)具備以下條件：脾臟腫大;外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)有1種、2種或全部減少;骨髓增生活潑。而目前制備門靜脈高壓癥模型的各種方

11、法，之所以不可以形成脾功能亢進(jìn)，其原因可能包括：其一是門靜脈壓力增高缺乏，脾臟不可以持續(xù)淤血腫大;其二那么是門靜脈壓力足夠，但是腫大的脾臟由于脾門處豐富的側(cè)支形成而無(wú)法維持;另外，沒(méi)有足夠長(zhǎng)的觀察時(shí)間也是其重要因素之一。因此，我們根據(jù)泊肅葉方程(r=8l/r4)，參照diguezb等4的大鼠門靜脈三重縮窄結(jié)扎的方法采取皮管套扎的方法獲得盡可能高的門靜脈壓，以利于脾亢的形成。而在預(yù)實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)，門靜脈部分結(jié)扎后迅速上升的門靜脈壓力使脾臟明顯淤血腫大，術(shù)后3周內(nèi)血細(xì)胞下降，但是此后脾臟淤血減輕，脾亢未能維持，我們考慮可能由于脾門處側(cè)支循環(huán)的形成，系高壓抵抗?fàn)顟B(tài)迅速緩解而致，于是我們結(jié)合程水兵等1

12、6通過(guò)脾靜脈縮窄及其屬支制備脾亢模型的方法，采取3周后附加脾靜脈主干縮窄及其屬支結(jié)扎的方法以加強(qiáng)脾臟淤血性腫大。本實(shí)驗(yàn)各項(xiàng)觀察指標(biāo)的結(jié)果說(shuō)明，改進(jìn)的方法同單純門靜脈部分結(jié)扎法均可以形成門靜脈系統(tǒng)的高壓狀態(tài)。兩者術(shù)后即刻門靜脈自由壓升高達(dá)術(shù)前的近3倍，脾臟各徑線也明顯增大，血常規(guī)示前3周紅細(xì)胞和血小板均顯著下降，與術(shù)前比擬差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。不同之處在于：組實(shí)驗(yàn)犬附加脾靜脈縮窄及其屬支結(jié)扎之后，脾臟的腫大及血細(xì)胞的下降可以維持到術(shù)后第9周，并且脾臟病理檢查以及骨髓細(xì)胞增生情況證實(shí)，組實(shí)驗(yàn)犬其脾亢狀態(tài)可以根本維持到術(shù)后第9周，兩組門體側(cè)支循環(huán)的形成情況從術(shù)后5周和9周的觀察來(lái)看并無(wú)明顯

13、差異，但是組由于實(shí)驗(yàn)過(guò)程中人為地破壞了脾靜脈的屬支及脾門周圍的側(cè)支，因此該改進(jìn)方法可能并不合適門靜脈高壓癥門體側(cè)支循環(huán)的研究。而b術(shù)后的改變可能同手術(shù)應(yīng)激、切口線結(jié)反響以及術(shù)后的急性脾臟淤血刺激機(jī)體產(chǎn)生慢性炎癥反響等有關(guān)。門靜脈高壓癥是指門靜脈系統(tǒng)血運(yùn)受阻、血流郁滯和壓力增高的一種病理狀態(tài)。臨床上常表現(xiàn)有食管和胃底靜脈曲張、脾臟腫大和脾功能亢進(jìn)、腹水等病癥17。本實(shí)驗(yàn)的研究說(shuō)明，門靜脈部分結(jié)扎附加3周后脾靜脈縮窄及其屬支徹底結(jié)扎的方法，其門靜脈系統(tǒng)的變化根本符合門靜脈高壓癥的表現(xiàn)。該方法同現(xiàn)有的各種制備門靜脈高壓癥的方法相比，其優(yōu)點(diǎn)在于可以形成良好的脾功能亢進(jìn)。而且其操作簡(jiǎn)單、易于復(fù)制，尤其適

14、用于門靜脈高壓癥血流動(dòng)力學(xué)改變對(duì)脾臟功能影響的相關(guān)根底研究，同時(shí)，也為門靜脈高壓癥外科術(shù)式(尤其是保脾術(shù)式)的探究和開(kāi)展提供實(shí)驗(yàn)根據(jù)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1banus，brz，ppesug，etal.splen-renaldistalandprxialshuntsfrhypersplenisduethepatiirrhsisj.hirurgia(buur)，2022，102(6)：665-668.2gajinp，radevib，nenezid，etal.distalsplenrenalshuntithpartialspleenresetinj.srparhelklek，2022，135(5-6)：29

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