平肝潛陽藥物對(duì)偏頭痛肝陽上亢證患者的臨床療效及其對(duì)血淋巴細(xì)胞

1、平肝潛陽藥物對(duì)偏頭痛肝陽上亢證患者的臨床療效及其對(duì)血淋巴細(xì)胞結(jié)果：平肝潛陽方有明顯止痛效果87.5%，與氟桂利嗪片75.0%比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義p0.01；以改善眩暈、煩躁易怒和面部烘熱病癥更為明顯p0.05。兩組中醫(yī)病癥積分均降低p0.01，其中以治療組更為明顯p0.01，治療組未出現(xiàn)明顯不良反響。正常人、平肝潛陽方治療組偏頭痛肝陽上亢證患者治療前和治療后血淋巴細(xì)胞凝膠蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)依次為53442、55254和52955。平肝潛陽方治療組偏頭痛肝陽上亢證患者與正常人比較有6個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)下調(diào)，14個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)上調(diào)；平肝潛陽方治療組偏頭痛肝陽上亢證患者治療前后比較發(fā)現(xiàn)表達(dá)下調(diào)的6個(gè)蛋白質(zhì)中有4個(gè)

2、表達(dá)增強(qiáng)，而表達(dá)上調(diào)的14個(gè)蛋白質(zhì)中有11個(gè)表達(dá)降低。共得到12個(gè)肽質(zhì)量指紋圖譜，2個(gè)無質(zhì)譜結(jié)果，搜索到10個(gè)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的蛋白質(zhì)，主要有通道蛋白、抗氧化蛋白、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白、代謝相關(guān)蛋白和免疫相關(guān)蛋白等。結(jié)論：平肝潛陽中藥復(fù)方有良好的止痛作用，能改善中醫(yī)病癥；可能通過調(diào)節(jié)部分血淋巴細(xì)胞蛋白質(zhì)的表達(dá)治療偏頭痛肝陽上亢證?！娟P(guān)鍵詞】平肝;潛陽;肝陽上亢;蛋白質(zhì)組學(xué);偏頭痛;隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)reeivedjuly30,2021;aeptedaugust12,2021;publishednlinejanuary15,2021.freefulltext(htlandpdf)isavailableat.

3、frardlinkingandreferenelinkingviarssref.di:10.3736/ji20210104penaess1.researhinstitutefintegratedtraditinalhineseandesternediine,xiangyahspital,entralsuthuniversity,hangsha,hunanprvine410008,hina2.departentfeergeny,xiangyahspital,entralsuthuniversity,hangsha,hunanprvine410008,hina3.departentfneurlgy

4、,xiangyahspital,entralsuthuniversity,hangsha,hunanprvine410008,hina偏頭痛igraine在以頭痛為病癥的疾病中占有很重要的地位，在美國約17.2%的女性和6%的男性曾有偏頭痛發(fā)作，但僅有48%的患者就診1。肝陽上亢證是偏頭痛的常見證型。平肝潛陽藥物治療偏頭痛肝陽上亢證有較好的療效2。但平肝潛陽藥物治療偏頭痛肝陽上亢證的作用機(jī)制目前尚未說明。我們應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究了平肝潛陽藥物對(duì)偏頭痛肝陽上亢證患者血淋巴細(xì)胞表達(dá)的影響。1資料與方法1.1研究對(duì)象2022年8月2022年12月中南大學(xué)湘雅醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科門診及住院病人按就診順序隨機(jī)

5、分為治療組和對(duì)照組各16例，其中治療組男性5例，女性11例，年齡1863歲，平均年齡34.76.2歲，平均病程2.10.6年；對(duì)照組男性6例，女性10例，年齡1963歲，平均年齡33.87.1歲，平均病程2.20.5年。兩組在年齡和病程方面的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義p0.05。33.37.4歲，與上述治療組和對(duì)照組的年齡和性別比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義p0.05。1.2診斷標(biāo)準(zhǔn)西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)參考2022年第2版?國際頭痛疾病分類?3標(biāo)準(zhǔn)，排除繼發(fā)性偏頭痛。中醫(yī)辨證及證候斷定標(biāo)準(zhǔn)參考?中醫(yī)肝臟象現(xiàn)代研究與臨床?4。主癥：1眩暈；2頭痛；3面部烘熱；4煩躁易怒；5口苦而渴；6脈弦。兼證：1耳鳴；2五心煩熱；3失

6、眠；4心悸；5肢麻；6震顫。具備主癥中的4項(xiàng)和12項(xiàng)兼癥者可診斷為肝陽上亢證。納入病例標(biāo)準(zhǔn)：1年齡1865歲；2符合西醫(yī)偏頭痛診斷標(biāo)準(zhǔn)和中醫(yī)辨證肝陽上亢證者。1.3觀察指標(biāo)及療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)?國際頭痛疾病分類?3標(biāo)準(zhǔn)。頭痛持續(xù)時(shí)間：記錄頭痛發(fā)作至停頓的時(shí)間，假如患者疼痛時(shí)入睡，到醒來時(shí)頭痛已消失，那么醒來的時(shí)間為頭痛停頓的時(shí)間以小時(shí)為計(jì)算單位。無疼痛發(fā)作記0分，輕度頭痛發(fā)作持續(xù)時(shí)間12h記2分，中度頭痛發(fā)作持續(xù)時(shí)間在1248h記4分，重度頭痛發(fā)作持續(xù)時(shí)間48h記6分。頭痛發(fā)作次數(shù)：記錄治療前后2個(gè)月及隨訪2個(gè)月內(nèi)頭痛發(fā)作次數(shù)以月為計(jì)算單位。無疼痛發(fā)作記0分，輕度疼痛發(fā)作2次/月記2分，中度疼痛發(fā)作

7、34次/月記4分，重度疼痛發(fā)作5次/月記6分。缺乏一級(jí)，或頭痛持續(xù)時(shí)間縮短1/3或頭痛加重，持續(xù)時(shí)間延長。頭痛起效和消失時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)以首次服藥時(shí)間為基準(zhǔn)以小時(shí)為計(jì)算單位。病癥評(píng)分眩暈、頭痛、煩躁易怒、面目紅赤或面部烘熱和口苦而渴等主癥以及耳鳴、五心煩熱、失眠、心悸、肢麻、震顫和腰膝酸軟等兼癥均按無、輕、中、重、嚴(yán)重評(píng)為0、1、2、3和4分。?中醫(yī)肝臟象現(xiàn)代研究與臨床?4。臨床痊愈：中醫(yī)臨床病癥、體征消失或根本消失，證候積分減少91%；顯效：中醫(yī)臨床病癥、體征明顯改善，證候積分減少70%90%；有效：中醫(yī)臨床病癥、體征均好轉(zhuǎn)，證候積分減少35%69%；無效：中醫(yī)臨床病癥、體征均無明顯改善，甚或加重，

8、證候積分減少缺乏35%。積分評(píng)分方法采用尼莫地平法，證候積分=治療前積分值治療后積分值/治療前積分值100%。反響全部患者治療前后均進(jìn)展血、尿、糞便常規(guī)和心肝腎功能檢測(cè)，用藥后隨訪期間詳細(xì)記錄可能出現(xiàn)的不良反響，包括病癥以及發(fā)生、持續(xù)和消退的時(shí)間。1.4治療藥物治療組患者服用平肝潛陽中藥復(fù)方湯劑。平肝潛陽方自擬方由天麻12g，鉤藤10g，石決明20g，牡蠣30g，川芎10g組成，為深圳市三九中藥現(xiàn)代提供的中藥顆粒劑型。根據(jù)處方劑量將單味顆粒調(diào)配成湯劑，200l溫開水沖服，分2次口服100l/次，2次/d，14d為1個(gè)療程，2個(gè)療程完畢后統(tǒng)計(jì)療效。對(duì)照組患者服用氟桂利嗪片劑西比靈片劑，5g/片，

9、批準(zhǔn)文號(hào)為國藥準(zhǔn)字h10910003，由西安揚(yáng)森公司提供，5g/次，每晚睡前口服1次，10d為1個(gè)療程，2個(gè)療程完畢后統(tǒng)計(jì)療效。1.7研究方法2結(jié)果2.1頭痛平均發(fā)作次數(shù)和平均持續(xù)時(shí)間治療組和對(duì)照組治療后頭痛平均發(fā)作次數(shù)和平均持續(xù)時(shí)間較治療前均明顯改善p0.01；其中治療組改善程度優(yōu)于對(duì)照組p0.05。見表1。2.2止痛療效32例患者均完成2個(gè)療程的治療，治療組總有效率為87.5%，對(duì)照組為75.0%，兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義p0.01。見表2。2.3中醫(yī)病癥改善情況治療組和對(duì)照組治療后各病癥均較治療前明顯緩解，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義p0.01；且治療組療效優(yōu)于對(duì)照組，其中眩暈、煩躁易怒、面部烘熱

10、等病癥明顯改善p0.05。見表3。表1治療組和對(duì)照組頭痛發(fā)作情況表2治療組和對(duì)照組止痛療效表3治療組和對(duì)照組肝陽上亢證主癥2.4中醫(yī)病癥積分的變化治療組和對(duì)照組治療后中醫(yī)病癥積分均下降，與治療前比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義p0.01。兩組治療后比較，差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義p0.01。見表4。表4治療組和對(duì)照組中醫(yī)病癥積分的變化2.5不良反響在臨床觀察過程中，治療組和對(duì)照組心、肝、腎功能均未發(fā)現(xiàn)明顯異常。對(duì)照組部分患者服藥后出現(xiàn)細(xì)微嗜睡和無力現(xiàn)象，但尚可耐受，未有因不能耐受而退出試驗(yàn)者，其中1例有胃部燒灼感，除外原發(fā)胃腸疾病，予以對(duì)癥處理后病癥消失；治療組未出現(xiàn)明顯不良反響。2.6血淋巴細(xì)胞雙向凝膠電泳圖

11、譜及差異蛋白質(zhì)點(diǎn)分析在一樣條件下分別對(duì)10例正常人和10例治療組偏頭痛肝陽上亢證治療前及治療后的血淋巴細(xì)胞總蛋白質(zhì)進(jìn)展雙向凝膠電泳，采用iagesanner掃描儀掃描獲取圖像，然后通過iageaster2delite4.01分析軟件對(duì)其進(jìn)展點(diǎn)檢測(cè)，獲得正常人血淋巴細(xì)胞和治療組偏頭痛肝陽上亢證治療前后血淋巴細(xì)胞的雙向凝膠電泳圖譜，其平均蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)依次為53442、55254和52955。分別將其中的一塊膠定為參考膠進(jìn)展3塊凝膠間的蛋白質(zhì)點(diǎn)的匹配，平均匹配點(diǎn)數(shù)為46651，其匹配率為86.6%。由此獲得了重復(fù)性較好的正常人血淋巴細(xì)胞和治療組偏頭痛肝陽上亢證治療前后血淋巴細(xì)胞的雙向凝膠電泳圖譜。見圖

12、1。經(jīng)圖像分析統(tǒng)計(jì)后發(fā)現(xiàn)，與正常人比較，偏頭痛肝陽上亢證患者有6個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)下調(diào)，14個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)上調(diào)；偏頭痛肝陽上亢證治療前后比較發(fā)現(xiàn)表達(dá)下調(diào)的6個(gè)蛋白質(zhì)中有4個(gè)表達(dá)增強(qiáng)，而表達(dá)上調(diào)的14個(gè)蛋白質(zhì)中有11個(gè)表達(dá)降低。見表5。表5相關(guān)蛋白點(diǎn)在正常組和治療組凝膠中的相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度3討論偏頭痛是一種常見并多發(fā)玻流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，女性的患病率為3.3%21.9%，男性為0.7%16.1%1。其臨床表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作、單側(cè)搏動(dòng)性頭痛，可伴有惡心、嘔吐、視物異常、耳鳴等病癥。偏頭痛發(fā)病機(jī)制尚不明確，西藥緩解偏頭痛的急性發(fā)作雖成效顯著，但許多藥物不良反響大，或價(jià)格昂貴。防治偏頭痛的藥物研究成為當(dāng)今一大醫(yī)學(xué)研究熱

13、點(diǎn)，開發(fā)有效而且低毒副作用的中藥，在防治偏頭痛的發(fā)作方面將有所作為。偏頭痛常見證型有肝陽上亢、痰濁上泛、瘀血阻絡(luò)和氣血虧虛7。臨床采用平肝潛陽制劑治療偏頭痛療效明顯2，但對(duì)平肝潛陽藥物治療偏頭痛的機(jī)制研究尚未見報(bào)道。平肝潛陽中藥復(fù)方由天麻、鉤藤、石決明、川芎和牡蠣等中藥組成，是由天麻鉤藤飲化裁而來。本臨床觀察結(jié)果說明，平肝潛陽中藥在減輕患者頭痛發(fā)作次數(shù)或發(fā)作持續(xù)時(shí)間、止痛、中醫(yī)病癥積分改善方面較對(duì)照組明顯，在改善肝陽上亢證主癥方面，對(duì)眩暈、煩躁易怒和面部烘熱的改善較明顯，而在頭痛和口干方面，與氟桂利嗪比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明該復(fù)方具有改善患者的臨床病癥和進(jìn)步生活質(zhì)量的優(yōu)勢(shì)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)平肝潛陽中

14、藥的不良反響較少。本研究鑒定的10個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)包括乙醇脫氫酶3、免疫球蛋白重鏈區(qū)域、中性粒細(xì)胞防御素4前體、黑素瘤相關(guān)性e2抗原、專利l339483蛋白、免疫球蛋白重鏈片斷、熱休克蛋白27、膜聯(lián)蛋白a1、硫氧還蛋白過氧化物酶2和谷胱甘肽合成轉(zhuǎn)移酶片斷。它們均與偏頭痛發(fā)生、開展親密相關(guān)，有可能是偏頭痛的相關(guān)診斷指標(biāo)。乙醇脫氫酶3是含鋅原子nad依賴的胞質(zhì)二聚體酶，可逆氧化各種醇為相應(yīng)的醛酮，是乙醇代謝的關(guān)鍵酶8。本研究發(fā)現(xiàn)偏頭痛肝陽上亢證患者乙醇脫氫酶3表達(dá)下調(diào)，經(jīng)平肝潛陽中藥干預(yù)后表達(dá)上調(diào)，說明乙醇脫氫酶3可能與偏頭痛肝陽上亢證的發(fā)病有關(guān)。中性粒細(xì)胞防御素4能激活哺乳動(dòng)物細(xì)胞的得高寧敏感鈣通

15、道9，還能通過形成上皮頂膜通道而激活氯化物的分泌10，可與嗜酸性粒細(xì)胞互相作用參與偏頭痛的發(fā)玻免疫球蛋白重鏈區(qū)域是由127個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，識(shí)別并結(jié)合特異性抗原，在機(jī)體的免疫應(yīng)答中起重要作用。本研究亦發(fā)現(xiàn)偏頭痛肝陽上亢證患者免疫球蛋白上調(diào)，經(jīng)平肝潛陽中藥干預(yù)后表達(dá)下調(diào)，說明免疫球蛋白可能參與偏頭痛肝陽上亢證的發(fā)玻谷胱甘肽存在于哺乳動(dòng)物體內(nèi)，是細(xì)胞內(nèi)最主要的巰基和含量最豐富的低分子多肽。本研究發(fā)現(xiàn)谷胱甘肽在偏頭痛肝陽上亢證患者表達(dá)下調(diào)，經(jīng)平肝潛陽中藥干預(yù)后表達(dá)上調(diào)，說明谷胱甘肽也可能參與偏頭痛肝陽上亢證的發(fā)玻膜聯(lián)蛋白a1是一類構(gòu)造相關(guān)鈣依賴的磷脂結(jié)合蛋白質(zhì)超家族。最新的研究發(fā)現(xiàn)，膜聯(lián)蛋白3可以作為腦缺血導(dǎo)致的神經(jīng)損傷的標(biāo)志物11。熱休克蛋白27屬于小分子熱休克蛋白家族，參與多種效應(yīng)反響，在機(jī)體抗損傷中起一定作用。evgrafv等12研究發(fā)現(xiàn)，熱休克蛋白的突變與進(jìn)展