核酸檢測(cè)質(zhì)量控制作業(yè)指導(dǎo)書

1、新型冠狀病毒核酸檢測(cè)質(zhì)量控制作業(yè)指導(dǎo)書1.目的控制實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性、精密度，并檢測(cè)其準(zhǔn)確度的改變，提高本室常規(guī)工作中的批間、批內(nèi)標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果的一致性，保證患者檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。2.范圍采用基因擴(kuò)增方法檢測(cè)的所有項(xiàng)目。3.職責(zé)3.1責(zé)任人臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室當(dāng)班工作人員。3.2完成時(shí)間檢測(cè)當(dāng)天完成。3.3目標(biāo)責(zé)任人需評(píng)估檢測(cè)結(jié)果，判定當(dāng)日結(jié)果是否可以被采用。.性能驗(yàn)證。在用于臨床標(biāo)本檢測(cè)前，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)由提取試劑、提取儀、擴(kuò)增試劑、擴(kuò)增儀等組成檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行必要的性能驗(yàn)證，性能指標(biāo)包括但不限于精密度（至少要有重復(fù)性）和最低檢測(cè)限。建議選用高靈敏的試劑（檢測(cè)限500拷貝/ml）。.室內(nèi)質(zhì)控。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按照

2、國家衛(wèi)生健康委辦公廳關(guān)于醫(yī)療機(jī)構(gòu)開展新型冠狀病毒核酸檢測(cè)有關(guān)要求的通知（國衛(wèi)辦醫(yī)函（202*）53號(hào)）要求規(guī)范開展室內(nèi)質(zhì)控。每批檢測(cè)至少有1份弱陽性質(zhì)控品（第三方質(zhì)控品，通常為檢出限的1.5-3倍）、3份陰性質(zhì)控品（生理鹽水）。質(zhì)控品隨機(jī)放在臨床標(biāo)本中，參與從提取到擴(kuò)增的全過程。在大規(guī)模人群篩查時(shí)，因人群流行率極低（0.1%）,一旦出現(xiàn)陽性結(jié)果，對(duì)陽性標(biāo)本采用另外一到兩種更為靈敏且擴(kuò)增不同區(qū)域的核酸檢測(cè)試劑對(duì)原始標(biāo)本進(jìn)行復(fù)核檢測(cè)，復(fù)核陽性方可報(bào)出。.室間質(zhì)評(píng)。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)常態(tài)化參加國家級(jí)或省級(jí)臨床檢驗(yàn)中心組織的室間質(zhì)評(píng)。對(duì)檢測(cè)量大以及承擔(dān)重點(diǎn)人群篩查等任務(wù)的實(shí)驗(yàn)室，要適當(dāng)增加室間質(zhì)評(píng)頻率。不按要求

3、參加室間質(zhì)評(píng)的，或室間質(zhì)評(píng)結(jié)果不合格的，或檢測(cè)結(jié)果質(zhì)量問題突出的，不得開展核酸檢測(cè)。.質(zhì)控物來源隨試劑盒提供的對(duì)照品及衛(wèi)生部臨檢中心質(zhì)控物或第三方可信質(zhì)控品。.工作流程將強(qiáng)陽性對(duì)照、臨界陽性對(duì)照、陰性對(duì)照、質(zhì)控物與待測(cè)標(biāo)本一起進(jìn)行核酸的提取并與待測(cè)標(biāo)本一起擴(kuò)增檢測(cè)。分析Ct值確認(rèn)本次實(shí)驗(yàn)的有效性。陰性對(duì)照的Ct值應(yīng)230（當(dāng)采用一個(gè)循環(huán)條件擴(kuò)增時(shí)，Ct值應(yīng)240）；強(qiáng)陽性對(duì)照的Ct值應(yīng)W20（當(dāng)采用一個(gè)循環(huán)條件擴(kuò)增時(shí)，Ct值應(yīng)W30）,臨界陽性對(duì)照的Ct值應(yīng)大于強(qiáng)陽性對(duì)照品的Ct值，并且W28（當(dāng)采用一個(gè)循環(huán)條件擴(kuò)增時(shí)，Ct值應(yīng)38）,否則該批定量結(jié)果視為失控。按照核酸檢測(cè)試劑性能指標(biāo)要求，批

4、內(nèi)精密度CT值CV5%,全省202*-2021年度新冠病毒核酸檢測(cè)室間質(zhì)評(píng)統(tǒng)計(jì)結(jié)果，各檢測(cè)試劑CT值CV均在5%以內(nèi)，檢測(cè)結(jié)果不確定度等因素，專家建議“灰區(qū)”范圍設(shè)定為陽性判定CT值5%范圍，通常以2個(gè)的值為宜。如商品化試劑盒說明書明確有“灰區(qū)”范圍，則以廠家提供的說明書為準(zhǔn)。定量檢測(cè)的四個(gè)陽性參控品都應(yīng)小于28（一個(gè)循環(huán)條件擴(kuò)增為38）o將陽性參控品1-4的濃度（拷貝數(shù)）輸入，儀器將自動(dòng)以陽性參控品濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，以其實(shí)際測(cè)得的Ct值為縱坐標(biāo)給出標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合度應(yīng)W-0.980，否則該批定量結(jié)果視為失控。采用即刻法開展室內(nèi)質(zhì)控，記錄每批次定量檢測(cè)項(xiàng)目質(zhì)控濃度的對(duì)數(shù)值、定性檢測(cè)

5、項(xiàng)目質(zhì)控物的Ct值，按5.4項(xiàng)下質(zhì)控規(guī)則分析當(dāng)天的檢測(cè)結(jié)果是否在控制限內(nèi)。即刻法質(zhì)控方法：每批質(zhì)控物只需連續(xù)測(cè)定3次后，即可對(duì)結(jié)果進(jìn)行控制分析。計(jì)算：a計(jì)算測(cè)定的均值*和標(biāo)準(zhǔn)差$。b從測(cè)定值中找出*最大值和*最小值*minoc計(jì)算$1上限和下限值。SI上限=0口-*）/sS下限二（*）/S評(píng)價(jià)：查表，將$【上限和下限與$1值比較。a當(dāng)$1上限值和下限值Vn2s時(shí)，表示處于控制范圍，可以繼續(xù)往下測(cè)定，繼續(xù)重復(fù)各項(xiàng)計(jì)算。b當(dāng)SI上限和下限值任何一個(gè)處于n2s和n3s之間時(shí)，說明改制處于2s與3s之間，處于“告警”狀態(tài)。c當(dāng)$【上限和下限值n3s時(shí)，表示該值已在3s范圍之外，屬“失控”。d質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)處

6、于“告警”和“失控”狀態(tài)應(yīng)舍去，重新測(cè)定該質(zhì)控；舍去的知識(shí)該次失控的數(shù)值，其他測(cè)定值仍繼續(xù)可用。當(dāng)測(cè)定的數(shù)字超過20次以后，即可轉(zhuǎn)入實(shí)用的常規(guī)方法（l.evey-jennings作圖法）進(jìn)行質(zhì)控。.evey-jennings質(zhì)控法基本規(guī)則：a質(zhì)控血清的測(cè)定結(jié)果95%應(yīng)落在*2s內(nèi)，如連續(xù)5次結(jié)果落在均線一側(cè)，應(yīng)查找原因。b所得各次結(jié)果不能連續(xù)5次以上在均值一側(cè)逐漸升高或降低。c所得各次結(jié)果不能連續(xù)2次落在*2s之外。d不允許有超出*3s之外的結(jié)果。8.4.4SI值表si值表nn3sn2snn3sn2snn3sn2s31.151.1592.322.11152.712.4141.491.46102

7、.412.18162.752.4451.751367112.482.33172.792.4761.941.82122.552.29182.822.572.11.94132.612.33192.852.5382.222.03142.662.37202.882.56失控后的糾正措施：停止試驗(yàn)，尋找失控原因，當(dāng)日?qǐng)?bào)告不能發(fā)出。定性檢測(cè)項(xiàng)目質(zhì)控物Ct值SI上限n3s（前20次內(nèi)）或質(zhì)控物Ct值高于*+3s（20次以后）；定量檢測(cè)項(xiàng)目質(zhì)控值SI下限川3s（前20次內(nèi)）或質(zhì)控值低于*-3s應(yīng)考慮：.檢測(cè)靈敏度下降，具體原因與糾正措施如下：提取效率低，檢查試劑是否過期、校正核酸提取溫度、校正離心機(jī)轉(zhuǎn)速、檢測(cè)

8、RNA項(xiàng)目應(yīng)消除RNA核酸酶的污染。.擴(kuò)增效率低，檢查試劑是否過期、擴(kuò)增儀狀態(tài)與功能的校正、Taq酶是否失效（失效應(yīng)更換新的Taq酶，檢測(cè)RNA項(xiàng)目逆轉(zhuǎn)錄酶是否失效，重新提取RNA、更換新的試劑或新的批號(hào)的試劑等）。.不明原因：暫時(shí)更換為“三證”齊全的其他廠家試劑。.5.2定性檢測(cè)項(xiàng)目質(zhì)控物Ct值SI下限n3s（前20次內(nèi)）或質(zhì)控物Ct值低于*-3s（20次以后）；定量檢測(cè)項(xiàng)目質(zhì)控值SI上限川3s（前20次內(nèi)）或質(zhì)控值高于*+3s（20次以后），應(yīng)考慮污染所致，具體原因及糾正如下：.交叉污染：實(shí)驗(yàn)過程中不斷更新手套；.實(shí)驗(yàn)材料污染：檢查陰性對(duì)照本身是否污染、長時(shí)間紫外線照射、加樣器再次高壓消毒

9、、用含有效氯2000mg/L的二溟海因清潔實(shí)驗(yàn)臺(tái)面和儀器表面、更換新的試劑或新批號(hào)的試劑。.氣溶膠污染：快速更換室內(nèi)空氣，迅速排出室內(nèi)氣溶膠；離心后等5min打開EP管蓋，防治氣溶膠形成。.污染不能排出：暫時(shí)更換為“三證”齊全的其他廠家試劑。.6在F*FYPCR-31/1臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)量控制登記表中記錄數(shù)據(jù)；如有失控，應(yīng)在F*FYPCR-31/2臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)量控制失控記錄表中填寫失控分析報(bào)告。.7每月底將質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)匯總、制圖。9引用的表格和文件F*FYPCR-31/1臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)量控制登記表F*FYPCR-31/2臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)量控制失控記錄表PIV5核酸檢測(cè)能力比對(duì)作業(yè)指導(dǎo)書一、樣品本項(xiàng)能力比對(duì)提供給各參加單位樣品5份（裝量為500|11），采用1.5mlEP管包裝。樣品保存條件為：-2（TC。樣品收到后應(yīng)避免反復(fù)凍融。二、檢測(cè)本項(xiàng)能力比對(duì)的檢測(cè)依據(jù)為PIV5RT-PCR檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP）o檢測(cè)結(jié)果以陰性或陽性表示。三、結(jié)果