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文檔簡介
1、實驗一 細(xì)菌形態(tài)觀察和染色實驗一、目的要求學(xué)習(xí)微生物涂片、染色基本技術(shù)和無菌操作技術(shù);初步掌握革蘭氏染色法;鞏固顯微鏡(油鏡)的使用方法;初步認(rèn)識細(xì)菌的形態(tài)特征。二、基本原理革蘭氏染色程序結(jié)晶紫初染碘液媒染乙醇脫色番紅復(fù)染最終結(jié)果原理革蘭氏陽性菌(G+)藍(lán)紫色藍(lán)紫色藍(lán)紫色藍(lán)紫色藍(lán)紫色細(xì)胞壁肽聚糖層呈網(wǎng)狀,壁厚、類脂含量低,乙醇脫色時細(xì)胞壁脫水、網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)孔徑縮小,透性降低,結(jié)晶紫碘的復(fù)合物仍保留在細(xì)胞內(nèi)革蘭氏陰性菌(G-)藍(lán)紫色藍(lán)紫色無色紅色紅色細(xì)胞壁肽聚糖層薄、類脂含量高,乙醇脫色時類脂質(zhì)被乙醇溶解,細(xì)胞壁透性增大,結(jié)晶紫碘的復(fù)合物較易洗脫出來三、器材菌種 大腸桿菌約24h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物,
2、金黃色葡萄球菌約24h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物,枯草芽孢桿菌1224h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物。染色劑 革蘭氏染色液。儀器或者其他用具 顯微鏡,酒精燈,載玻片,接種環(huán),雙層瓶(內(nèi)裝香柏油和二甲苯),擦鏡紙,生理鹽水等 涂片 涂成薄膜 干燥 自然干燥 固定 通過火焰23次 結(jié)晶紫初染 1-2min 碘液媒染 1min 乙醇脫色 至流出的乙醇無紫色 番紅復(fù)染 2min 油鏡鏡檢觀察。四、操作步驟混合涂片涂色 按上述方法,在同一載玻片上,以大腸桿菌和枯草芽孢桿菌或大腸桿菌和金黃色葡萄球菌作混合涂片、染色、鏡檢進(jìn)行比較。現(xiàn)場演示 1 載玻片要潔凈無油跡;滴生理鹽水和取菌不宜過多;涂片要涂抹均勻,不宜過厚; 2 熱固定溫度不宜過高,否則會改變甚至破壞細(xì)胞形態(tài); 3 染色時,每一步驟后都要立即水洗; 4 革蘭氏染色結(jié)果是否正確,乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。脫色不足,陰性菌被誤染成陽性菌,脫色過度,陽性菌被誤染成陰性菌,脫色時間一般2030S。注意:五、實驗報告 結(jié)果 列表簡述3株細(xì)菌的染色觀察結(jié)果。 畫出各菌的形狀和革蘭氏染色顏色反
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