四肽化合物CMS030抗移植排斥作用的實(shí)驗(yàn)研究

1、四肽化合物CMS030抗移植排擠作用的實(shí)驗(yàn)研究studynthesuppressiveeffetsfs030tetraernallgraftrejetininiedepartentfiunlgy,tianjinedialuniversity,tianjin300070，hina1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動物及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)分組1.2主要試劑1.3體外t淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)1.4體外混合淋巴細(xì)胞反響lr實(shí)驗(yàn)1.5小鼠心肌移植實(shí)驗(yàn)取balb/受體小鼠，在耳廓背側(cè)中線下1/3處做一個(gè)3橫切口，從切口向耳尖方向鈍性別離皮下組織，制成4深的囊腔作為植床。取出新生57bl/6j乳鼠心臟，置hanks液中排空心腔內(nèi)余血，

2、植入植床內(nèi)，輕壓囊腔上方的皮膚，排盡空氣，使心肌與周圍皮膚嚴(yán)密接觸。術(shù)后第6日開場，用心電圖儀逐日檢測移植心臟的心電圖，連續(xù)3日無心電定為手術(shù)失敗，不計(jì)入統(tǒng)計(jì)，心電消失定位排擠終點(diǎn)，記錄移植物生存時(shí)間3。1.6小鼠皮膚移植實(shí)驗(yàn)將57bl/6j受體小鼠背部用8%硫化鈉溶液脫毛，次日脫毛部位消毒后剪去11的皮片，創(chuàng)面經(jīng)壓迫止血后作為植床。取同性別balb/小鼠尾部皮膚作為移植物平鋪于植床，用創(chuàng)可貼和醫(yī)用膠布通過胸腹部環(huán)繞包扎，使皮片和植床嚴(yán)密接觸。術(shù)后第8日撤除包扎，逐日觀察移植物顏色、硬度、結(jié)痂和脫落情況，以皮片變黑變硬，結(jié)痂脫落定為排擠終點(diǎn)，記錄移植物生存時(shí)間4。1.7皮膚移植受體小鼠t淋巴細(xì)

3、胞增殖實(shí)驗(yàn)皮膚移植受體小鼠于給藥完畢后次日，無菌別離脾臟，分別制成脾細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為4106l-1，96孔板中每孔參加100l，na刺激組參加100lna終濃度為5g/l，對照組參加100lrpi1640。每孔總體積200l，設(shè)4個(gè)平行孔。96孔板置37、5%2培養(yǎng)箱中孵育72小時(shí)，tt法檢測d570值。刺激指數(shù)sina刺激組d值均數(shù)對照組d值均數(shù)。1.9統(tǒng)計(jì)方法2結(jié)果2.1s030體外對t淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的影響淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)是體外檢測藥物對淋巴細(xì)胞影響的常見方法，na可以特異性刺激t淋巴細(xì)胞形成淋巴母細(xì)胞而促進(jìn)增殖，tt法可以檢測淋巴細(xì)胞的增殖程度。s030藥物濃度為0.3240g

4、/l時(shí)，在體外可以明顯抑制na誘導(dǎo)的t淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，與陰性對照組比較，p0.01，見圖1。2.2s030體外對lr的影響lr是模擬真實(shí)體內(nèi)細(xì)胞免疫反響的一種實(shí)驗(yàn)方法，可用于評價(jià)機(jī)體t細(xì)胞對組織相容性抗原的特異性免疫應(yīng)答功能，提供器官移植的體外根據(jù)6。s030濃度為1.640g/l時(shí)，在體外可以抑制小鼠混合淋巴細(xì)胞反響，與陰性對照組比較，p0.01，見圖2。2.3s030對小鼠心肌移植物生存時(shí)間的影響2.4s030對小鼠皮膚移植的影響s030給藥劑量10、2g/kgd時(shí)能延長小鼠皮膚移植物平均生存時(shí)間，與生理鹽水組比較，p0.01，見圖4。2.5s030對皮膚移植受體小鼠t淋巴細(xì)胞增殖的影響細(xì)胞

5、免疫應(yīng)答在同種移植排擠反響中發(fā)揮主要作用，受體t細(xì)胞直接識別供者抗原提呈細(xì)胞外表的同種抗原，發(fā)生激活和增殖，d4+t細(xì)胞介導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反響性炎癥，d8+t細(xì)胞特異性殺傷移植物細(xì)胞。s030對na刺激的t淋巴細(xì)胞增殖有一定的抑制作用，與生理鹽水組比較，p0.01，見圖5。3討論器官移植已成為治療終末期疾病的主要手段之一，近30年來，器官移植的開展已獲得令人矚目的成績，更為平安有效的免疫抑制劑的不斷推出及臨床應(yīng)用起了重要作用，21世紀(jì)的器官移植領(lǐng)域仍然是免疫抑制劑為主的時(shí)代9。特異性針對t細(xì)胞趨化、活化、分化等各個(gè)環(huán)節(jié)的免疫抑制劑是抗移植排擠藥物研究的重要開展方向。多肽類藥物可以特異性模擬或阻斷蛋白質(zhì)間互相作用，可以發(fā)揮特異性的免疫抑制作用，如小肽類藥物fuzen可以抑制病毒與淋巴細(xì)胞的交融，已經(jīng)用于治療hiv。二肽化合物dp是分枝桿菌細(xì)胞壁中具有免疫活性的最小構(gòu)造單位，能激活單核巨噬細(xì)胞、nk細(xì)胞，發(fā)揮殺傷腫瘤細(xì)胞的作用10，11。s030在體外能顯著抑制na誘導(dǎo)的t淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，提示s030可以抑制t淋巴細(xì)胞的非特異性增殖，是一種具有t淋巴細(xì)胞抑制作用的免疫活性藥物。s030在體外lr實(shí)驗(yàn)中顯示較強(qiáng)的抑制t淋巴細(xì)胞增殖的作用，說明s030可以抑制特異性的t淋巴細(xì)胞功能，降低特異性抗原決定簇對t淋巴細(xì)胞的活化。體外實(shí)驗(yàn)提示，它可能對t細(xì)胞免疫功能和同種移植排擠反響有一定