DHA和EPA在輔助治療癌癥中的最佳比例的探究

1、重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 申 請(qǐng) 書 項(xiàng)目名稱：DHA和EPA在輔助治療癌癥中的最佳比例的探究申 請(qǐng) 者： 賀強(qiáng) 陳進(jìn) 杜志鵬 艾秋池 陳旭指導(dǎo)教師： 彭惠明單 位：實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心電 話請(qǐng)日期 ：2010年 12月20 日重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)管理中心研究項(xiàng)目項(xiàng)目名稱DHA和EPA在輔助治療癌癥中的最佳比例的探究所屬學(xué)科申請(qǐng)金額 3500元起止時(shí)間2010年 12月至 2011 年 9月項(xiàng)目性質(zhì)學(xué)生自選研究課題型或?qū)W生參與科研活動(dòng)型（選其一）科研小組成員姓名性別年級(jí)電話及電子郵箱賀強(qiáng)男09heqiang199091陳進(jìn)男09級(jí)13650512

2、809陳旭男09杜志鵬男09秋池男09導(dǎo)教師研究?jī)?nèi)容和意義簡(jiǎn)介(400500字)研究發(fā)現(xiàn)，作為一般乳制品和保健品常用成分的DHA和EPA有抗擊癌癥的功效，而且它們?cè)谂c某些抗癌藥物，如三硫化二砷，紫杉醇等聯(lián)合起來作用時(shí)，使得藥物的療效有了大幅地提升！但是當(dāng)前只研究了DHA和EPA分別同抗癌藥物聯(lián)合后的療效，并沒有將DHA和EPA以及抗癌藥物三者共同聯(lián)合起來研究。我們猜想，將三者聯(lián)合起來會(huì)有更好的療效，而且DHA和EPA不同的比例和濃度對(duì)療效有不同的提升。在本實(shí)驗(yàn)中，我們把培養(yǎng)皿內(nèi)的白血病細(xì)胞和被植入白血病瘤塊的小鼠作為

3、實(shí)驗(yàn)對(duì)象，將DHA和EPA以及三硫化二砷制成藥劑，通過改變DHA和EPA的相對(duì)比例和它們?cè)谒巹┲械暮浚龀霰壤荻群秃刻荻惹€，從而得到DHA和EPA在輔助三硫化二砷治療癌癥過程中的最佳比例和含量。需解決的問題：腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，腫瘤的移植，腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)方法。本實(shí)驗(yàn)的意義：三硫化二砷因有較強(qiáng)的毒副作用，在治療癌癥時(shí)其治療范圍和用量非常有限，如果本實(shí)驗(yàn)獲得成功，那么三硫化二砷單位濃度內(nèi)的癌細(xì)胞殺傷效果將得到提升，從而降低因?qū)ζ涫褂眠^量而對(duì)患者造成的傷害，這也為擴(kuò)大三硫化二砷的腫瘤治療范圍創(chuàng)造可能；DHA和EPA使用過量也會(huì)對(duì)人體有害，實(shí)驗(yàn)的結(jié)果能確定一個(gè)合適的DHA和EPA用量，降低它們給患

4、者帶來的副作用；此外，抗癌藥物的價(jià)格都不斐，而本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果對(duì)降低藥物的生產(chǎn)成本和價(jià)格有幫助，從而減輕患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)；本實(shí)驗(yàn)結(jié)果還能為以后DHA和EPA聯(lián)合其他抗癌藥物的研究提供依據(jù)。立論依據(jù)(項(xiàng)目的研究意義和國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀分析，附參考文獻(xiàn))DHA和EPA：均為n-3多烯不飽和脂肪酸，是人體必需的高度不飽和脂肪酸。因?yàn)槿梭w不能自行合成，只能從食物中攝取，在深海魚油中含量較高。其分子結(jié)構(gòu)式如下： （D H A） （E P A）純 EPA和DHA均無色、無味，常溫下呈液態(tài)，且具脂溶性，易溶于有機(jī)溶劑，都不溶于水，熔點(diǎn)分別為一5453和-455-441，所以在低溫下仍然保持較高的流動(dòng)性。目前，DHA和

5、EPA主要作為營(yíng)養(yǎng)保健品和嬰幼兒奶粉中的主要成分，備受廣大消費(fèi)者的青睞，效果良好。但若攝入量過多也會(huì)產(chǎn)生一些副作用，如體重減輕、血小板減少、頭暈、惡心等一系列不良反應(yīng)。DHA攝入過量可導(dǎo)致免疫力低下，而之前鬧得沸沸揚(yáng)揚(yáng)的圣元奶粉致嬰幼兒性早熟，據(jù)說也與其中的EPA有關(guān)，但目前還無足夠的證據(jù)。目前已發(fā)現(xiàn)EPA和DHA的生理作用有：促進(jìn)腦、視網(wǎng)膜形成和延緩腦的衰老；防止心血管疾病；抗炎、抑制過敏反應(yīng)；特別是抑制腫瘤的生長(zhǎng)。20世紀(jì)紀(jì)70年代人們對(duì)格陵蘭愛斯基摩人和阿拉斯加地區(qū)居民進(jìn)行飲食與疾病關(guān)系的流行病學(xué)調(diào)查時(shí)發(fā)現(xiàn)，雖然他們總脂肪和多烯不飽和脂肪酸(PUFA) 的攝取量與西方國(guó)家居民的平均水平相

6、近，但幾種常見腫瘤的發(fā)病率卻遠(yuǎn)低于西方國(guó)家。分析攝人脂肪酸的構(gòu)成情況發(fā)現(xiàn)其中n一3 PUFA占較大比例。由此，n一3 PUFA，特別是DHA和EPA的抗癌作用引起了國(guó)內(nèi)外學(xué)者關(guān)注，成為抗癌研究中的新熱點(diǎn)。EPA和DHA抑制腫瘤生長(zhǎng)的機(jī)理：1.亞油酸能促進(jìn)癌癥的發(fā)生，而DHA和EPA能降低腫瘤從血液中提取的亞油酸的數(shù)量。所有的-6系列脂肪酸都會(huì)促進(jìn)癌腫的生長(zhǎng)，但目前為止亞油酸的作用是最強(qiáng)的，很少數(shù)量的亞油(油食品)酸就能提高癌腫的生長(zhǎng)速度，其數(shù)量越多，癌腫生長(zhǎng)速度增加得就越快。DHA和EPA能降低癌腫從血液中提取的亞油酸的數(shù)量，使癌腫戒除了一種其非常需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，以這種方法鈍化了有促進(jìn)癌癥發(fā)生

7、功效的亞油酸的作用。2.DHA和EPA能抑制腫瘤細(xì)胞內(nèi)環(huán)氧酶一2的活性，減少前列腺素的產(chǎn)生，從而發(fā)揮對(duì)腫瘤的抑制作用。腫瘤細(xì)胞內(nèi)環(huán)氧酶-2的活性明顯增強(qiáng)，而環(huán)氧酶-2的表達(dá)可增加前列腺素的合成，可導(dǎo)致前列腺素的含量明顯高于正常組織。前列腺素能誘導(dǎo)細(xì)胞增殖并刺激能抑制細(xì)胞凋亡的Bcl-2蛋白的表達(dá)，因而使細(xì)胞增殖和凋亡失衡，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。前列腺素也能促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)降解，產(chǎn)生血栓烷促進(jìn)血小板聚集，有利于癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。DHA和EPA能夠抑制魚油組磷脂酶 A2(PLA2)、磷脂酰肌醇-磷脂酶C(PI-PIC)以及COX-2的活性。PLA2能在環(huán)氧酶-2的作用下生成前列腺素，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、侵襲

8、和轉(zhuǎn)移，PI-PLC激活后能夠促進(jìn)瘤細(xì)胞的增殖。3.DHA和EPA阻止了細(xì)胞表面黏連分子的作用，并阻礙溶解基底膜所必須的膠原酶的產(chǎn)生，讓癌細(xì)胞無法滲透到血管和淋巴中。癌細(xì)胞要想從原發(fā)部位擴(kuò)散到其他部位，就必須滲透到血管及器官周圍的基底膜中，DHA和EPA可阻止細(xì)胞表面黏連分子的作用，缺少了這種必要的“抓鉤”癌細(xì)胞就不容易黏附在基底膜上，就算癌細(xì)胞將自己黏在了基底膜上，DHA和EPA也還可以阻止溶解基底膜所必須的膠原酶的產(chǎn)生，讓癌細(xì)胞無法滲透進(jìn)去。 4.DHA和EPA 可經(jīng)過一定途徑結(jié)合到癌細(xì)胞線粒體膜上，加重其對(duì)活性氧的敏感性，引起癌細(xì)胞線粒體膜電位下降，使癌細(xì)胞發(fā)生凋亡。更為重要的是，DHA

9、或者EPA與經(jīng)典抗癌藥物（如三硫化二砷，阿霉素，紫杉醇等）聯(lián)合治療時(shí)，其療效比它們單獨(dú)使用時(shí)有了大幅度的提高！其主要機(jī)理是：在與藥物聯(lián)合治療程中，DHA和EPA改變了腫瘤細(xì)胞膜磷脂的組成，增強(qiáng)了藥物的滲透作用，從而提高了單位濃度藥物的療效。 與此同時(shí)，DHA和EPA改變了過氧化底物和抗氧化物之間的平 衡，使腫瘤組織對(duì)脂質(zhì)過氧化更為敏感，從而增強(qiáng)藥物的毒性。本實(shí)驗(yàn)主要研究與三硫化二砷聯(lián)用的作用。三硫化二砷（As2S3）：為紅色或黃色單斜晶體，微溶于水，溶于乙醇和堿溶液，通常用作顏料、還原劑、藥物等。天然的三硫化二砷又稱作雌黃。其結(jié)構(gòu)與著名的有毒物質(zhì)砒霜（As2O3）比較相似，因此它也有比較強(qiáng)的毒

10、副作用，在一定條件下，可以轉(zhuǎn)化為砒霜，方程式如下： As2S3 + O2 As2O3 + SO230多年前，人們發(fā)現(xiàn)三硫化二砷(As2S3)通過促使細(xì)胞內(nèi)活性氧(R0S)的累積誘導(dǎo)凋亡，從而對(duì)多種白血病細(xì)胞產(chǎn)生作用。但因其在有效血藥濃度時(shí)毒副作用較大，目前還僅限用于急性早幼粒細(xì)胞性白血病的治療中。目前As2S3治療白血病的現(xiàn)狀及進(jìn)一步研究的原因：Sturlan S等在其實(shí)驗(yàn)中將l u mol As2S3和25 umol DHA作用于HL-60細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：As2S3和DHA分別作用于HL一60細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞活力分別下降了142 %和3082% ，而二者聯(lián)合使用可使HL一60細(xì)胞活力下降870

11、%。并得出DHA輔助As2S3治療白血病的機(jī)理：DHA結(jié)構(gòu)中含有多個(gè)雙鍵結(jié)構(gòu)，在體內(nèi)氧化物質(zhì)的壓力下發(fā)生脂質(zhì)過氧化，As2S3作用下產(chǎn)生的R0S加強(qiáng)這種作用，并導(dǎo)致過氧化產(chǎn)物和R0S的進(jìn)一步累積，引發(fā)細(xì)胞線粒體膜電位的下降，細(xì)胞色素C被釋放出來，隨后接連聯(lián)激活Caspase家族的若干蛋白質(zhì)，最終發(fā)生細(xì)胞凋亡，這提示與DHA的聯(lián)合作用，有可能降低As2S3的有效治療濃度，擴(kuò)大其對(duì)白血病的治療作用譜。但是，當(dāng)前的研究中，只是研究了DHA和EPA分別同抗癌藥物聯(lián)合后的療效，并沒有將DHA和EPA以及抗癌藥物三者共同聯(lián)合起來作用的研究。我們可以有根據(jù)地猜想：將、和As2S3三者聯(lián)合起來會(huì)有更好的療效。

12、我們?cè)诤Ｑ罂茖W(xué)雜志上看到一篇題為真鯛仔稚魚微粒飼料中DHA與EPA最佳比例的研究的報(bào)告：飼料中的DHA和EPA的比例會(huì)直接影響到海水仔稚魚的生長(zhǎng)速度、成活率、應(yīng)激能力和體內(nèi)相關(guān)成分。而目前國(guó)內(nèi)外還沒有在對(duì)臨床上對(duì)用于輔助治療白血病的DHA和EPA的最佳比例的研究，由此我們想到：既然DHA和EPA的比例對(duì)魚類的生長(zhǎng)有影響，那會(huì)不會(huì)對(duì)輔助治療白血病也是如此呢？因此我們提出猜想：DHA和EPA在輔助藥物治療的過程中，癌癥療效仍然有上升的空間，DHA和EPA兩者不同的比例，不同的濃度，對(duì)抗癌藥物療效的提升有不同的潛力。項(xiàng)目研究的意義：三硫化二砷因有較強(qiáng)的毒副作用，在治療癌癥（尤其是血癌）時(shí)其治療范圍和

13、用量非常有限，如果本實(shí)驗(yàn)獲得成功，那么三硫化二砷單位濃度內(nèi)的癌細(xì)胞殺傷效果將得到提升。因此以后的臨床過程中，在保證療效的前提下，治療者可以減少三硫化二砷的使用量，從而減輕其在治療過程中給患者正常細(xì)胞帶來的殺傷，這樣就能更健康，更人性化地治療癌癥；同時(shí)，三硫化二砷的腫瘤治療范圍也將得到擴(kuò)大；此外，DHA和EPA使用過量會(huì)降低細(xì)胞粘黏度和脂肪的釋放能力，從而可能引起凝血功能不足和脂肪肝，所以實(shí)驗(yàn)的結(jié)果也能確定一個(gè)合適的DHA和EPA用量，降低它們給患者帶來的副作用；從患者作為消費(fèi)者的角度來看，抗癌藥物的價(jià)格都不斐，而本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果能減少藥物的使用量，從而降低藥物的生產(chǎn)成本和價(jià)格，減輕患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

14、此外，實(shí)驗(yàn)結(jié)果還能為以后DHA和EPA聯(lián)合其他抗癌藥物的研究提供依據(jù)參考文獻(xiàn)：法發(fā)現(xiàn)補(bǔ)充DHA脂肪酸可增強(qiáng)癌癥放療效果，中科院網(wǎng)，2007-7-20魚油能夠?qū)拱柎暮ＤY，新顧問網(wǎng)，2009-8-31 -Amyloid Oligomers Induce Phosphorylation of Tau and Inactivation of Insulin Receptor Substrate via c-Jun N-Terminal Kinase Signaling: Suppression by Omega-3 Fatty Acids and Curcumin，Greg Cole，Journ

15、al of Neuroscience雜志，2009-7-15 omega-3脂肪酸可延緩癌癥發(fā)展，甚至可避免癌癥轉(zhuǎn)移，智利第三版時(shí)報(bào)，2010-11-17魚油可以防止乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移到骨， HYPERLINK /science/journal/0006291X 生化和生物物理研究通訊 HYPERLINK /science?_ob=PublicationURL&_tockey=%23TOC%236713%232010%23995979995%232693749%23FLA%23&_cdi=6713&_pubType=J&view=c&_auth=y&_acct=C000051998&_versio

16、n=1&_urlVersion=0&_userid=1205919&md5=b904b4ff047e08feeb8b3b49cf47158c 卷402，第4期，2010-11-26 DHA和EPA的抗癌機(jī)制研究進(jìn)展，劉艷，預(yù)防醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)信息 2004年3月第1O卷第2期走近DHA，劉瑩，大學(xué)化學(xué)第25卷增刊，2010-4淺談EPA和DHA的生理作用，趙春艷，西藏科技2010年7期(總第208期)二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸研究的綜述，丁兆坤，張海柱，徐友卿，中國(guó)科技論文在線，2007年2月第2卷第2期真鯛仔稚魚微粒飼料中DHA與EPA最佳比例的研究，劉鏡恪,陳曉琳,周利,霽霖，海洋科學(xué)2004年

17、第28卷第2期二、研究方案1.研究目標(biāo)、研究?jī)?nèi)容、研究方法： 1.1 研究目標(biāo):將DHA、EPA和三硫化二砷組成混合藥劑，使其作用于培養(yǎng)皿中的血癌細(xì)胞和小鼠瘤塊的相關(guān)部位，探究作為抗癌輔助藥物的EPA、DHA的最佳比例及在最佳比例下的DHA、EPA的最佳濃度。1.2 研究?jī)?nèi)容：1.2.1 血癌細(xì)胞的培養(yǎng)及患血癌小鼠模型的建立：將取得的血癌瘤塊注入小鼠的皮下，待瘤塊長(zhǎng)大到一定體積后，選取一只小鼠，剝出瘤組織，進(jìn)行體外培養(yǎng)，得到血癌細(xì)胞，其余小鼠作為活體實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象。1.2.2 生長(zhǎng)周期的觀測(cè)（細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)組相關(guān)）：取適量血癌細(xì)胞在一個(gè)培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，在不同的時(shí)間段檢測(cè)其生長(zhǎng)情況，記錄相關(guān)數(shù)據(jù)，大致

18、確定穩(wěn)定增長(zhǎng)期。1.2.3 實(shí)驗(yàn)相關(guān)處理： A.細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)處理：一個(gè)實(shí)驗(yàn)組（每組十個(gè)培養(yǎng)皿）及一個(gè)對(duì)照組（一個(gè)培養(yǎng)皿）在上述已加入基底物的培養(yǎng)皿中植入等量的血癌細(xì)胞，待生長(zhǎng)一段時(shí)間后，在各個(gè)實(shí)驗(yàn)組中分別加入含不同比例EPA和DHA的混合藥劑（EPA+DHA+三硫化二砷），在適宜條件下進(jìn)行培養(yǎng)。 B.活體小鼠實(shí)驗(yàn)處理： 一個(gè)實(shí)驗(yàn)組（二十只小鼠，雌雄各半，）及一個(gè)對(duì)照組（兩只小鼠，雌雄各半），選取已建立實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷男∈鬄檠芯繉?duì)象，對(duì)實(shí)驗(yàn)組小鼠分別注入含不同比例EPA和DHA的混合藥劑（EPA+DHA+三硫化二砷），再將小鼠置于適宜條件下飼養(yǎng)。1.2.4 檢測(cè):通過對(duì)1.2.2中生長(zhǎng)曲線的分析，選取

19、一個(gè)處于穩(wěn)定增長(zhǎng)期的時(shí)間點(diǎn)，并在此時(shí)間點(diǎn)用MTT比色法對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)組和相應(yīng)對(duì)照組的每一個(gè)培養(yǎng)皿的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，并記錄相關(guān)數(shù)據(jù)。而對(duì)于活體小鼠實(shí)驗(yàn)組，在標(biāo)準(zhǔn)時(shí)間點(diǎn)，對(duì)小鼠的相關(guān)部位進(jìn)行腫瘤切片技術(shù)處理，獲取實(shí)驗(yàn)信息，統(tǒng)計(jì)并記錄相關(guān)數(shù)據(jù)。1.2.5 數(shù)據(jù)處理： a.細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)組：用醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析并處理所得到的數(shù)據(jù)，繪制“吸光度EPA和DHA的比例”曲線，再對(duì)曲線分析得出細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)組的初級(jí)最佳比例。得到初級(jí)最佳比例后，在該比例區(qū)域內(nèi)對(duì)其進(jìn)行“放大”，即把其分成九組更精細(xì)的比例組，用18只小鼠（雌雄各半）再次進(jìn)行A的實(shí)驗(yàn)處理，得出細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組的最佳比例。 B.活體小鼠實(shí)驗(yàn)組：用醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析并

20、處理所得到的數(shù)據(jù)，繪制“鏡下單位面積癌細(xì)胞數(shù)EPA和DHA的比例”曲線，再對(duì)曲線分析得出活體小鼠實(shí)驗(yàn)組的最佳比例的大致范圍，在此范圍內(nèi)再分為更為精細(xì)的九組，再按B實(shí)驗(yàn)處理，進(jìn)行“放大”實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步得出活體小鼠實(shí)驗(yàn)組的最佳比例。1.2.6 二期實(shí)驗(yàn)處理：首先復(fù)制“1.2.3 實(shí)驗(yàn)相關(guān)處理”中A、B處理步驟的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，在取得的最佳EPA、DHA比例下，通過改變EPA和DHA的總體濃度，對(duì)實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行上述（A、B處理步驟、檢測(cè)、數(shù)據(jù)處理）操作后，大致得出EPA和DHA的最佳總體濃度的范圍，在這個(gè)范圍內(nèi)再分為更為精細(xì)的九組，按上述相同的處理進(jìn)行放大實(shí)驗(yàn)，最終分別得出在最佳的DHA和EPA比例下，

21、體外和體內(nèi)EPA和DHA的最佳總體濃度。2.擬解決的關(guān)鍵問題：1）腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)2) 腫瘤塊的體內(nèi)植入3）藥劑的配置4）MTT比色法對(duì)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)技術(shù) 5）活體小鼠腫瘤切片技術(shù)及相關(guān)計(jì)數(shù)操作3.研究技術(shù)線路：(見下頁(yè))在最佳比例的大致范圍內(nèi)細(xì)化分組，重復(fù)以上實(shí)驗(yàn)，得出EPA、DHA最佳比例獲取血癌腫瘤細(xì)胞在最佳比例的大致范圍內(nèi)細(xì)化分組，重復(fù)以上實(shí)驗(yàn)，得出EPA、DHA最佳比例獲取血癌腫瘤細(xì)胞植入小鼠皮下體外實(shí)驗(yàn)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)移植到生長(zhǎng)觀察培養(yǎng)皿移植到實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)皿細(xì)胞觀測(cè)其生長(zhǎng)周期細(xì)胞移植到對(duì)照組培養(yǎng)皿細(xì)胞取出部分小鼠瘤塊放入培養(yǎng)皿中處理剩余小鼠分為實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組組，雌雄各半培養(yǎng)一段時(shí)間加入三硫化二

22、砷及不同比例的DHA、EPA加入等量三硫化二砷實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組加入三硫化二砷及不同比例的DHA、EPA加入等量三硫化二砷培養(yǎng)一段時(shí)間檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的數(shù)目統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)并繪圖討論并得出EPA、DHA最佳比例大致范圍第一期實(shí)驗(yàn)在最佳濃度的大致范圍內(nèi)進(jìn)行放大實(shí)驗(yàn)，得出EPA、DHA在最佳比例下的最佳濃度得出DHA、EPA在最佳比例下的最佳濃度大致范圍在最佳濃度的大致范圍內(nèi)進(jìn)行放大實(shí)驗(yàn)，得出EPA、DHA在最佳比例下的最佳濃度得出DHA、EPA在最佳比例下的最佳濃度大致范圍加入三硫化二砷及最佳比例下不同濃度的DHA、EPA加入等量三硫化二砷加入三硫化二砷及最佳比例下不同濃度的DHA、EPA加入等量三硫化二砷對(duì)照組

23、檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的數(shù)目統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)并繪圖培養(yǎng)一段時(shí)間培養(yǎng)一段時(shí)間移植到實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)皿細(xì)胞移植到對(duì)照組培養(yǎng)皿細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組取出部分小鼠瘤塊放入培養(yǎng)皿中處理剩余小鼠分為實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組，雌雄各半體外實(shí)驗(yàn)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)植入小鼠皮下獲取血癌腫瘤細(xì)胞第二期實(shí)驗(yàn)4.可行性分析：1）本實(shí)驗(yàn)所需要的藥物EPA和DHA及三硫化二砷均可聯(lián)系廠家獲得。藥物的配制也屬于基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)的內(nèi)容，相應(yīng)的器皿和檢測(cè)儀器以及小鼠均可由實(shí)驗(yàn)中心提供。2)腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)、MTT比色法技術(shù)、活體小鼠腫瘤切片技術(shù)及相關(guān)鏡下細(xì)胞計(jì)數(shù)操作均可在老師的指導(dǎo)下實(shí)現(xiàn)。3）該實(shí)驗(yàn)課題具有創(chuàng)新性以及社會(huì)實(shí)用價(jià)值，研究方法，技術(shù)路線，實(shí)驗(yàn)方案均符合科學(xué)原理。5.技術(shù)關(guān)鍵： 1

24、）腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) 2）MTT比色法 3）活體小鼠腫瘤切片技術(shù)及相關(guān)腫瘤計(jì)數(shù)操作6.研究工作進(jìn)度安排：2011.3.12011.3.14 聯(lián)系廠家購(gòu)買實(shí)驗(yàn)所需藥物。20113.152011.3.30A：練習(xí)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，熟悉MTT比色法，腫瘤切片技術(shù)的操作B：確定正式實(shí)驗(yàn)時(shí)各實(shí)驗(yàn)組的混合藥劑中EPA和DHA的比例，細(xì)化實(shí)驗(yàn)的分工安排。2011.4.12011.6.6A：進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，取得數(shù)據(jù)。B：進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，得出結(jié)論。2011.6.72011.7.7對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行總結(jié)，撰寫結(jié)題報(bào)告。7.本實(shí)驗(yàn)特色和創(chuàng)新：研究方向的創(chuàng)新：DHA和EPA對(duì)癌癥有良好的輔助治療作用，而且DHA和EPA本身也有一定

25、的抗癌功效。但是目前還沒有對(duì)于DHA和EPA在輔助治療癌癥中的最佳比例及最佳比例下最佳用量的探究。本實(shí)驗(yàn)將填補(bǔ)這方面的空白，為以后的研究提供參考數(shù)據(jù)。研究過程的創(chuàng)新：本次試驗(yàn)采用三種藥物聯(lián)合實(shí)驗(yàn)，分兩期進(jìn)行，不同期實(shí)驗(yàn)交換研究變量，而且不同變量之間存在緊密聯(lián)系，二期實(shí)驗(yàn)變量由一期實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果確定，這樣可以更科學(xué)、更全面地分析DHA、EPA的輔助作用，以便達(dá)到更好的實(shí)用價(jià)值。課題意義：如果本實(shí)驗(yàn)獲得成功，將為下一步臨床實(shí)驗(yàn)提供可能，從而為臨床上抗癌藥物的劑量選擇提供一個(gè)可靠的參考數(shù)據(jù)，提高藥物治療效率，在一定程度上為更為人性化的癌癥藥物治療做出一點(diǎn)貢獻(xiàn)。8.預(yù)期研究結(jié)果： 1）不同比例的EPA和DHA在輔助藥物治療癌癥的過程中效果一樣。2）不同比例的EPA和DHA在輔助藥物治療癌癥的過程中效果存在無規(guī)律性差異，但無最佳比例。 3）不同比例的EPA和DHA在輔助藥物治療