小鼠骨髓染色體制備和觀察培訓課件

1、小鼠骨髓染色體制備和觀察小鼠骨髓染色體制備和觀察3、實驗材料實驗動物健康小鼠(Mus musculus 2n=40)，體重約1820g，雌雄不限。 試劑 甲醇、冰乙酸、石炭酸品紅、秋水仙素、KCl、生理鹽水 小鼠骨髓染色體制備和觀察23、實驗材料實驗動物小鼠骨髓染色體制備和觀察23、實驗材料實驗器材恒溫培養(yǎng)箱、普通離心機、顯微鏡、分析天平、離心管(510 mL)、吸管注射器(5 mL)、100 mL燒杯、載玻片 （冰片）小鼠骨髓染色體制備和觀察33、實驗材料實驗器材小鼠骨髓染色體制備和觀察33、實驗材料溶液配制：(1)0.01秋水仙素：稱10 mg秋水仙素，溶于100 mL生理鹽水中。(2)低

2、滲溶液：稱5.59克KCl溶于1,000 mL蒸餾水中，其濃度為0.075M。2%檸檬酸鈉溶液：稱2.28克檸檬酸鈉溶于100ml蒸餾水中。Giemsa溶液小鼠骨髓染色體制備和觀察43、實驗材料溶液配制：小鼠骨髓染色體制備和觀察44、實驗方法主要實驗步驟 秋水仙素注射 解剖小鼠 離心 低滲 固定 制備細胞懸浮液 滴片 空氣干燥 染色 水洗 顯微鏡觀察結果 小鼠骨髓染色體制備和觀察54、實驗方法主要實驗步驟小鼠骨髓染色體制備和觀察5小鼠骨髓染色體制備和觀察培訓課件腹腔內注射秋水仙素34小時后，斷頭處死小鼠。小鼠骨髓染色體制備和觀察7腹腔內注射秋水仙素34小時后，斷頭處死小鼠。小鼠骨髓染色取出小鼠

3、的后肢骨，注意不要將股骨剪斷，否則容易造成骨髓細胞的流失。小鼠骨髓染色體制備和觀察8取出小鼠的后肢骨，注意不要將股骨剪斷，否則容易造成骨髓細胞的滴加適量生理鹽水進行沖洗，并仔細地將皮膚、肌肉等組織清除干凈。小鼠骨髓染色體制備和觀察9滴加適量生理鹽水進行沖洗，并仔細地將皮膚、肌肉等組織清除干凈加入適量低滲液，用剪刀將骨充分剪碎，并用吸管吹打，使骨髓細胞全部釋放出來。亦可用注射器抽取檸檬酸銨溶液沖洗骨髓，效果佳小鼠骨髓染色體制備和觀察10加入適量低滲液，用剪刀將骨充分剪碎，并用吸管吹打，使骨髓細胞將獲得的液體收集到離心管中，離心后去上清液，加低滲液至8ml左右，室溫下靜置2030分鐘，進行低滲。低

4、滲結束后，加入1ml左右的Carnoys固定液進行預固定，輕輕混勻后，離心。小鼠骨髓染色體制備和觀察11將獲得的液體收集到離心管中，離心后去上清液，加低滲液至8ml1000轉/分，離心10分鐘，棄上清，加入固定液，混勻后，室溫放置25分鐘，再次離心去上清，重復固定一次，離心后，向沉淀中加入1ml固定液，將細胞重懸。小鼠骨髓染色體制備和觀察121000轉/分，離心10分鐘，棄上清，加入固定液，混勻后，室預冷的玻片小鼠骨髓染色體制備和觀察13預冷的玻片小鼠骨髓染色體制備和觀察13滴片后，將片子晾干，滴加適量Giemsa染液染色1015分鐘，棄去染液，水洗，鏡檢。小鼠骨髓染色體制備和觀察14滴片后，

5、將片子晾干，滴加適量Giemsa染液染色1015分實驗結果苯酚品紅染色效果小鼠骨髓染色體制備和觀察15實驗結果苯酚品紅染色效果小鼠骨髓染色體制備和觀察15結果顯示在顯微鏡尋找分散良好的中期分裂相。小白鼠染色體一般呈“U”形，都為近端著絲粒染色體。染色體數(shù)2n=40。圖示為吉姆薩染色效果小鼠骨髓染色體制備和觀察16結果顯示在顯微鏡尋找分散良好的中期分裂相。小白鼠染色體一般呈5、實驗結果與分析討論繪制小鼠骨髓細胞染色體圖 統(tǒng)計小鼠染色體數(shù)目如果有條件時，要進行顯微攝影，然后進行組型分析 小鼠骨髓染色體制備和觀察175、實驗結果與分析討論繪制小鼠骨髓細胞染色體圖 小鼠骨髓染色 使用檸檬酸鈉的原因：

6、在臨床上采取新鮮血液時,需要加入一些消毒過的檸檬酸鈉,就能起到防止血液凝固的作用,所以檸檬酸鈉被稱為抗凝血劑。 枸櫞酸根與血中鈣離子形成難解離的絡合物，鈣離子是凝血過程中所需的物質之一，血液中鈣離子減少，而使血液凝固受阻。 小鼠骨髓染色體制備和觀察18 使用檸檬酸鈉的原因：小鼠骨髓染色體制備和觀察18低滲的作用： 低滲液是指滲透壓和離子強度均低于正常細胞生理條件的溶液，例如水、低滲的檸檬酸鈉或氯化鈉、甘油磷酸鉀（0.65M）、氯化鉀（0.075M）等。低滲效果取決于低滲液的化學組成、低滲的溫度和處理時間。低滲處理是憑借反滲透作用使細胞膨脹染色體鋪展，同時可使粘附于染色體的核仁物質散開，以便能在一個平面上觀察所有染色體形態(tài)。實驗室中一般選用0.075M KCl為低滲液（具體情況取決于實際操作），其優(yōu)點有：染色體輪廓清楚，可染色性強，染色時間短，用于顯帶染色時能充分顯示帶型特點。低滲處理為37，1525分鐘，以預實驗條件為準。小鼠骨髓染色體制備和觀察19低滲的作用：小鼠骨髓染色體制備和觀察19思考題1KCl溶液低滲處理與滴片過程在染色體制片中有何聯(lián)系，對制片結果各有何影響？2骨髓