大標題先空著吧等我自己填點擊字體就可以更改課件

1、大標題：先空著吧，等我自己填點擊字體就可以更改一、研究背景1、口腔環(huán)境是動態(tài)變化的?？谇恢械钠骄鶞囟葹?7，但局部地區(qū)的溫度并不完全相同，在黏膜表面和人工修復的牙冠上，過冷或過熱的飲食就可使局部溫度呈現(xiàn)較大幅度的變化。如在吃冰淇淋時，與冰淇淋接觸的表明呈-5攝氏度，而和熱飲料、吃火鍋時，與其接觸的表面溫度可迅速上升至55攝氏度左右。幾秒內(nèi)表面溫度差幾乎為60攝氏度。事實證明口腔菌叢，尤其是黏膜表面和齦上菌斑中的細菌在短時間內(nèi)能夠經(jīng)受得住如此大幅度的溫度變化。2、變形鏈球菌是公認的主要致齲菌，變形鏈球菌UA159全基因組測序已在2002年完成。全基因組測序的完成使得變形鏈球菌全基因組芯片成為可能

2、。3、細菌的生長增殖受其生存環(huán)境的影響，在不同的環(huán)境中細菌的代謝會產(chǎn)生變化，表現(xiàn) 為細菌所表達的蛋白質(zhì)的質(zhì)和量發(fā)生變化。目前，蛋白質(zhì)組學是研究細胞表達蛋白質(zhì)組 變化的最有效的技術平臺，其中雙向電泳及電泳圖譜分析是最常用的基本研究手段，運 用質(zhì)譜分析和同位素標記等技術則可對感興趣的蛋白質(zhì)進行深入細致的研究。4、待補充，空一頁三、相關研究資料1、Suzuki等采用轉(zhuǎn)錄組學和蛋白質(zhì)組學方法，對一株藍細菌(Synechocystis spPCC6803)的熱休克反應進行了系統(tǒng)研究。當培養(yǎng)溫度轉(zhuǎn)化為44后20 min，使用DNA芯片檢測的結果表明，一些分子伴侶及蛋白酶的編碼基因(例如groESL1、gr

3、oEL2、htpG、 hspA)開始被誘導轉(zhuǎn)錄；60 min后，用雙向電泳檢測，發(fā)現(xiàn)這些分子伴侶及蛋白酶的表達水平也有升高，與芯片結果相吻合。The heat shock response of Synechocystis sp. PCC 6803 analysed by transcriptomics and proteomics.2、對普通脫硫弧菌(Desulfovibrio vulgaris)熱休克反應的研究中，應用雙向凝膠電泳方法發(fā)現(xiàn)DnaK、HtpG、HtrA、AhpC等熱休克蛋白表達水平的變化與芯片結果一致。Global analysis of heat shock respons

4、e in Desulfovibrio vulgaris Hildenborough.3、有學者用雙向電泳觀察了變鏈在多種環(huán)境應激下的蛋白質(zhì)表達，發(fā)現(xiàn)變鏈在受到氧化、酸、饑餓、高滲透壓和熱應激后，有30-89 種蛋白質(zhì)表達水平改變，有些蛋白表達水平在各應激反應中均改變， 稱為普遍性應激蛋白，其他的則在一個或某幾個條件下的應激反應中變化，稱為特異性應激蛋白。Chia 等用差異顯示RT- PCR 檢測變鏈在環(huán)境應激下的基因表達水平，發(fā)現(xiàn)類似的基因表達變化。四、研究方案變形鏈球菌UA159不同生長階段和不同條件下耐熱性的差異對不同時期不同PH條件下的菌株進行熱應激，篩選熱應激性能優(yōu)良的菌株選取耐熱性強

5、菌株進行熱適應條件和致死評價條件摸索1、在不同溫度下水浴鍋中處理細菌30min，分別活菌計數(shù)，確定熱適應和致死評價溫度范圍2、按照1中所確定的溫度，將菌液在該溫度下熱適應處理30min，對照置于37攝氏度培養(yǎng)30min3、計算對照管和測試管菌體的存活率，通過比較兩者的存活率來選擇最佳的熱適應溫度存活率=評價前活菌數(shù)/評價后活菌數(shù)*100%耐熱性提高倍數(shù)=熱適應組存活率/對照組存活率二維凝膠電泳1、樣品制備收集菌體、洗滌、材料破碎失活或者去除干擾物質(zhì)蛋白質(zhì)增溶溶解2、蛋白質(zhì)提取 沖液懸浮菌體，離心后收集菌體沉淀3、蛋白質(zhì)定量和上樣采用膠內(nèi)加樣法，IPG膠條(pH值范圍為pH 3 to 6, 4

6、to 7, or 5 to 8)水合作用過夜后，再進行等電聚焦，總電壓合計達60 kV。等電聚焦結束后，將IPG膠條置于平衡液I(005 molLTris-HClpH 88，6 molL尿素、質(zhì)量分數(shù)30 甘油，質(zhì)量分數(shù)2 SDS、質(zhì)量分數(shù)1DTT或者5%的碘乙酰胺還原15 min），將IPG膠條移至質(zhì)量分數(shù)12%-14%的SDS膠上，行二維垂直SDS電泳，電泳結束后，固定膠，用考馬斯亮藍染色。考馬斯亮藍染色（將凝膠轉(zhuǎn)入染色盤中倒入考染液,振蕩染色過夜,約12 h。染色結束后以20%乙醇雙蒸水洗滌脫色一次,再以雙蒸水洗滌兩次至背景清晰）5、圖像采集分析通過Imagescanner掃描儀以及LabScan掃描軟件對凝膠進行掃描獲取圖像,借助圖像分析軟件PDQuest 7. 0進行詳細分析,比較蛋白質(zhì)斑點差異。軟件會根據(jù)斑點的位置、大小、性狀等參數(shù)，自動將不同圖譜中的相同蛋白質(zhì)點進行匹配。不能匹配的蛋白質(zhì)斑點視為差異點。6、數(shù)據(jù)處理7、統(tǒng)計學分析質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)點采摘、蛋白酶消化、質(zhì)譜光譜分析 研究意義: 2002年變形