核酸提取方法帖子資源

1、 DNase活性，Tris-Cl NaCl 濃度，維持核酸溶解性 DNase活性，Tris-Cl NaCl 濃度，維持核酸溶解性；DNA，梯度乙醇 DNATEbufferRNA：TRIzol法（苯酚+硫 化胍、異硫 酸胍鹽兩步法、CTAB-PVP ，核 沉淀，乙 I，50 mM/ 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH 8.0（作用于重懸細胞、保護 DNASDS（ （： DNARNADNARNA在溶解性差異RNADNAbuffer酸堿和鹽平衡問 RNase 抑制劑保護下，如果在后續(xù)步驟使用的耗材中沾染 RNase RNA 造成嚴重破壞。RNase 組DNA 1DNA得率低若

2、全程操作規(guī)范，得率尚不理想，則可以考慮對抽提DNA組DNA 1DNA得率低若全程操作規(guī)范，得率尚不理想，則可以考慮對抽提DNA2OD260/280不理想OD260240290nm之間，最大吸收260nmRNADNADNA等吸光略有差別， 組 DNA OD260/280 1.8 RNA 污染；偏低意味著蛋白/多酚污染。3OD260/230不理想 系 2DNA 提取過程中會結團，其他的樣本也同樣會結團，有些老師在初次遇到這3根 3根 試劑二：NaOHSDSNaOH的作用是促使DNA變性，SDS是表面活性劑，除去蛋白質。試劑三：NaAc 溶液作用是使變性的質粒DNADNARNADNADNADNA 分

3、離。這要求試劑與溶菌液充分搖勻，搖動時用力適當。一般來說，加入溶液一時5min 后，溶液會變粘稠， RNA，而你并未提到質粒?？紤]一下你的菌種是否有問題，保存方面有沒有污染，抗 注意裂解時不可以劇烈晃動，這樣 組DNA就會污染，到復性時會和質粒混在一起，這OD值是有，但跑膠時就看不到， 面提不出質粒的原因可能是質粒丟失了，建議你斷應該是 組 DNA 污染吧。記得加 PII PIII 后一定要溫柔混勻，切忌劇烈的動作。 2注意裂解時不可以劇烈晃動，這樣 組DNA就會污染，到復性時會和質?；煸谝黄穑@OD值是有，但跑膠時就看不到， 面提不出質粒的原因可能是質粒丟失了，建議你斷應該是 組 DNA 污

4、染吧。記得加 PII PIII 后一定要溫柔混勻，切忌劇烈的動作。 23時反復顛倒即可！還有，在電泳時是否加Loadingbuffer?樣品散開了？我覺得注意 7. 質粒提取后不能完全溶于，為什么呢？是因為我用無菌臺吹干1100 80 元，質量也不錯.4)TE不能溶解啊？個人感覺，有蛋白污染的時候質粒比較難溶。純度高的質粒很8. 加無水乙醇的作用是沉淀質粒DNA，9. 本身帶有負電荷，它游離與細胞質中不像 組 DNA與蛋白質結合，在電動勢的作用下可10. 1 2 2 1/5001/1000 1216 小時。Xlblue的12. 我認為應該控制堿裂解的時間一定要短，我一般是加 14. DNA探針

5、等實驗中需要高純度、高濃度的質粒DNA,DNADNA一般需進一步純化,常用柱層析法和氯化絕梯度1pBS250ml，45000g15分 45ml溶液I中,512mlII, 蓋緊瓶蓋,緩緩地顛倒離心管數次,以充分混勻內容物,10 69ml用冰預冷的溶液III, 搖動離心管數次以混勻內容物,15分鐘,此時應7、45000g10 69ml用冰預冷的溶液III, 搖動離心管數次以混勻內容物,15分鐘,此時應7、45000g158、取上清液,50mlRNAA(10mg/ml3720 10、取上層水相, 加入等體積氯仿,振蕩混勻,412000g1011、取上層水相,1/54mol/L NaCl 10% PE

6、G(6000), 12、412000g15分鐘, ml 70%冰冷乙醇洗滌，412000g13500mlTE注意1. RNAA DNA 酶,RNA 酶耐熱的特性,使用時應先對該酶液進行熱處理(80 1 小時),DNA 酶失活。15. ,用過試劑盒,和簡易的堿裂解法,都沒有提出過質粒, 1,在乙醇沉淀步驟中,DNA 弄丟了你 25-77 17. 23.33.4-2018.25min2DNA 2應該是新鮮配置的，否則也會降低效率。III NaOH IIIDNAIISDSNa+K+置換，SDS PDS III NaOH IIIDNAIISDSNa+K+置換，SDS PDS 組 DNA,DNAIIDNA 5min，以免質