微生物實驗室質(zhì)量控制

1、微生物實驗室質(zhì)量控制 微生物實驗室存在的主要問題微生物檢驗人員配備不足；硬件較好，軟實力較差送檢率不高，標本合格率低對特殊耐藥表型關(guān)注度不夠，不能及時復(fù)核儀器藥敏折點不能及時更新，藥敏方法單一微生物LIS系統(tǒng)建設(shè)存在缺陷；專業(yè)人員較少使WHONET軟件統(tǒng)計數(shù)據(jù)；與臨床溝通較差，較少參與臨床會診； 臨床醫(yī)生對微生物檢驗認識不足，缺乏信任；質(zhì)量控制是準確檢驗結(jié)果的保證全面質(zhì)量控制： 檢驗前 檢驗中 檢驗后檢驗前程序申請單應(yīng)包括標本來源和診斷感染類型和/或目標微生物宜提供抗菌藥物使用信息微生物采集及運送指南微生物采集及運送指南應(yīng)包括：不同部位采集方法例如血培養(yǎng)：消毒技術(shù)、合適標本量、診斷成人不明原因

2、發(fā)熱、血流細菌感染宜不同部位2套、每套2瓶（需、厭氧各一瓶）檢驗前- - 不合格標本檢驗單與標本容器上的信息不符：如姓名不符、標本種類不符、檢測目的不符等；痰、環(huán)境樣本、皮膚、中段尿 等樣本申請厭氧培養(yǎng)； 未用無菌容器；標本量太少；檢驗前程序標本接收制定接收標準（如：肉眼可見滲漏，標本類/量，正確保存，預(yù)防拭子干燥，合適運送培基等）評估合格性，反饋結(jié)果不合格痰處理盡快通知醫(yī)護（病房），及時通知患者（門診）以便重新采集。檢驗中質(zhì)量保證 人員 試劑 培養(yǎng)基 設(shè)備 檢驗過程： 方法的確認 SOP 生物參考區(qū)間 測量準確性 內(nèi)部質(zhì)量控制體系 標本質(zhì)量評估人員基本要求上崗前辨色力相關(guān)教育背景專業(yè)技術(shù)及知

3、識培訓（至少每年一次）熟悉微生物SOP、消毒滅菌、生物安全人員數(shù)量滿足服務(wù)要求臨床微生物學實驗室建設(shè)基本要求專家共識要求三級醫(yī)院微生物室至少有固定人員68人，建議10人以上；二級醫(yī)院微生物室至少有固定人員23人，建議5人以上。臨床微生物學實驗室建設(shè)基本要求專家共識三級醫(yī)院微生物室面積不低于160m 2 ，二級醫(yī)院不低于60m 2 。人員的培訓及考核 培訓： 制定各級人員計劃； 內(nèi)容：質(zhì)量保證及管理，專業(yè)知識， 生物安全、檢驗活動涉及的所有文件考核：能力評估 新入職人員：最初6個月應(yīng)進行至少2次能力評估； 每人每6個月崗位勝任考核，未通過者再培訓再考核； 當職責變更時，或離職6個月以上再上崗時，

4、應(yīng)再培訓考核； 政策、技術(shù)、程序有變更時，應(yīng)再培訓考核 人員比對：顯微鏡檢查、分離鑒定、藥敏、實驗結(jié)果判斷、報告等內(nèi)容的一致性質(zhì)控菌株微生物室檢驗人員正確保管、使用菌株，并確保實驗室生物安全。 所有菌株應(yīng)由微生物主管及其委派責任人保管，采取雙人雙鎖保管制度。來源： ATCC標準菌株、CAP質(zhì)控菌株、衛(wèi)生部臨檢中心質(zhì)控菌株、山東省臨床檢驗中心質(zhì)控菌株質(zhì)控菌株使用復(fù)蘇：標準菌株送到實驗室后，應(yīng)嚴格按照說明書操作。 保存：將標準菌株以無菌技術(shù)接種于菌株保存管中，置-70低溫冰箱保存。標準菌株復(fù)蘇后，傳代最多不得超過5代，如超過5代將不再作為標準菌株使用。標準菌株保存管一經(jīng)解凍使用后，不得再次凍存。每

5、年取出1支菌株保存管，接種相應(yīng)平板，培養(yǎng)1824h獲得純菌落。再挑取純菌落接種于20支菌株保存管，置于70低溫冰箱保存。這20支菌株保存管可每月取出1支供臨床使用。每月使用時，須從-70低溫冰箱中拿出每月使用的菌株保存管， 接種平板，孵育培養(yǎng)獲得純菌落。平板上生長的純菌落可以在2-8冰箱中保存一個月用以當月的質(zhì)控菌株傳代。質(zhì)控菌株種類鑒定用質(zhì)控菌株培養(yǎng)基用質(zhì)控菌株藥敏試驗用質(zhì)控菌株染色試驗用質(zhì)控菌株質(zhì)控菌株標準菌株（藥敏用） 種類及數(shù)量滿足工作要求 記錄來源，傳代 菌株性能證明滿足要求的證據(jù)及記錄 ATCC25922, 25923，27853, 29212，29213等。 冷凍保存質(zhì)控原代培養(yǎng)

6、物, 28儲存?zhèn)鞔囵B(yǎng)物 每周制備新的傳代培養(yǎng)物 每月制備新的原代培養(yǎng)物試劑包括染液（每周一次）、化學試劑、培養(yǎng)基、藥敏紙片等質(zhì)量控制：直接分析質(zhì)控物、新舊批號平行試驗等。質(zhì)控頻率：每一批號或每一貨次常用試劑及生化反應(yīng)培養(yǎng)基質(zhì)量控制 試劑名稱陽性對照菌種陰性對照菌種桿菌肽A群鏈球菌B群鏈球菌Optochin紙片肺炎鏈球菌草綠色溶血鏈球菌V因子嗜沫嗜血桿菌副流感嗜血桿菌X因子副流感嗜血桿菌流感嗜血桿菌V+X因子流感嗜血桿菌培養(yǎng)基（購買）保存制造商提供的質(zhì)量文件 標識明確 生產(chǎn)日期 保質(zhì)期 其他信息（配方，質(zhì)控，儲存條件等）外觀良好、水分適宜、適當?shù)念伾秃穸取o污染、無冷凍等。 無菌試驗、性能驗

7、證（生長試驗、抑制試驗、生化反應(yīng)）、平行試驗啟封后，改變了效期及儲存條件，宜記錄新有效期。儲存條件依從廠商。商品化培養(yǎng)基的驗收要點外觀 檢查外觀是否完好，有無裂開、溶血、冰凍、不均衡填充，過量氣泡以及明顯污染的情況。標識 培養(yǎng)基上是否有明確標識，包括：培養(yǎng)基種類、生產(chǎn)日期（批號)、保質(zhì)期、儲存條件等。 質(zhì)量控制 外觀無明顯不合格的培養(yǎng)基要進行質(zhì)量控制實驗，合格后方可使用。培養(yǎng)基（自制）名稱和類型 分裝體積 存放條件：通常2-8冰箱保存1-2周配制時間和配制人員質(zhì)量控制培養(yǎng)基配置注意要點質(zhì)量控制 無菌試驗：將制好的培養(yǎng)基再35孵育過夜，判定是否滅菌合格，若發(fā)現(xiàn)有細菌生長，不能繼續(xù)使用；效果檢驗：

8、按不同的培養(yǎng)要求，接種相應(yīng)的菌種，觀察細菌的發(fā)育、菌落形態(tài)、色素、溶血等特征，判斷培養(yǎng)基是否符合要求。培養(yǎng)基質(zhì)控菌株預(yù)期結(jié)果血平板A群鏈球菌ATCC19615Spn ATCC49619Eco ATCC25922生長，溶血生長，溶血生長良好巧克力平板Hin ATCC49247Spn ATCC49619生長良好生長良好含Van巧克力平板Hin ATCC49247Sau ATCC25923生長良好，菌落典型不生長麥康凱平板Eco ATCC25922鼠傷寒ATCC14028生長，紅色菌落生長，無色透明菌落中國藍平板Eco ATCC25922鼠傷寒ATCC14028生長，藍色菌落生長，無色菌落SS平板E

9、co ATCC25922鼠傷寒ATCC14028部分抑制生長，紅色菌落生長，無色透明菌落紙片擴散法藥物敏感試驗質(zhì)量控制頻率質(zhì)控菌株結(jié)果判讀紙片擴散法操作規(guī)程培養(yǎng)基：MH (重復(fù)性好，低抑制劑，營養(yǎng)好) 厚度：4mm PH：7.27.4pH低時，氨基糖甙,大環(huán)內(nèi)酯 pH高時，青霉素類的活性 若當天不使用，儲存于2-8C，七天內(nèi)使用。藥敏紙片可靠供應(yīng)商的紙片，紙片應(yīng)同時至少有一個分析說明的紙片批號和濃度的證書，并能提供用推薦的質(zhì)控細菌進行質(zhì)控的數(shù)據(jù)。 14C以下冷凍至使用前。內(nèi)酰胺類應(yīng)密封包裝并冷凍，某些不穩(wěn)定的藥物（如IPM、頭孢克羅、克拉維酸復(fù)合藥）應(yīng)冷凍保存直至使用。裝有紙片的容器應(yīng)于使用前

10、1-2小時移出冰箱，平衡至室溫才能打開。以防止紙片上冷凝水產(chǎn)生。當指示劑變色時，應(yīng)更換干燥劑以防止過于潮濕。藥敏試驗失控的原因分析失控結(jié)果出現(xiàn)的原因可能包括但不限于：QC菌株 QC菌株使用不正確 不合理儲存 維護不足（例如，使用同一個培養(yǎng)物超過1個月） 污染無法生存 微生物內(nèi)部發(fā)生的改變（如，突變，質(zhì)粒丟失）測試用品 不合理的儲存或運輸條件 污染 KB法中使用有缺陷的瓊脂平板（過厚或過薄，PH過高或過低），MIC法中使用的管或孔中的肉湯量不足 使用損壞的平板（如有裂隙）、卡片、管 使用過期的材料測試程序 沒有正確使用孵育的溫度或環(huán)境條件 沒有正確地制備或者調(diào)整接種懸液 從孵育時間不正確的平板上

11、制備接種物 從含有抗生素或其它生長抑制復(fù)合物的鑒別培養(yǎng)基或選擇培養(yǎng)基中制備接種物 使用錯誤的紙片、輔助用品 紙片放置不當（例如，沒有充分接觸瓊脂） 沒有正確判讀或解釋實驗結(jié)果 測量錯誤 錄入錯誤 儀器 功能不正?；虺鲂史秶ɡ绫葷醿x、移液管、游標卡尺等）檢驗程序 應(yīng)制定常規(guī)藥敏試驗方法（紙片擴散法、瓊脂稀釋法、微量肉湯稀釋法、E 試驗或其他）的操作程序（含各類病原體和/或標本的檢測藥物、質(zhì)控標準、結(jié)果解釋等）； 抗菌藥物敏感性試驗方法包括紙片擴散法、稀釋法（瓊脂稀釋法、肉湯稀釋法）、濃度梯度擴散法（E 試驗）或自動化儀器檢測； 抗菌藥物敏感性試驗方法及結(jié)果判斷至少應(yīng)遵循上一年的標準。檢驗

12、后程序結(jié)果報告應(yīng)與檢驗的內(nèi)容一致，如糞便沙門、志賀菌培養(yǎng)，報告“未檢出沙門、志賀菌”。血培養(yǎng)陰性結(jié)果報告應(yīng)注明培養(yǎng)時間。當某些對患者處理具有重要意義的實驗結(jié)果達到危急值時，立即通知臨床醫(yī)生或相關(guān)人員。危急值至少應(yīng)包括血培養(yǎng)陽性結(jié)果、腦脊液顯微鏡檢查及培養(yǎng)陽性結(jié)果、國家規(guī)定立即上報的法定傳染病等。血液、腦脊液標本的培養(yǎng)鑒定應(yīng)及時發(fā)送分級報告，如標本直接涂片或濕片直接鏡檢、培養(yǎng)皿的判讀等。無菌部位來源標本宜報告直接涂片鏡檢的陽性結(jié)果。應(yīng)在收到標本24小時內(nèi)報告分枝桿菌抗酸或熒光染色結(jié)果。某種細菌耐藥率異常增高或符合院感爆發(fā)的定義時應(yīng)報告院感部門。對藥敏結(jié)果按規(guī)定進行審核。應(yīng)參加全國或地區(qū)耐藥監(jiān)測網(wǎng)。CLSI規(guī)定的藥敏審核方案確保藥敏試驗的結(jié)果和細菌鑒定的可重復(fù)性；檢查是否抄寫錯誤，污染或使用了有缺陷的板條，平板或 藥敏卡；檢查該患者以前的報告，以確定以往是否分離到同樣的菌株，其結(jié)果是否確認過；為確保試驗重復(fù)性，使用與初次相同方法重復(fù)鑒定菌株和藥敏試驗。在實驗室內(nèi)部或參比實驗室用第二種方法確認菌株鑒定及藥敏；臨床微生物實驗室信息系統(tǒng)LIS系統(tǒng)應(yīng)用的意義