白細(xì)胞介素12課件

1、豬白細(xì)胞介素12基因片段的克隆與鑒定學(xué)生：趙娜 指導(dǎo)老師：周雙海目錄1 研究背景2 研究目的及意義3 實驗內(nèi)容與技術(shù)路線 4 結(jié)果與分析 5 結(jié)論1 研究背景 白細(xì)胞介素(interleukin ,IL)-12,由抗原提呈細(xì)胞和B細(xì)胞產(chǎn)生，是一種異源二聚體形式的前炎癥細(xì)胞因子，并以這種形式分泌到細(xì)胞外。IL-12能誘導(dǎo)IFN-產(chǎn)生，在體內(nèi)免疫應(yīng)答中（特別是在細(xì)菌或寄生蟲感染中）它也是IFN-產(chǎn)生所必需。 IL-12在機(jī)體病毒感染早期的非特異性免疫和隨后的抗原特異性的適應(yīng)性免疫過程中均扮演重要的角色，它是一個多功能的免疫調(diào)節(jié)因子。 IL-12誘導(dǎo)并維持抗原特異性T細(xì)胞應(yīng)答的能力對控制許多病原微生

2、物的感染是很重要的。2 研究目的及意義 本研究旨在克隆與鑒定豬白細(xì)胞介素（IL）-12基因部分片段，為該基因表達(dá)水平的定量檢測建立前期基礎(chǔ)，以及分析IL-12在機(jī)體的免疫反應(yīng)與病原微生物的致病機(jī)理中的作用與意義。3.2 技術(shù)路線提取豬外周血單個核細(xì)胞總RNA利用RT-PCR技術(shù)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄對PCR產(chǎn)物進(jìn)行克隆對克隆產(chǎn)物進(jìn)行轉(zhuǎn)化重組質(zhì)粒的鑒定4 結(jié)果與分析 4.1 IL-12的RT-PCR產(chǎn)物 將PCR產(chǎn)物連接至克隆載體上。質(zhì)粒PCR得到377bp的片段，瓊脂糖電泳檢測結(jié)果與預(yù)期結(jié)果相同。 700bp 300bp100bp377bp M 1對此基因片段進(jìn)行測序，測序結(jié)果如下： GGGGGCTAAC

3、GGCTGGACAGGCACTGCCCTCCTGACACTCCACTCTGTACTTCTTATACTCCCCGAGGTCCTCTGAGAGCGTTGCCGTGCCACATGTCACGCCACGGGGGTCAGTGGAGCCTCTGCTCTTTTGACACTGAATTTCAAATCAGTACTGATTGCTGTCAGCCACCAGCAGGTGAAACGTCCGGAGTAATTCTTTGCCTCACATTTTAGAAAGCTCTTGTTTTTGGGCTCTTTCTGGTCTTTTAAAATATCAGTGGACCAAATTCCATCTTCCTTTTTGTGAAGCAGCAGGAGTGACTGGCTCAGAACTGCGCCTCCTTTGCGACAGGTGTACTGGCCAGCATCAATCACTAGTGAATTCGCGGCCGCC 將擴(kuò)增到的IL-12序列與NCBI上所登載的豬IL-12序列比對，結(jié)果發(fā)現(xiàn)測得的序列位于IL-12序列全序列的110到455位點之間，在其開放閱讀框（ORF）內(nèi)第168和396位發(fā)生變異，分別由C 突變?yōu)镚和G 突變?yōu)門，兩者相似性為99.2%以上；豬 IL-12的 ORF 長為428 bp ，共編碼154 aa，信號肽長為16aa。 通過與人、鼠和牛等的 IL-12 相同位置的核