病毒感染檢查方法和防治原則課件

1、第26章 病毒感染的檢查方法及防治原則 第一節(jié) 病毒感染的檢測方法一、標本的采集與運送： (1)急性期標本； (2)根據(jù)感染性質(zhì)取不同的標本； (3)標本置于50甘油轉(zhuǎn)運液中； (4)冷藏快運。 （5）有雜菌標本應用高濃度抗生素處理2. 病毒的分離培養(yǎng)動物接種雞胚培養(yǎng)細胞培養(yǎng)原代細胞培養(yǎng)二倍體細胞株傳代細胞系 收獲尿囊液陳靈芝 微生物教研室 2009-32009-3 流感病毒分離培養(yǎng)的最好方法是雞胚接種。接種羊膜腔（初次分離），尿囊腔（傳代）。然后取羊水或尿囊液做血凝和血凝抑制試驗鑒定。血凝試驗：羊水/尿囊液+雞RBC 紅細胞凝集 表明有病毒存在和增殖 血凝抑制實驗(1) 原代細胞培養(yǎng) 動物或

2、人組織直接用蛋白酶消化所得的細胞經(jīng)體外培養(yǎng)后可貼壁或懸浮生長； (2)二倍體細胞株 在體外連續(xù)培養(yǎng)5060代仍保持其二倍染色體數(shù)目的單型細胞。為生產(chǎn)人用疫苗的首選細胞株。(3) 傳代細胞系 能在體外連續(xù)傳代、來自癌細胞或發(fā)生自發(fā)轉(zhuǎn)化、突變的原代細胞或二倍體細胞株。原代細胞(primary cell)培養(yǎng) 新鮮組織(動物/雞胚/人胚組織) 剪碎/胰酶消化單個細胞 培養(yǎng)液單層細胞(原代細胞) 胰酶次代細胞常用細胞株:人胚腎細胞人胚肺細胞人羊膜細胞猴腎細胞常用于VSV、HSV、麻疹病毒的培養(yǎng)Negri Body*包涵體形成的觀察(2)紅細胞吸附： 某些病毒感染的宿主細胞能吸附脊椎動物的紅細胞而發(fā)生血

3、吸現(xiàn)象。(3)干擾現(xiàn)象：(4)病毒蛋白、核酸的檢測：(5) 細胞培養(yǎng)液的pH改變Fig HSV 熒光抗體法查抗原TCID(50% tissue culture infective dose):在半數(shù)細胞培養(yǎng)板孔或試管內(nèi)引起細胞病變（CPE）的病毒量空斑試驗：在細胞培養(yǎng)表面覆蓋一層半固體物質(zhì)使細胞病變形成空斑三、病毒感染的血清學診斷 1、中和試驗：流行病學調(diào)查 中和抗體病毒 失去感染性 2、補體結(jié)合試驗：近期感染的診斷 3、血凝抑制試驗：診斷（IFV、乙腦V）、鑒定、流行病學調(diào)查 4、凝膠免疫擴散試驗檢測機體的體液免疫應答：1、單份血清檢測：IgMIgG2、雙份血清檢測：IgG恢復期/早期 4:

4、1Fig Identification of specific IgM antibody by capture and ELISA.（四）檢測病毒核酸 ： 包括核酸分子雜交技術(shù)和PCR；如HBV、HCV、HSV、CMV等的檢測。PCR cycler第二節(jié) 病毒感染的防治原則一、抗病毒治療 病毒感染的最有效的方法是免疫預防,至今尚無十分理想藥物1. 抗病毒藥物或制劑 核苷類藥物 阻抑子代病毒結(jié)構(gòu)基因的合成與表達。 病毒蛋白酶的抑制劑 阻止大分子病毒蛋白的降解。 其他：IFN、TNF、IL-2、中草藥等抑制病毒復制。 抗病毒基因治療：asODN、asON、ribozyme 策略：作用于病毒復制周期

5、的不同環(huán)節(jié)2.免疫制劑吸附擬受體制劑擬配體制劑中和抗體穿入金剛烷胺脫殼生物合成裝配、釋放核苷類似物干擾素反義技術(shù)等Fig A) HIV attach to a CD4 receptor. B) A soluble synthetic version of the receptor can prevent attachment of the virus.mRNAProtein二、 病毒感染的預防 人為地將疫苗（vaccine）或類毒素接種于人體，使機體主動產(chǎn)生特異性免疫力的過程，是一種防治微生物感染的措施，主要用于預防。 常用人工自動免疫制劑有：死疫苗、活疫苗、亞單位疫苗、類毒素、DNA疫苗等一、人 工 自 動 免 疫傳統(tǒng)疫苗 1.滅活疫苗 2.減毒活疫苗Fig Edward Jenner vaccinating (inoculating) James Phipps with cowpox material.陳靈芝 微生物教研室 2009-32009-3現(xiàn)代疫苗1.基因工程的疫苗2.核酸疫苗3.其他類型的疫苗：合成肽疫苗 抗獨特型疫苗 聯(lián)合多價疫苗等 是