醫(yī)學(xué)形態(tài)學(xué)論文

1、小鼠腹水型肝癌細(xì)胞系HCaPL6淋巴道高轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)murine ascites hepatocarcinoma cell line with high lymphatic metastatic potential(HCaPL6)七年制08級(jí)6班Q080100191 王曉露【摘要】目的掌握可移植性小鼠腹水癌淋巴道轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)的操作過(guò)程；了解腫瘤動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒⒌倪^(guò)程及意義。方法(1)細(xì)胞系獲取(2)615小鼠腋窩皮下接種腫瘤細(xì)胞(3)組織取材(4)切片染色:石蠟切片法,H.E.染色法。結(jié)果15只實(shí)驗(yàn)小鼠中0只死亡，光學(xué)顯微鏡下觀察，在皮下瘤體和同側(cè)腋下淋巴結(jié)中發(fā)現(xiàn)同樣類(lèi)型的腫瘤細(xì)胞（即），遠(yuǎn)處臟器未見(jiàn)

2、到轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞。結(jié)論可移植性小鼠腹水癌經(jīng)淋巴道向其他部位發(fā)生轉(zhuǎn)移?！続stract】0bjectiveMaster portability mice ascties cancer lymphatic metastasize experimental operation process；Understanding tumour animal experimental model of the process and significance.Methods(1)cell line achieve(2) The armpit subcutaneous tumor cells in mice in

3、oculated(3) Organization based(4) Slice dyeing: Paraffin method,H.E. stainmethod. Results There are 15 laboratory mice.No dead in the laboratoryOptical microscope, In the subcutaneous pseudoaneurysm with side axillary lymph node and found in the same type of cancer cells (HcaF), The distance viscera

4、 not seen transfer of tumor cells . Conclusions Portability mice ascties cancer via the lymphatic way to other parts of the shift【關(guān)鍵詞】615小鼠，肝癌，Hca-P;淋巴道轉(zhuǎn)移【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【前言】H22腫瘤瘤株屬小鼠的肝細(xì)胞瘤,系1952年蘇聯(lián)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究院(莫斯科)用O-Ptoaminoa-zotolyol(OAAT)涂C3H小鼠的皮膚100次后誘發(fā),皮下傳代的肝臟實(shí)體瘤。1963年中科院上海藥物所引進(jìn)后將肝臟實(shí)體型瘤株變成腹水型瘤株(其腹水型又稱(chēng)Hc

5、a,HAC或HepA),被廣泛應(yīng)用于腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移機(jī)制研究及藥物篩選。實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^(guò)可移植性小鼠腹水癌淋巴道轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn),從感性上認(rèn)識(shí)腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移的生物學(xué)特性,了解腫瘤動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒⒌倪^(guò)程及意義。1.實(shí)驗(yàn)材料(1)研究對(duì)象:1)細(xì)胞系小鼠腹水型肝癌淋巴道低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株HCa-P，由大連醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室建株并保存2)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：近交系615小鼠，雌雄兼用，68周齡，體重1822g，由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(2)主要試劑及器皿 ：搪瓷盆、溫度計(jì)、離心管、1ml注射器、手術(shù)刀、眼科手術(shù)剪、眼科手術(shù)鑷、乳膠手套、生理鹽水、1%來(lái)蘇兒溶液、75%酒精棉、10%福爾馬林固定液等。2.研究方法(1)細(xì)胞

6、系獲取從液氮罐中取出高轉(zhuǎn)移力小鼠腹水型肝癌細(xì)胞（Hca-F）塑料冷存管，立即放入40的溫水中，1分鐘內(nèi)使凍存液全部融化，立即放入無(wú)菌室中。取出細(xì)胞懸液放入離心管中，用生理鹽水洗滌兩次，離心，棄上清，再加1ml生理鹽水吹打均勻。向小鼠腹腔內(nèi)接種0.2mlHca-f細(xì)胞懸液，于第六天無(wú)菌條件取腹水。計(jì)數(shù)細(xì)胞，用生理鹽水配成密度為2107個(gè)細(xì)胞/ml的細(xì)胞懸液。(2)615小鼠皮下接種腫瘤細(xì)胞取615小鼠癌性腹水0.1ml，內(nèi)含2106個(gè)活瘤細(xì)胞，接種于615小鼠右腋中線(xiàn)皮下。局部嚴(yán)格消毒。注射針頭進(jìn)入皮下。定期檢查右腋皮下腫瘤生長(zhǎng)和同側(cè)腋窩淋巴結(jié)及腹股溝淋巴結(jié)腫大情況，于接種后21天處死全部小鼠，

7、取皮下瘤體及雙側(cè)有關(guān)淋巴結(jié)稱(chēng)重，同時(shí)觀察肺、肝、腎等臟器。將上述組織固定于10%福爾馬林固定液中，石蠟包埋制片，HE染色，顯微鏡檢查。(3)組織取材將皮下瘤體、淋巴結(jié)、肺、肝、腎選取病變部位，切成厚約23mm的21cm大小的組織塊，10%中性福爾馬林固定。小塊組織一般固定數(shù)小時(shí)，較大標(biāo)本需固定2448小時(shí)。經(jīng)沖洗、透明、浸蠟，然后用石蠟將組織包埋成蠟塊，再經(jīng)切片機(jī)切片和染色制成切片，一般常規(guī)作HE染色。(4)切片染色:石蠟切片法,H.E.染色法1)脫水程序及時(shí)間:組織固定沖洗脫水 透明浸蠟修蠟塊切片烘烤切片 染色2)HE切片染色程序與方法:切片脫蠟水洗(與脫水過(guò)程相反)HE染色脫水,透明,封固

8、【結(jié)果】:顯微鏡觀察淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的分布與轉(zhuǎn)移率1皮下瘤體：大體：皮下瘤體較大，呈灰白色，質(zhì)硬，與皮下組織黏附緊密、界限不清。：瘤細(xì)胞分布不規(guī)律（組織結(jié)構(gòu)異型性），細(xì)胞體積較大、形態(tài)不一，核較大，胞質(zhì)藍(lán)染，呈嗜堿性（細(xì)胞異型性）。2同側(cè)腋下淋巴結(jié)：大體：比正常淋巴結(jié)大，呈卵圓形，質(zhì)硬，切面灰白色。：在淋巴結(jié)的邊緣竇處可看到某些細(xì)胞分布不規(guī)律，細(xì)胞體積較大、形態(tài)不一，核較大，胞質(zhì)藍(lán)染，與在皮下瘤體的切片中看到的瘤細(xì)胞形態(tài)相似，表明此淋巴結(jié)中的腫瘤組織是原發(fā)在皮下的腫瘤經(jīng)淋巴道轉(zhuǎn)移的結(jié)果。3肺、肝、腎；大體：未見(jiàn)異常：未見(jiàn)到組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞的異型性。表明此種腫瘤未經(jīng)血道轉(zhuǎn)移【討論】:1.為什么選用615

9、小鼠做小鼠腹水型肝癌高淋巴道轉(zhuǎn)移細(xì)胞株的移植瘤實(shí)驗(yàn)？615近交系小鼠是中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所1961年5月用本所飼養(yǎng)的昆明種白化雌性小鼠和由前蘇聯(lián)引進(jìn)的C57BL血研黑色雄性近交系小鼠雜交而得的第一代后，用雜交第一代嚴(yán)格按照同胞兄妹交配的原則連續(xù)繁殖20代以上得到的一系棕色小鼠。由于615小鼠淋巴系統(tǒng)比較發(fā)達(dá)且有許多近交系，部分近交系有其特定的自發(fā)性腫瘤，可利用其自發(fā)腫瘤與人體腫瘤的相似之處做為動(dòng)物模型進(jìn)行腫瘤發(fā)生、發(fā)展和治療的研究。同時(shí)，胸腺?lài)?yán)重缺陷的裸小鼠可接受人類(lèi)各種腫瘤細(xì)胞的植入，成為活的癌瘤細(xì)胞試管，是研究人類(lèi)腫瘤生長(zhǎng)發(fā)育、轉(zhuǎn)移和治療的絕佳動(dòng)物。2.為什么選用615小鼠的右腋皮下

10、作為腫瘤細(xì)胞的接種部位? 因?yàn)樾∈笥乙钙は乱赶伦鳛槟[瘤細(xì)胞的接種部位是其由于此處的淋巴結(jié)相對(duì)較多，且有血循環(huán)豐富，利于腫瘤的轉(zhuǎn)移的優(yōu)點(diǎn)。3.惡性腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的可能機(jī)制有哪些?淋巴道轉(zhuǎn)移（lymphatic metastasis）:惡性腫瘤侵入淋巴管后，隨淋巴流首先到達(dá)局部淋巴結(jié)。局部淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)以后，可繼續(xù)轉(zhuǎn)移至下一站的其他淋巴結(jié)，最后，可經(jīng)胸導(dǎo)管入血再繼發(fā)血道轉(zhuǎn)移。值得注意的是，有的腫瘤可以逆行轉(zhuǎn)移（Troisier sign）或者越過(guò)相應(yīng)的引流淋巴結(jié)發(fā)生跳躍式轉(zhuǎn)移（skip metastasis）。血道轉(zhuǎn)移（hematogeneous metastasis）:惡性腫瘤細(xì)胞侵入血管后可隨血流

11、到達(dá)遠(yuǎn)處器官繼續(xù)生長(zhǎng)，形成轉(zhuǎn)移瘤。血道轉(zhuǎn)移的途徑與血栓栓塞的過(guò)程相似，即侵入體循環(huán)靜脈的惡性腫瘤細(xì)胞經(jīng)右心到肺，在肺內(nèi)形成轉(zhuǎn)移瘤。此外，侵入胸、腰、骨盆靜脈的惡性腫瘤細(xì)胞也可以通過(guò)吻合枝進(jìn)入脊椎靜脈叢。種植性轉(zhuǎn)移（transcoelomic metastasis）：體腔內(nèi)器官的惡性腫瘤蔓延至器官表面是，其腫瘤細(xì)胞可以脫落，并向播種一樣種植在體腔內(nèi)各個(gè)器官的表面，形成多數(shù)的轉(zhuǎn)移瘤，這種方式亦稱(chēng)為播種。值得注意的是，手術(shù)也可能造成醫(yī)源性種植性轉(zhuǎn)移。4.根據(jù)是否能貼附在支持物上生長(zhǎng)的特點(diǎn)分類(lèi)：體外培養(yǎng)細(xì)胞可分為貼壁型和懸浮型兩大類(lèi)。貼壁型細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)能貼附在支持物表面生長(zhǎng)，大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞呈貼附型生長(zhǎng)

12、。要想使細(xì)胞脫離附著底物表面和離散成單個(gè)細(xì)胞，必須使用胰蛋白酶等消化液消化，如果消化過(guò)頭或不當(dāng)，消化液則可以使細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)損傷，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。懸浮型細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)不貼附于支持物上，而是呈懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)在培養(yǎng)液中，其優(yōu)點(diǎn)是細(xì)胞生存空間大，容許時(shí)間長(zhǎng)，能繁殖多量細(xì)胞，在與藥物作用時(shí)，可以與藥物充分接觸，藥物敏感性高，而且不需用消化液處理，細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)不遭到破壞。HCaP 可在小鼠腹腔傳代，呈自由懸浮式生長(zhǎng)，短期內(nèi)可獲得大量活性特別好的細(xì)胞，可應(yīng)用于大規(guī)模藥物篩選之中。5.目前，因缺乏特異的腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移模型，明確的淋巴道轉(zhuǎn)移相關(guān)基因還未見(jiàn)報(bào)道。哪些基因控制調(diào)控了腫瘤的淋巴道轉(zhuǎn)移，淋巴道轉(zhuǎn)移的機(jī)制與血道轉(zhuǎn)移有何區(qū)別等都知之甚少。作為惡性上皮腫瘤早期轉(zhuǎn)移的主要形式，淋巴道轉(zhuǎn)移機(jī)制的解析對(duì)臨床腫瘤轉(zhuǎn)移的診治有著更為積極的意義?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1.李海燕,方肇勤,梁尚華。小鼠移植性肝癌(H22)模型的研究及在中醫(yī)藥抗腫瘤中的應(yīng)用，中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2000，6（1）：272.凌茂英,劉希風(fēng),鄭懷祖,等.小鼠肝癌細(xì)胞系H22-F25/L的建立及其生物學(xué)特性.中華腫瘤雜志,1991,13(1):13.3. 孫成榮, 唐建武, 孫明忠,等. 采用定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選小鼠肝癌淋巴道轉(zhuǎn)移