血涂片染色及白細胞分類計數教材課件

1、臨床檢驗基礎實驗六血涂片染色白細胞分類計數臨床檢驗基礎實驗六血涂片染色1.瑞氏染色1.1試劑成分：伊紅酸性嗜堿性染料亞甲藍（美藍）堿性嗜酸性染料甲醇固定 溶劑磷酸緩沖液（pH: 6.4-6.8）1.瑞氏染色1.2著色原理：化學親和作用+物理的吸附作用伊紅+細胞中的堿性物質紅色亞甲藍+酸性物質藍色中性物質+伊紅和亞甲藍淡紫色1.2著色原理：1.3 pH對細胞染色影響pH過低 PI 負電荷增多易與亞甲藍結合偏藍最適環(huán)境：弱酸（pH6.4-6.8）1.3 pH對細胞染色影響pH過低 PI 血涂片： 淡紫紅色 鏡 下： 成熟紅細胞粉紅色 白細胞胞質 呈現其特有的色彩 細胞核 紫紅色 染色質結構清楚判別

2、方法判別方法染色偏酸: 紅細胞、嗜酸粒細胞顆粒偏紅 白細胞核 淡紫紅色或不著色染色偏堿： 紅細胞 灰藍色 中性粒細胞顆粒 深暗、偏粗，紫黑色 嗜酸性粒細胞 暗褐色或紫黑色、藍色染色偏酸:血涂片染色及白細胞分類計數教材課件1.4器材 載玻片、推玻片、洗耳球1.5試劑 瑞氏染液（商品） I液：瑞特染料、純甲醇、甘油 I液：磷酸鹽緩沖液（KH2PO4 Na2HPO4） 1.4器材1.6 操作制備血涂片（待完全晾干） 加I液數滴覆蓋整個血膜0.5-1min 滴加等量或稍多的II液（洗耳球混勻）5-10min 沖洗（注意） 干燥 1.6 操作注意事項1.血涂片干后方可染色2.加染液不能過少3.沖洗時應以

3、流水沖洗4.染色過淡可復染，先加緩沖液再加染液5.染色過深可用水沖洗或浸泡一定時間，也可用甲醇脫色6.染色時間與染液濃度、室溫及細胞多少有關。應在具體實踐中摸索合適的時間。 注意事項2.WBC分類計數2.1原理2.2器材:顯微鏡、香柏油、拭鏡紙、清潔劑2.3操作步驟 1.采末梢血染色 2.低倍鏡下選擇細胞分布均勻、著色良好的域， 滴香柏油一滴 3.油鏡下分類，分類時要有秩序的連續(xù)進行（“幾” 字形），避免主觀選擇視野。通常分類100個白細胞，計 數并報告各種白細胞所占百分比。 4.計算 5.報告方式：XX細胞：XX%2.WBC分類計數2.1原理2.4 外周血正常白細胞形態(tài)特征:中性粒細胞：桿+

4、分10-15 m圓形胞質粉紅胞質內顆粒量多、細小、均勻、紫紅色核彎曲呈桿、帶狀染色質粗糙，紫紅色分葉核：核分2-5葉2.4 外周血正常白細胞形態(tài)特征:中性粒細胞：桿+分10-113-15 m圓形胞質著色不清胞質內顆粒粗大、整齊、均勻、充滿胞質、桔紅色核多分2葉染色質粗糙，紫紅色嗜酸性粒細胞+淋巴細胞13-15 m嗜酸性粒細胞+淋巴細胞10-12 m圓形胞質著色不清胞質內顆粒量少、大小不勻、排列零亂、紫黑色，可蓋核上核形不清染色質粗糙，紫紅色嗜堿性粒細胞10-12 m嗜堿性粒細胞6-15 m圓形/橢圓形胞質透明、淡藍色胞質內多無顆粒核形 圓/橢圓/腎形染色質粗緊成塊，深紫紅色，核外緣光滑淋巴細胞6-15 m淋巴細胞12-15 m圓/橢圓/不規(guī)則胞質半透明、灰藍色或灰紅色胞質內有細小、塵土樣紫紅色顆粒核形 不規(guī)則/山字/腎/馬碲形，扭曲折疊染色質疏松網狀，淡紫紅色，有膨脹感和立體起伏感12-15 m2.5注意事項：1.分類最佳區(qū)域為體、尾交界處2.分類時要有秩序地連續(xù)進行3.白細胞總數與分類個數4.分類中如見幼紅細胞，不計入100個細胞內，以分類100個白細胞過程中見到幼紅細胞多少個來報告，并應注明其所屬階段。