風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用培訓(xùn)課件

1、風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用概 述多數(shù)風(fēng)濕病的發(fā)病機(jī)制都與免疫失調(diào)有關(guān)， 因此檢測自身抗體（抗細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞表面和細(xì)胞外抗原的免疫球蛋白。）、補(bǔ)體、 淋巴細(xì)胞及其它免疫學(xué)成份有助于許多疾病的診斷、治療和療效判斷。對檢驗結(jié)果的判斷必須密切結(jié)合臨床，并進(jìn)行綜合分析。 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用2概 述多數(shù)風(fēng)濕病的發(fā)病機(jī)制都與免疫失調(diào)有關(guān)， 因此檢測自抗核抗體(ANA） 是指抗細(xì)胞核成分的抗體，換言之是指一組對細(xì)胞核內(nèi) DNA 、RNA、蛋白質(zhì)、或這些物質(zhì)的分子復(fù)合物的自身抗體。風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用3抗核抗體(ANA）風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)

2、用3一、核的組成及其抗原性 細(xì)胞核是由核膜、核仁、染色質(zhì)和核液組成。核膜為雙層脂質(zhì)結(jié)構(gòu)， 膜孔和內(nèi)層的蛋白具有抗原性，間接免疫熒光 檢查出現(xiàn)周邊核染色。核仁抗原包括核糖體蛋白、U3及Th小RNA s， PM-Scl抗原和核仁的Ku蛋白及增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）。染色質(zhì)是由DNA和組蛋白組成，它排列的基本結(jié)構(gòu)亞單位為核小體數(shù)百種非組蛋白， 它們具有結(jié)構(gòu)維持、基因表達(dá)及酶的作用，都是免疫反應(yīng)潛在的目標(biāo)， 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用4一、核的組成及其抗原性 細(xì)胞核是由核膜、核仁、染色質(zhì)和核液組二、檢測方法對流免疫電泳（）間接免疫熒光（）放射免疫（）免疫印跡（）酶聯(lián)免疫吸咐試驗（）風(fēng)濕病的常用

3、免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用5二、檢測方法對流免疫電泳（）風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨三、抗核抗體的種類及臨床意義 1954年Hargrave發(fā)現(xiàn)SLE 病人血液中的LE細(xì)胞, 它是抗核抗體譜檢查的起源, 它所針對的核抗原是DNA-主蛋白(DNP)，目前已采用了簡易和迅速的抗DNP抗體測定取代LE 細(xì)胞的檢查。它的陽性率在未治SLE中50-85（），RA 10 （），PSS、PM/DM 及藥物過敏等均有（）。 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用6三、抗核抗體的種類及臨床意義 1954年Hargrave發(fā)（一）分型 H均質(zhì)型：與組蛋白和抗DNA抗體有關(guān)，見于SLE, 藥物性狼瘡S斑點(diǎn)型： 與抗ENA抗體有關(guān)

4、，見于CTDP周邊型 與抗DNA抗體有關(guān)，見于SLEC著絲點(diǎn)型 與DNA蛋白結(jié)合體有關(guān)，為CREST 綜合征的標(biāo)記性抗體 N核仁型 與抗4-6sRNA有關(guān)，見于PSS不同的底物ANA的陽性率不同。風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用7（一）分型 H均質(zhì)型：與組蛋白和抗DNA抗體有關(guān)，見于SL國際以Hep-2作為基質(zhì) SLE PSS HEP-2 95 70 鼠肝 85 50 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用8國際以Hep-2作為基質(zhì) （二）分類 1、ds-DNA檢測 Farr（RIA） 結(jié)合力20（） 30 SLE TE（馬疫錐蟲） 1：5（） 1：10 SLE 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用9（

5、二）分類 1、ds-DNA檢測風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床 抗ds-DNA抗體是SLE的重要抗體。 40-60的SLE抗ds-DNA 抗體陽性,特別是活動性SLE和狼瘡腎， 其它風(fēng)濕性疾病則陽性率很低。風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用10 抗ds-DNA抗體是SLE的重要抗體。風(fēng)濕 2、抗Histon抗體 不同疾病中的陽性率（ELISA）藥物性狼瘡 約為95 SLE 5070 PM/DM 13RA 23 服INH 53SS 30 服他巴唑 20PSS 27 服苯妥因鈉 18 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用11 2、抗Histon抗體 不同疾 3、抗ENA抗體 常見七種常見的ENA抗體-SM（

6、病人名）-J0-1（病人名John）-RNP（nRNA）-PM-1（polymyositis）-SS-A（病名） -Scl-70（sclerederma）-SS-B（病名） 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用12 3、抗ENA抗體 常見七種常見的ENA抗體 抗Sm抗體 僅在SLE中出現(xiàn)的陽性率為25左右，它是SLE的標(biāo)記性抗體， 它對早期，不典型SLE及治療緩解后SLE的回顧性診斷有很大幫助 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用13 抗Sm抗體 僅在SLE中出現(xiàn)的陽性率為25左右，它是SL抗nRNP抗體 在多種風(fēng)濕病中出現(xiàn)，常與雙手腫脹，雷諾氏現(xiàn)象，指端硬化相關(guān)。當(dāng)抗nRNP 陽性而同時抗dsDNA

7、陰性，則腎病發(fā)生率較低。在METD中幾乎100 陽性 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用14抗nRNP抗體 在多種風(fēng)濕病中出現(xiàn)，常與雙手腫脹，雷諾氏現(xiàn)象抗SS-A/Ro抗體 在原發(fā)SS中70-80（），SLE 40（），RA 20（）。以鼠肝為底物的ANA檢測中，抗SS-A抗體常呈陰性反應(yīng)， 用免疫印跡法檢測時它可與60KD 和52KD 兩條蛋白多肽反應(yīng)，作者及一些文獻(xiàn)都認(rèn)為60KD的多肽在SLE中較SS更多見。進(jìn)一步的研究表明抗SS-A抗體與新生兒狼瘡，先天性房室傳導(dǎo)阻滯，光敏感相關(guān)。 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用15抗SS-A/Ro抗體 在原發(fā)SS中70-80（），SLE抗SS-B/La

8、抗體 在原發(fā)SS中50-60（），SLE 10（）故有人稱抗SS-B抗體是SS的標(biāo)記性抗體。風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用16抗SS-B/La抗體 在原發(fā)SS中50-60（），SLE 抗RIB抗體（ribosome RNP) 在SLE中24（），且常常在活動期SLE中存在，但不隨病情的緩解而消失， 可持續(xù)12年?？筊IP抗體與LN和NP較密切, 有報導(dǎo)說與在RIP陽性的SLE中37%發(fā)生NP，而RIP陰性的SLE中僅次16%發(fā)生NP，兩者有顯著差異 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用17 抗RIB抗體（ribosome RNP) 在SLE中24抗PCNA(proliferating cell

9、nuclear antigen)抗體 針對的是36Kd的DNA 聚合酶副蛋白，在SLE中2-10（), 而在其它結(jié)締組織病中陰性。 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用18抗PCNA(proliferating cell nucle抗Pm-1抗體 在PM/DM 中8-15(+) , 在PSS中3(+)。在PM與PSS重疊且伴有腎炎的病人中，陽性率可高達(dá)80% 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用19抗Pm-1抗體 在PM/DM 中8-15(+) , 在P抗Jo-1抗體在PM中25-30（) ，合并肺間質(zhì)病變時其陽性率可高達(dá)60%，被視為PM的標(biāo)記性抗體。如患者有發(fā)熱，對稱性關(guān)節(jié)炎，“工藝手”，雷諾氏現(xiàn)

10、象及肌炎并肺間質(zhì)病變，抗Jo-1抗體常陽性，此時稱之為抗Jo-1抗體綜合癥 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用20抗Jo-1抗體在PM中25-30（) ，合并肺間質(zhì)病變時抗Scl-70抗體在PSS中3040（) ，是PSS 的標(biāo)記抗體。有報道抗Scl-70抗體陽性的PSS患者肺纖維化的發(fā)生率是抗Scl-70抗體陰性患者的10倍。 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用21抗Scl-70抗體在PSS中3040（) ，是PSS 抗Ku抗體在SLE, MCTD, PSS中30-50（），DM中僅5（）。 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用22抗Ku抗體在SLE, MCTD, PSS中30-50（）抗Ki抗體和

11、抗Mi-2抗Ki抗體在SLE中8-20（）, 其價值不明。在其它風(fēng)濕病中僅很低的陽性率?？筂i-2抗體在PM中5（） 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用23抗Ki抗體和抗Mi-2抗Ki抗體在SLE中8-20（）,風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用培訓(xùn)課件總之檢測抗核抗體的意義就在于幫助一些疾病的診斷（有些抗 核抗體有較高診斷特異性），觀察治療反應(yīng)，判斷疾病的活動性。（不同抗體不同對待，如RNP,Sm就與活動性無關(guān)）。 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用25總之檢測抗核抗體的意義就在于幫助一些疾病的診斷（有些抗 核抗疾病與抗核抗體關(guān)系 AdsDNA SLE A-sm SLE A-scl-70 PSS

12、A-Centromere CREST A-Jo-1 PM A-Pm-1 PM/DM A-SSB SS A-SSA SS. SLE A-RNP MCTD. CTD A-P蛋白 SLE 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用26疾病與抗核抗體關(guān)系 AdsDNA 抗磷脂抗體（APL)抗磷脂抗體包括狼瘡抗凝因子和一組抗負(fù)電磷脂抗體目前應(yīng)用最多的是抗心磷脂抗體(AcL)，它有IgG、IgM和IgA 三種成份，IgG更具特異性，而IgA最不具特異。Acl與HLADR、DQ及C4有關(guān)。在SLE患者的AcL陽性率是3344（ELISA法），在合并有網(wǎng)狀青紫或中樞神經(jīng)病變的SLE其陽性率達(dá)80 或90，在其它風(fēng)濕病，

13、如 PSS、RA、SS和MCTD中陽性率分別是23、15、10和14。AcL 與反復(fù)動脈、靜脈血栓、習(xí)慣性流產(chǎn)、血小板減少以及神經(jīng)系統(tǒng)癥狀密切相關(guān)，是診斷抗磷脂抗體綜合征（APS）不可缺少的指標(biāo)。（1957年Conley 首次報道）風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用27抗磷脂抗體（APL)抗磷脂抗體包括狼瘡抗凝因子和一組抗負(fù)電抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體（AECA）是一種針對內(nèi)皮細(xì)胞膜蛋白的抗體。在SLE中的陽性率約14-85， 也可出現(xiàn)于RA、MCTD、SS以及一些血管炎疾病如Wegeners肉芽腫、 多 動脈炎、Behcets病以及kawasaki疾病中。IgG、IgM亞類的AECA 與疾 病活動性顯著相

14、關(guān)，AECA與血管損傷密切相關(guān)，尤其是腎臟累及時。當(dāng)血管炎發(fā)作緩解，則AECA滴度下降。 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用28抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體（AECA）風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用2抗中性粒細(xì)胞漿抗體(ANCA)是一種與中性粒細(xì)胞或單核細(xì)胞胞漿中的溶酶體酶起反應(yīng)的抗體。ANCA 可分為胞漿型ANCA(cANCA)和核周型ANCA(pANCA)，其滴度常與病情活動相關(guān)cANCA抗原主要為顆粒中的蛋白酶（PR 3 -protlinase），pANCA抗原主要為髓過氧化酶（Hyploperoxidase,MPO)。韋格氏肉芽腫病人血清中有cANCA，特異性為90。 少數(shù)巨細(xì)胞動脈炎、大動脈炎、過

15、敏性紫癜、白細(xì)胞破碎性皮膚性血管炎和白塞病等cANCA也可陽性。pANCA不如cANCA具有診斷特異性，在鏡下多動脈炎、Churg-sttrauss及其它自身免疫性疾?。ㄓ不阅懝苎?、潰瘍性，結(jié)腸炎、肝炎、狼瘡、類風(fēng)關(guān)、干燥等）中均能出現(xiàn)。ANCA可能參與血管炎的發(fā)病。 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用29抗中性粒細(xì)胞漿抗體(ANCA)是一種與中性粒細(xì)胞或單核細(xì)胞類風(fēng)濕因子(RF)RF是抗人或動物IgG分子FC片段的抗體，它不僅能與變性的IgG 反應(yīng)， 也能與自身的或異體的IgG反應(yīng)， 還能與其它抗原如核蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)。按照抗免疫球蛋白類型分為IgM-RF，IgG-RF和IgA-RF三種，后

16、種分子不易于其它非相關(guān)抗原反應(yīng)，故特異性較強(qiáng)，具有更高的診斷價值。風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用30類風(fēng)濕因子(RF)RF是抗人或動物IgG分子FC片段的抗體如今最常用于檢測RF的方法仍是乳膠凝集法(IgM型)，RA 患者中陽性率 可達(dá)80，如乳膠法RF陰性，臨床高疑RA，可用ELISA測IgG和IgA型RF。 一般抗體滴度越高，關(guān)節(jié)外的表現(xiàn)越重，疾病越活動，預(yù)后越差。在5的正常老人，其它風(fēng)濕病、細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、結(jié)核、肝炎、肺纖維化等多種疾病中都可出現(xiàn)不同比例、低滴度的RF陽性（除干燥綜合征癥為高 滴度）。此外RF檢測是劃分血清陰性關(guān)節(jié)炎是重要標(biāo)準(zhǔn)。風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用31如今最

17、常用于檢測RF的方法仍是乳膠凝集法(IgM型)，RA 淋巴細(xì)胞分型(lymphocyte typy)淋巴細(xì)胞由T、B二類組成，它們是免疫反應(yīng)中的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。在免疫系統(tǒng)中，B淋巴細(xì)胞執(zhí)行特異體液免疫功能，T淋巴細(xì)胞則執(zhí)行特異 細(xì)胞免疫和免疫調(diào)節(jié)功能。因此這二類細(xì)胞的數(shù)目及功能異常均可導(dǎo)致免疫學(xué)異常。風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用32淋巴細(xì)胞分型(lymphocyte typy)淋巴細(xì)胞由T、淋巴細(xì)胞表面表達(dá)多種蛋白分子，有些只暫時出現(xiàn)在細(xì)胞發(fā)育的某一階段，有些表達(dá)于全部細(xì)胞表面，有些分子只表達(dá)于特定功能亞群的T或B細(xì)胞表面，故稱之為分化抗原。 這些分子均可被相應(yīng)單克隆抗體識別，從而將T、B淋

18、巴細(xì)胞分成許多成熟度和活性不同的亞型。 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用33淋巴細(xì)胞表面表達(dá)多種蛋白分子，有些只暫時出現(xiàn)在細(xì)胞發(fā)育的某一部分分化抗原命名的T、B細(xì)胞分化抗原 分子量 分布及特點(diǎn) 意 義CD1 21/48 不成熟T細(xì)胞 血液病CD3 20/20/25 成熟T細(xì)胞 自身免疫病、SLE、RACD4 55 輔助T細(xì)胞 免疫活躍、免疫缺陷CD8 30/45 殺傷/抑制T細(xì)胞 SLECD25 50-55 IL-2受體鏈 自身免疫病CD45RO 80 記憶T細(xì)胞 同上，尤其是RACD19 95 早期B細(xì)胞 急性淋巴細(xì)胞白血病CD21 140 略成熟B細(xì)胞 自身免疫病CD22 135 成熟B細(xì)胞,與T 同上 細(xì)胞有協(xié)同作用 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用34部分分化抗原命名的T、B細(xì)胞分化抗原 分子量 細(xì)胞因子(cytokine)細(xì)胞因子是活細(xì)胞分泌的具有生物活性的多肽/蛋白產(chǎn)物，是免疫調(diào)節(jié)中不可缺少的物質(zhì)，同時也參與炎癥反應(yīng)。根據(jù)來源分成淋巴因子 和單核因子兩類，其中以T細(xì)胞產(chǎn)生最多，研究結(jié)果最明確， 生物學(xué)意義最明顯。如IL1-15、IF2，單核因子主要指IL1、IL6及TNF。共同 的特性是：多效性、多源性、快速反應(yīng)性及致熱原性。 風(fēng)濕病的常用免疫學(xué)檢查和臨床應(yīng)用35細(xì)胞因子(cytokine)細(xì)胞因子是活細(xì)胞分泌的具有生物活細(xì)胞因子與意義細(xì)胞因子 來源 意