GLUT1和Claudin-4在胸水轉(zhuǎn)移性肺腺癌細(xì)胞及反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞中的表達(dá)

1、GLUT1和Clauin-4在胸水轉(zhuǎn)移性肺腺癌細(xì)胞及反映性增生間皮細(xì)胞中的表達(dá)汪露祥;陳龍;吳獻(xiàn)忠;謝翠艷;蔣振;方威;鐘善傳【摘要目的探討聯(lián)合檢測(cè)胸水中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(GLUT1)和緊密連接蛋白- 用免疫組化法檢測(cè)GLUT1和在30 例肺腺癌、25 例反映性增生間皮細(xì)胞胸水中的表達(dá)情況并且分析二者單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)關(guān)于肺腺癌診斷的靈敏度及特異性. 結(jié)果肺腺癌細(xì)胞GLUT1和呈陽(yáng)性反映性增生間皮細(xì)胞GLUT1和呈陰性.兩種抗體聯(lián)合檢測(cè)關(guān)于肺腺癌診斷的靈敏度和特異性訣別為 100 和92.0.結(jié)論聯(lián)合檢測(cè)胸水GLUT1和關(guān)于轉(zhuǎn)移性肺腺癌細(xì)胞和反映性 增生間皮細(xì)胞的診斷及辨別診斷具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)

2、值.【期刊名稱(chēng)】皖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)【年(卷),期】2015(034)006【總頁(yè)數(shù)】4 頁(yè)(P538-541)【關(guān)鍵詞】葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 1;緊密連接蛋白-4; 胸水;肺腺癌;間皮細(xì)胞【作者】汪露祥;陳龍;吳獻(xiàn)忠;謝翠艷;蔣振;方威;鐘善傳黃山市人民醫(yī)院病理科安徽黃山 245000; 黃山市人民醫(yī)院病理科安245000黃山市人民醫(yī)院病理科245000黃山市人民醫(yī)院病理科,245000黃山市人民醫(yī)院病理科245000黃山市人民醫(yī)院病理科245000; 532 醫(yī)院病理科245000【正文語(yǔ)種】中 文【中圖分類(lèi)】R734.2扶助胸水細(xì)胞學(xué)診斷成為研究熱點(diǎn)。葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白是介導(dǎo)哺乳動(dòng)物細(xì)胞 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)的主

3、要載體，其中GLUT1是目前已知體內(nèi)分布最為廣泛的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體。近年來(lái)，不斷有報(bào)道認(rèn)為GLUT1表達(dá)于許多惡性腫瘤，而在反映性增生間皮細(xì)胞中不表達(dá)。蛋白，在上皮細(xì)胞中廣泛表達(dá)，而在間皮細(xì)胞中表達(dá)缺失。最近的研究表明在辨別肺腺癌細(xì)胞和間皮瘤細(xì)胞中具有重要意義。本研究在細(xì)胞蠟塊的基礎(chǔ)上，行免疫組化聯(lián)合檢測(cè)GLUT1 和癌細(xì)胞，填補(bǔ)單純細(xì)胞學(xué)檢測(cè)的局限性，為臨床診斷、治療及判斷預(yù)后提供更為可靠的依據(jù)。資料與方法2011 12 月2014 12 月胸55 30 16 14 45 77 歲(57 歲25 13 12 5273 歲(58 歲)。一切病歷均經(jīng)活檢或組織病理檢查明確診斷。細(xì)胞切片的制備收集新鮮

4、胸水標(biāo)本200mL 左右，室溫下3000離 心 10 。取沉渣表層細(xì)胞，經(jīng)福爾馬林固定，石蠟包埋制成細(xì)胞塊。切片3張，1 張用于HE染色，常規(guī)細(xì)胞學(xué)檢查;另2張?jiān)E別用于GLUT1和免疫組染色。免疫組化染色免疫組化染色采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶，SP)法。石蠟切片厚23m，操作按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，胸水紅細(xì)胞作為GLUT1 內(nèi)源性陽(yáng)性關(guān)于照，已知 陽(yáng)性切片作為性關(guān)于照，PBS代替一抗作陰性關(guān)于照。GLUT1抗體購(gòu)自福州邁新生物有限公司， 抗體購(gòu)自北京中杉金橋生物有限公司。結(jié)果判定方法GLUT1和陽(yáng)性顆粒均呈棕黃色，陽(yáng)性表達(dá)主要定位 于胞膜，胞質(zhì)偶有弱表達(dá)，兩者均在細(xì)胞連接處更為鮮明。無(wú)色、

5、染色淺與背景簡(jiǎn)直一致及高倍視野下陽(yáng)性細(xì)胞占同類(lèi)細(xì)胞的5%以下為陰性陽(yáng)性染色占6% 25% 為(+)，26% 50% 為()，51% 75% 為)，75%以上為()。SPSS13.0 2 試驗(yàn)。GLUT1和聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度和特異性采用平行試驗(yàn)方法。結(jié)果胸水細(xì)胞塊GLUT1GLUT1呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，呈棕黃色顆粒外觀，主要定位于胞膜，紅細(xì)胞也呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(1)。30例肺腺癌細(xì)28例癌細(xì)胞GLUT193.3。25例反映性增生間皮細(xì)胞胸1例呈弱陽(yáng)性表達(dá)4，且為胞膜淡淺著色。轉(zhuǎn)移性肺腺癌細(xì)胞與反映性增生間皮細(xì)胞的GLUT1 陽(yáng)性率具有顯著性差異(P0.01) 1。1GLUT1在肺腺癌細(xì)胞中的表達(dá)腺癌細(xì)胞胞膜

6、呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)紅色箭頭胞作為陽(yáng)性關(guān)于照亦呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(綠色箭頭)，間皮細(xì)胞呈陰性(藍(lán)色箭頭)。S-P 法，400胸水細(xì)胞塊免疫組化染色結(jié)果在29 例(29/30) 肺腺癌細(xì)胞中呈陽(yáng)性表達(dá)，大部分呈膜彌漫強(qiáng)陽(yáng)性(圖2)，少部分呈膜中等強(qiáng)度染色。25 例反映性增生間皮細(xì)胞中僅1例呈弱陽(yáng)性(+)，占4%，其余24 例均為陰性。轉(zhuǎn)移性肺腺癌細(xì)胞與反映性增生間皮細(xì)胞的陽(yáng)性率具有顯著性差異(P 0.01)，見(jiàn)表2。圖2)，間皮細(xì)胞呈陰性藍(lán)色箭頭。S-P 法，400表1胸水細(xì)胞GLUT1免疫組化染色結(jié)果例數(shù)陽(yáng)性例數(shù)(%)表達(dá)水平+ 2值P 值肺腺癌3028(93.3)22711843.6600.000反映性間

7、皮細(xì)251(4.0)24 1 0 0 0表2 胸水細(xì)胞免疫組化染色結(jié)果例數(shù)陽(yáng)性例數(shù)(%)表達(dá)水平+ 2值P 值肺腺癌3029(96.6)14610947.2290.000反映性間皮細(xì)胞251(4.0)24 1 0 0 0GLUT1和聯(lián)合檢測(cè)在胸水中的診斷價(jià)值從GLUT1和在胸水細(xì)胞的免疫組化結(jié)果來(lái)看，大部分肺腺癌細(xì)胞GLUT1 均呈陽(yáng)性，而反映性增生間皮細(xì)胞GLUT1 呈陰性。經(jīng)過(guò)計(jì)算兩者聯(lián)合檢測(cè)100% ，特異性為92.0% 。見(jiàn)表 3 。表3聯(lián)合檢測(cè)GLUT1和關(guān)于肺腺癌診斷的靈敏度和特異性GLUT1 靈敏度(%)93.396.6100.0特異性(%)96.096.092.0討論在胸水細(xì)胞

8、學(xué)診斷中，常規(guī)細(xì)胞學(xué)涂片具有簡(jiǎn)捷方便、快速經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，但是由于涂片方法本身的局限性容易造成細(xì)胞厚薄不均、結(jié)構(gòu)不清，甚至出現(xiàn)人工假象，給然而，轉(zhuǎn)移性腺癌細(xì)胞與反映性增生間皮細(xì)胞有時(shí)在形態(tài)上十分相似，僅靠細(xì)胞學(xué) 形態(tài)往往不足以診斷，需要進(jìn)一步檢查才能明確診斷。當(dāng)胸水內(nèi)的癌細(xì)胞僅表現(xiàn)為 反復(fù)的細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果卻未見(jiàn)惡性腫瘤細(xì)胞。近年來(lái)，以細(xì)胞蠟塊為基礎(chǔ)的免疫組 化染色不斷應(yīng)用于細(xì)胞學(xué)診斷。本研究利用細(xì)胞蠟塊技術(shù)，經(jīng)過(guò)免疫組化方法聯(lián)合 檢測(cè)GLUT1和，評(píng)估它們關(guān)于胸水轉(zhuǎn)移性肺腺癌與反映性增生上皮細(xì)胞 的辨別診斷價(jià)值。GLUT1是目前已知體內(nèi)分布最為廣泛的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，絕大多數(shù)組織細(xì)胞不能運(yùn)輸葡萄糖1

9、3。研究表明，GLUT1僅在少量正常組織中表達(dá)，囊括在紅細(xì)滋養(yǎng)層和血管，在反映性增生間皮細(xì)胞中不表達(dá)4。腫瘤細(xì)胞的主要特點(diǎn)是持研究表明，GLUT1在上皮源性惡性腫瘤中廣泛表達(dá)，如肺癌、乳腺癌、膀胱癌、GLUT1 在惡性間皮瘤中也呈陽(yáng)性表達(dá)1， 5GLUT1可能作為惡性腫瘤的分子標(biāo)志物。因此，在胸水細(xì)胞中GLUT1表達(dá)陽(yáng)性提示上皮性腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移或惡性間皮瘤。本研究表明，GLUT1在93.396.0，可作為辨別轉(zhuǎn)移性肺腺癌細(xì)胞與反映性增生間皮細(xì)胞的分子標(biāo)志物。瘤的一個(gè)重要形態(tài)學(xué)特征就是瘤細(xì)胞的排列極向消失，因此也是腫瘤轉(zhuǎn)移進(jìn)程中重要的一步6。是家族的主要成員之一，主要分布在肺、腎、小腸、結(jié)腸和腦組

10、織中。近年的研究表明，Clauin-4 在原發(fā)性卵巢癌、結(jié)直腸癌、食管癌、胃癌、膽管癌、子宮內(nèi)膜癌、膀胱癌及前列提示可用于辨別腺癌細(xì)胞與反映性增生間皮細(xì)胞7 。我們的研究表明在胸水轉(zhuǎn)移性肺腺癌細(xì)胞的靈敏度為96.6%，特異性為96.0%，是辨別胸水轉(zhuǎn)移性肺腺癌與反映性增生間皮細(xì)胞的一個(gè)很好的指標(biāo)。在目前的臨床病理診斷工作中，CK7(Cytokeratin 7，細(xì)胞角蛋白7)和TTF- 1(Thyroifactor-1，甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1)作為常規(guī)肺腺癌標(biāo)記物， 而，鈣接合蛋)和，間皮細(xì)胞蛋白)作為間意義進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，CK7TTF-188， 100%;CR 與MC60，特異性為95%8。我

11、們經(jīng)過(guò)聯(lián)合檢測(cè)胸水GLUT1和性增生間皮細(xì)胞的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)具有兩個(gè)重要意義。首先，GLUT1和二者聯(lián)合標(biāo)記關(guān)于胸水轉(zhuǎn)移性肺腺癌細(xì)胞的靈敏度和特異性訣別為100%和92.0%，優(yōu)于常規(guī)CK7、TTF-1、CR和MC 四種抗體的聯(lián)合檢測(cè)，為臨床病理診斷提供了更好的選擇。其次，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，GLUT1 表達(dá)于惡性間皮瘤1，5，而不表達(dá)9。因此，GLUT1和惡性間皮瘤細(xì)胞和反映性增步的研究工作提供了重要的基礎(chǔ)資料?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1MinatoH ，KuroseNM，et ofIMP3，GLUT1，EMA，C146 ，anfor from JPathol，20142IkeaK，TateG，SuzukiT，etofEMA，IMP3，anGLUT-1fortheoffromCytopathol，2011 401.3俞曉燕，孫子林.GLUT1 的研究進(jìn)展J.現(xiàn)代中西醫(yī)接合雜志，2012 ，3414.4KatoY，TsutaK，SekiK，etof GLUT-1canbetweenanJ.MoPathol，2007220.5Husain MK A ，et useful GLUT-1 an froman stuyJ.LungCancer，2014328.6向若蘭，蘇運(yùn)超，裴曉慶，等.緊密連接蛋白的研究進(jìn)展J.生理科學(xué)進(jìn)展，2012314.7