高效液相色譜法測定安眠補腦口服液中2354四羥基二苯乙

1、高效液相色譜法測定安眠補腦口服液中2，3，5，4，-四羥基二苯乙【摘要】目的建立高效液相色譜法測定安眠補腦口服液中2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷的含量。方法以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;乙腈-水(1585)作為流動相，檢測波長為320n，外標(biāo)法定量。結(jié)果2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷線性范圍0.24844.968g(r=0.9999)，平均回收率為98.73%。結(jié)論方法簡便、快速、準(zhǔn)確，合適于該產(chǎn)品質(zhì)量檢驗分析?！娟P(guān)鍵詞】安眠補腦口服液;高效液相色譜法;2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷安眠補腦口服液原標(biāo)準(zhǔn)中測定制何首烏中水解產(chǎn)物大黃素的含量

2、，由于大黃素的含量因水解條件的不同而造成波動，影響測定結(jié)果的穩(wěn)定性和規(guī)律性。本文采用高效液相色譜法，測定處方中主藥制何首烏所含有效成分2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷的含量，參照?中國藥典?2000年版一部制何首烏中2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷的含量測定方法，建立了一種靈敏度高，專屬性強的高效液相色譜法測定制劑中2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷的含量方法。1儀器與試藥高效液相色譜儀：Agilent1100SeriesVD紫外檢測器、依利特Hyperisil18色譜柱(4.6250，10，大連依利特)，L-350A型超聲波中藥處理機(濟寧市中區(qū)

3、魯超儀器廠);2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷對照品(含量測定用，批號購自中國藥品生物制品檢定所)，試劑均為分析純和色譜純，水為重蒸餾水。2方法與結(jié)果2.1耐用性實驗2.1.1色譜條件影響因素確實定檢測波長確實定：測定波長對測定方法的檢測影響較大，故方法經(jīng)實驗進展確定。參考文獻12，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷檢測波長為320n，取2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷適量，加稀乙醇溶解，以稀乙醇作空白，在波長200400n之間掃描，結(jié)果2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷在320n處有最大吸收峰，與文獻報道一致，從而確定本法采用320n為

4、檢測波長。色譜條件確定：色譜柱為大連依利特Hyperisil18(4.6250，10)，柱溫30，流速1.0l/in，以上均采用常規(guī)條件。流動相確實定：參照?中國藥典?2000年部和2022年版部制何首烏的含量測定方法，選擇乙腈-水(1585)作為流動相，對2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷對照品別離較好，此條件下2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷與其它組分均能到達基線別離。不同品牌色譜柱測定結(jié)果：分別選用Hypersil18(4.6250，10，大連依利特制造)和AzhR18(4.6250，5)配制一定量2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷對照品溶液，

5、分別進樣10l，色譜峰對稱性較好，測定理論塔板數(shù)，根據(jù)測定結(jié)果，理論板數(shù)按2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷峰計算，應(yīng)不低于4000。見表1。表1理論塔板數(shù)測定結(jié)果2.1.2供試品溶液的制備因該藥味在處方中為水提物，成分在成型的液體制劑中應(yīng)屬溶解狀態(tài)，故制備時將溶液制成含醇量為50%，合適2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷溶解的溶液中即可。取本品5l置10l量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，靜置，即得。2.1.3穩(wěn)定性和重復(fù)性實驗為對供試液穩(wěn)定性和方法系統(tǒng)適用性實驗中重復(fù)性進展考察，取供試品溶液10l注入液相色譜儀中，重復(fù)進樣5次，結(jié)果峰面積積分值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏向RSD2.

6、0%，說明本方法穩(wěn)定性和重復(fù)性良好。結(jié)果見下表2。表2精細度實驗結(jié)果2.2線性關(guān)系考察精細稱取枯燥至恒重的2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷6.21g，置25l量瓶中，加稀乙醇適量溶解，并稀釋至刻度，搖勻(0.2484g/l)。分別精細汲取1.0，3.0，5.0，12.0，20.0l，注入液相色譜儀中測定，得線性方程為Y=911.69X-78.88(其中Y為積分值，X為進樣量)，相關(guān)系數(shù)r為0.9999，說明2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷進樣量在0.24844.968g之間范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。結(jié)果見表3。表3線性關(guān)系考察結(jié)果2.3精細度實驗按照分析方

7、法驗證指導(dǎo)原那么，對方法的精細度按重復(fù)性內(nèi)容進展考察。取本品(批號20220306)6份，按標(biāo)準(zhǔn)草案正文所述方法，制成供試液，依法測定含量，結(jié)果相對標(biāo)準(zhǔn)偏向2.0%，說明本方法重復(fù)性良好。結(jié)果見表4。表4重復(fù)性實驗結(jié)果轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.4專屬性實驗按一個處方量配制缺制何首烏藥材的陰性樣品，汲取上述溶液5l，注入高效液相色譜儀中測定，可得缺制何首烏陰性樣品色譜圖，與供試品及對照品溶液同法制成的供試品色譜圖和對照品色譜圖中相比擬，供試品及對照品溶液中對照品峰保存時間一樣，陰性樣品無干擾。2.5最小檢出限測定按正文所述色譜條件，將2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷對照品溶液稀釋

8、配制至濃度為2.020g/l，分別進樣2，5，10l，結(jié)果當(dāng)進樣量為2l時，2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷對照品的色譜峰面積約為基線噪音的3倍，故最小檢出量為2.024g/l210-3l=4.04810-3g，說明高效液相色譜儀測定2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷靈敏度較高。2.6準(zhǔn)確度采用加樣回收法，取含量樣品(20220306，含量平均值為0.2971g/l)共6份，每份3l，分別置10l量瓶中，各參加2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷對照品溶液(0.2484g/l)5l，按正文所述方法測定，以下式計算回收率，結(jié)果說明本方法具有良好的回收率。

9、結(jié)果見表5。計算公式：回收率(%)=測出對照品量-制劑中原有對照品量添加對照品量表5回收率測定結(jié)果2.7樣品含量測定及限度確定取樣品10批，按草案正文含量測定方法，測定，計算含量。結(jié)果見表6。表610批樣品含量測定結(jié)根據(jù)上述實驗結(jié)果，考慮到消費實際以及制何首烏藥材質(zhì)量差異，本標(biāo)準(zhǔn)暫定本品每支含制何首烏以2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷(9H84)計不得少于0.12g。2.8范圍確實定為了確定方法能到達的準(zhǔn)確測定的區(qū)間，實驗考察了擬定范圍的極端的準(zhǔn)確度和精細度。實驗根椐測定樣品結(jié)果和由此擬定的限度。2.8.1將范圍下限設(shè)在限度約-50%左右處即取樣為0.12g/l5l50%=0.

10、3g的相當(dāng)量，在此量處進展準(zhǔn)確度的考察。方法是取含量樣品(20220306，含量平均值為0.2971g/l)共6份，每份1l，分別置10l量瓶中，各參加2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷對照品溶液(0.248g/l)1l，按正文所述方法測定，以下式計算回收率，結(jié)果說明本方法具有良好的回收率。結(jié)果見表7。計算公式：回收率(%)=測出對照品量-制劑中原有對照品量添加對照品量表7范圍測定回收率結(jié)果樣品號取樣量/g制劑中原有對照品量/g參加對照品量/g測出對照品量/g回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)110.290.24840.537799.72210.290.24840.5369

11、99.40310.290.24840.537799.7299.370.4410.290.24840.536699.28510.290.24840.535398.75n=52.8.2將范圍上限設(shè)在限度約200%左右處即取樣為0.12g/l5l200%=1.2g的相當(dāng)量，在此量處進展準(zhǔn)確度的考察。方法是取含量樣品(20220306，含量平均值為0.2971g/l)共6份，每份5l，分別置具塞量瓶中，各參加2，3，5，4，-四羥基二苯乙烯-2-D葡萄糖苷對照品溶液(0.2484g/l)5l，按正文所述方法測定，以下式計算回收率，結(jié)果說明本方法具有良好的回收率。結(jié)果見表8。計算公式：回收率(%)=測出對照品量-制劑中原有對照品量添加對照品量表8回收率測定結(jié)果3討論2，3，5，4，-四羥基