大腸桿菌染色體制備_第1頁
大腸桿菌染色體制備_第2頁
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大腸桿菌染色體制備_第4頁
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1、關(guān)于大腸桿菌染色體的制備第1頁，共9頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)4分，星期三一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握制備大腸桿菌染色體DNA的方法2.為 PCR擴(kuò)增目的基因的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備好模板第2頁，共9頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)4分，星期三二、實(shí)驗(yàn)原理 大腸桿菌染色體DNA的制備首先收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，然后用SDS破裂細(xì)胞，破細(xì)胞后，蛋白質(zhì)經(jīng)蛋白酶消化、酚：氯仿除去，最后用乙醇沉淀核酸， RNA經(jīng)RNA酶消化除去，最終獲得了染色體DNA。第3頁，共9頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)4分，星期三三、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 1.菌株大腸桿菌DH5 2.儀器離心機(jī) 3.器皿玻璃離心管（10 mL）、移液管（10mL、

2、5mL）、微量取樣器、燒杯、玻璃棒、試管、三角瓶第4頁，共9頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)4分，星期三 4.試劑（1）LB 完全肉湯培養(yǎng)液：1%胰蛋白胨、0.5%酵母粉、0.1%NaCl pH7.4。（2）SET 溶液：20%蔗糖、50mmol/L TrisHCl（pH7.6）、 50mmol/L EDTA。（3）20%SDS （4）酚：氯仿 （5）乙醇 （6）RNase溶液 （7）蛋白酶K 20mg/ml第5頁，共9頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)4分，星期三四、實(shí)驗(yàn)步驟1.細(xì)胞收集已培養(yǎng)好的菌液收集于10mL的離心管中8000rpm離心5min去上清，留沉淀菌體第6頁，共9頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)4分，星期三2.細(xì)胞裂解 沉淀菌體加入溶菌酶液（8 mg溶菌酶/1mLSET）加1mL20% SDS，使細(xì)胞裂解50L 20mg/mL蛋白酶，混勻5000rpm離心10min，棄沉淀 第7頁，共9頁，2022年，5月20日，20點(diǎn)4分，星期三3.DNA分離取上清加等體積的酚：氯仿，混勻3500rpm離心10 min取上清加入2倍體積的乙醇沉淀核酸3500rpm離心10 min棄上清加RNase溶液第8頁，共9頁，2022年，5月20日，2

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