方法學(xué)驗(yàn)證方案

1、方法學(xué)驗(yàn)證方案方法學(xué)驗(yàn)證方案方法學(xué)驗(yàn)證方案資料僅供參考文件編號：2022年4月方法學(xué)驗(yàn)證方案版本號： A修改號： 1頁 次： 1.0 審 核： 批 準(zhǔn): 發(fā)布日期： *含量測定方法學(xué)確認(rèn)方案日期：2016年1月驗(yàn)證方案審查與批準(zhǔn)您下面的簽字表明您已審閱此份驗(yàn)證方案并同意實(shí)施。姓 名職 務(wù)簽 名日 期起草人姓 名職 務(wù)簽 名日 期審核人審核人姓 名職 務(wù)簽 名日 期批準(zhǔn)人目 錄 TOC o 1-3 1.目的 : 對照品進(jìn)兩針的平均峰面積； : 對照品第一針峰面積； : 對照品第二針峰面積。9 驗(yàn)證實(shí)施線性實(shí)驗(yàn)?zāi)康模涸谠O(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度應(yīng)符合規(guī)定。滴定法實(shí)

2、驗(yàn)過程同一人同時(shí)取同一批樣品，各10片，剪碎，取一片重樣品1、樣品2、樣品3、樣品4、樣品5，各精密稱定，加氯仿25ml回流3次，每次1小時(shí)，合并提取液，置水浴上揮干，殘?jiān)肔鹽酸液5ml使溶解，濾過，濾液置入分液漏斗中，用水10ml分次洗滌容器，洗液并入分液漏斗中，加氯化鈉約6g與1mol/L氫氧化鈉液5ml,搖勻，用三氯甲烷振搖提取5次（25、20、10、10、10ml）,每次三氯甲烷提取液均用同一飽和氯化鈉液5ml振搖洗滌，再依次分別通過同一裝有無水硫酸鈉1g的脫脂棉層濾過。合并三氯甲烷液，精密加硫酸滴定液（L）10ml及新沸過的冷水20ml，振搖提取后，分取酸層，氯仿層再用新沸過的冷水

3、洗滌3次，每次10ml，合并酸液與洗滌液，置水浴上加熱，除去殘留的三氯甲烷，放冷至室溫，加甲基紅指示液2滴，用氫氧化鈉滴定液（L）滴定。每1ml的硫酸液（L）相當(dāng)于的C15H24N2O2。本品每片含總生物堿以氧化苦參堿(C15H24N2O)計(jì)，應(yīng)為標(biāo)示量的%。相對偏差（dr%）不得超過%。 以樣品滴定過程中消耗氫氧化鈉的體積為橫坐標(biāo)，以樣品含量為縱坐標(biāo)，繪制回歸方程?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)（相關(guān)系數(shù)dr%）。 記錄：將實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄在*滴定含量測定線性實(shí)驗(yàn)記錄內(nèi)，見附錄。高效液相 對照品配制：取*一瓶精密稱取置25ml容量瓶中、*對照品兩瓶精密稱取置50ml量瓶中，加乙腈：無水乙醇（85:15）溶解至刻度。

4、分別精密量取氧化苦參堿、苦參堿5ml；氧化苦參堿1ml、苦參堿10ml；氧化苦參堿2ml、苦參堿20ml，分別置25ml容量瓶中，加乙腈：無水乙醇（85:15）至刻度。既得。樣品制備：取已剪碎的樣品約，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨水，精密加入三氯甲烷25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，加三氯甲烷補(bǔ)足損失重量，濾過，精密吸取續(xù)濾液5ml，水浴上揮干，用乙腈-無水乙醇（85:15）定溶至25ml量瓶中，搖勻，用m濾膜濾過，即得。測定法： 分別精密吸取對照品溶液5l與供試品溶液510l，注入高效液相色譜儀，測定，即得。本品每片*，不得少于 mg。 以對照品的吸取量（峰面積）為橫坐標(biāo)，以樣

5、品含量（峰面積）為縱坐標(biāo)，繪制回歸方程可接受標(biāo)準(zhǔn)（相關(guān)系數(shù)RSD2%）。 記錄：將實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄在*高效含量測定線性實(shí)驗(yàn)記錄內(nèi)，見附錄5。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)?zāi)康模涸谝?guī)定范圍內(nèi)，取同一批次的樣品品，用5個(gè)測定結(jié)果進(jìn)行評價(jià)，得到的結(jié)果RSD應(yīng)符合要求。滴定法：實(shí)驗(yàn)過程取同一批樣品，10片，剪碎，取一片重樣品1、樣品2、樣品3、樣品4、樣品5各精密稱定，加氯仿25ml回流3次，每次1小時(shí)，合并提取液，置水浴上揮干，殘?jiān)肔鹽酸液5ml使溶解，濾過，濾液置入分液漏斗中，用水10ml分次洗滌容器，洗液并入分液漏斗中，加氯化鈉約6g與1mol/L氫氧化鈉液5ml,搖勻，用三氯甲烷振搖提取5次（25、20、10、10

6、、10ml）,每次三氯甲烷提取液均用同一飽和氯化鈉液5ml振搖洗滌，再依次分別通過同一裝有無水硫酸鈉1g的脫脂棉層濾過。合并三氯甲烷液，精密加硫酸滴定液（L）10ml及新沸過的冷水20ml，振搖提取后，分取酸層，氯仿層再用新沸過的冷水洗滌3次，每次10ml，合并酸液與洗滌液，置水浴上加熱，除去殘留的三氯甲烷，放冷至室溫，加甲基紅指示液2滴，用氫氧化鈉滴定液（L）滴定。每1ml的硫酸液（L）相當(dāng)于的C15H24N2O2。本品每片含總生物堿以*%。相對偏差（dr%）不得超過%?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)（相關(guān)系數(shù)dr%）。 記錄：將實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄在*滴定含量測定重復(fù)性實(shí)驗(yàn)記錄內(nèi)，見附錄5。 高效 實(shí)驗(yàn)過程 對照品配

7、制：對照品溶液的制備： 取苦參堿、氧化苦參堿對照品母液適量，置同一量瓶中，加乙腈-無水乙醇（85:15）制成每1ml含苦參堿和氧化苦參堿35g的溶液，搖勻，即得。樣品制備：取同一批樣品10片，剪碎并分別取樣品1、樣品2、樣品3、樣品4、樣品5約，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨水，精密加入三氯甲烷25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，加三氯甲烷補(bǔ)足損失重量，濾過，精密吸取續(xù)濾液5ml，水浴上揮干，用乙腈-無水乙醇（85:15）定溶至25ml量瓶中，搖勻，用m濾膜濾過，即得。測定法： 分別精密吸取對照品溶液5l與供試品溶液510l，注入高效液相色譜儀，測定，即得。本品每片含苦參總堿以苦參堿

8、(C15H24N2O)與氧化苦參堿（C15H24N2O2）的總量計(jì)，不得少于 mg?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)（相關(guān)系數(shù)RSD2%）。 記錄：將實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄在*高效含量測定重復(fù)性實(shí)驗(yàn)記錄內(nèi)，見附錄5。 中間精密度實(shí)驗(yàn) 目的：含量測定中，一個(gè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不同的人、在不同時(shí)間（通常是不同天）測定得到的結(jié)果RSD應(yīng)符合要求。 滴定含量 實(shí)驗(yàn)過程 兩名實(shí)驗(yàn)人員分別在不同時(shí)間（通常是不同天）各取同一批號苦參膜10片，精密稱定，剪碎，各精密稱取本品3份（每份約），加氯仿25ml回流3次，每次1小時(shí)，合并提取液，置水浴上揮干，殘?jiān)肔鹽酸液5ml使溶解，濾過，濾液置入分液漏斗中，用水10ml分次洗滌容器，洗液并入分液漏斗中，加

9、氯化鈉約6g與1mol/L氫氧化鈉液5ml,搖勻，用三氯甲烷振搖提取5次（25、20、10、10、10ml）,每次三氯甲烷提取液均用同一飽和氯化鈉液5ml振搖洗滌，再依次分別通過同一裝有無水硫酸鈉1g的脫脂棉層濾過。合并三氯甲烷液，精密加硫酸滴定液（L）10ml及新沸過的冷水20ml，振搖提取后，分取酸層，氯仿層再用新沸過的冷水洗滌3次，每次10ml，合并酸液與洗滌液，置水浴上加熱，除去殘留的三氯甲烷，放冷至室溫，加甲基紅指示液2滴，用氫氧化鈉滴定液（L）滴定。每1ml的硫酸液（L）相當(dāng)于的C15H24N2O2。 可接受標(biāo)準(zhǔn)（同一人實(shí)驗(yàn)結(jié)果RSD%；兩人間的RSD%）記錄：將實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄在*滴

10、定含量測定中間精密實(shí)驗(yàn)記錄內(nèi)，見附錄5。高效兩名實(shí)驗(yàn)人員用同一批對照品分別在不同時(shí)間（通常是不同天）各取同一批號苦參膜10片，精密稱定，剪碎，各精密稱取本品3份（每份約），置具塞錐形瓶中，加濃氨水，精密加入三氯甲烷25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，加三氯甲烷補(bǔ)足損失重量，濾過，精密吸取續(xù)濾液5ml，水浴上揮干，用乙腈-無水乙醇（85:15）定溶至25ml量瓶中，搖勻，用m濾膜濾過，即得。測定法： 分別精密吸取對照品溶液5l與供試品溶液510l，注入高效液相色譜儀，測定，即得。本品每片含苦參總堿以苦參堿(C15H24N2O)與氧化苦參堿（C15H24N2O2）的總量計(jì)，不得少于 mg。

11、可接受標(biāo)準(zhǔn)（同一人實(shí)驗(yàn)結(jié)果RSD%；兩人間的RSD%）。記錄：將實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄在*高效含量測定中間精密度實(shí)驗(yàn)記錄內(nèi)，見附5。 含量測定準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn) 目的：含量測定中，用已確定的方法測定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般用回收率（%）表示，得到的結(jié)果RSD應(yīng)符合要求。 實(shí)驗(yàn)過程精密稱取同一已知含量的供試品9份（每份約），分別置于圓底燒瓶中，分成三組，分別向第一組的每一份供試品中加入濃度為（35g/ml）的氧化苦參堿對照品2 ml；向第二組的每一份供試品中加入濃度為（35g/ml）的氧化苦參堿對照品5ml；向第三組的每一份供試品中加入濃度為（35g/ml）的氧化苦參堿對照品7 ml。加氯仿25ml

12、回流3次，每次1小時(shí)，合并提取液，置水浴上揮干，殘?jiān)肔鹽酸液5ml使溶解，濾過，濾液置入分液漏斗中，用水10ml分次洗滌容器，洗液并入分液漏斗中，加氯化鈉約6g與1mol/L氫氧化鈉液5ml,搖勻，用三氯甲烷振搖提取5次（25、20、10、10、10ml）,每次三氯甲烷提取液均用同一飽和氯化鈉液5ml振搖洗滌，再依次分別通過同一裝有無水硫酸鈉1g的脫脂棉層濾過。合并三氯甲烷液，精密加硫酸滴定液（L）10ml及新沸過的冷水20ml，振搖提取后，分取酸層，氯仿層再用新沸過的冷水洗滌3次，每次10ml，合并酸液與洗滌液，置水浴上加熱，除去殘留的三氯甲烷，放冷至室溫，加甲基紅指示液2滴，用氫氧化鈉滴

13、定液（L）滴定。每1ml的硫酸液（L）相當(dāng)于的C15H24N2O2。 測定法 將測得的總含量減去供試品中已知含量，計(jì)算每組的回收率。 可接受標(biāo)準(zhǔn)（實(shí)驗(yàn)結(jié)果回收率%）。 記錄：將實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄在*滴定含量測定準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)記錄內(nèi)，見附錄8。高效 對照品制備：對照品溶液的制備： 取苦參堿、氧化苦參堿對照品母液適量，置同一量瓶中，加乙腈-無水乙醇（85:15）制成每1ml含苦參堿和35g的溶液，搖勻，即得。 供試品制備：精密稱取同一已知含量的供試品9份（每份約），置具塞錐形瓶中，加濃氨水，精密加入三氯甲烷25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，加三氯甲烷補(bǔ)足損失重量，濾過，精密吸取續(xù)濾液5ml，水浴上

14、揮干，用乙腈-無水乙醇（85:15）定溶至25ml量瓶中，搖勻，用m濾膜濾過，即得。分成三組（每組3份樣品），分別向第一組的每一份供試品中加入濃度為（每1ml含苦參堿和氧化苦參堿35g的溶液）的對照品2 ml；向第二組的每一份供試品中加入濃度為（每1ml含苦參堿和氧化苦參堿35g的溶液）的對照品5ml；向第三組的每一份供試品中加入濃度為（每1ml含苦參堿和氧化苦參堿35g的溶液）的對照品7 ml。分別精密吸取對照品溶液5l與供試品溶液510l，注入高效液相色譜儀，測定，即得。 測定法 將測得的總含量減去供試品中已知含量，計(jì)算每組的回收率。 可接受標(biāo)準(zhǔn)（實(shí)驗(yàn)結(jié)果回收率%）。 記錄：將實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄在*效含量測定準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)記錄內(nèi)，見附錄8。10 偏差與變更 驗(yàn)證偏差當(dāng)該方案的某一部分無法實(shí)施或?qū)嶋H情況無法達(dá)到可接受標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，需要進(jìn)行偏差報(bào)告。當(dāng)偏差出現(xiàn)時(shí)，首先要進(jìn)行全面調(diào)查以確定該偏差是由什么引起的，之后再確定相應(yīng)的解決措施。將驗(yàn)證過程中產(chǎn)生的偏差記錄在偏差處理單中，并作為驗(yàn)證記錄附件。變更控制所有在驗(yàn)證過程中產(chǎn)生的變更都需記錄，確保所有的變更得到評估和批準(zhǔn)，驗(yàn)證的結(jié)果達(dá)到預(yù)定的目的和要求。將驗(yàn)證過程中產(chǎn)生的變更記錄