2022版生物一輪人教講義：第十單元 第33講 基因工程

1、PAGE29第33講基因工程考綱要求1基因工程的誕生。2基因工程的原理及技術(shù)含a限制酶的作用示意圖，據(jù)圖分析：1請說出EcoR限制酶和Sma限制酶識(shí)別的堿基序列及切割的位點(diǎn)。提示EcoR限制酶識(shí)別的堿基序列是GAATTC，切割位點(diǎn)在G和A之間；Sma限制酶識(shí)別的堿基序列是CCCGGG，切割位點(diǎn)在C和G之間。2以上實(shí)例說明限制酶有何特性提示說明限制酶具有專一性。命題點(diǎn)一工具酶的應(yīng)用分析12022北京，5用Xho和Sal兩種限制性核酸內(nèi)切酶分別處理同一DNA片段，酶切位點(diǎn)及酶切產(chǎn)物分離結(jié)果如圖。以下敘述不正確的是A圖1中兩種酶識(shí)別的核苷酸序列不同B圖2中酶切產(chǎn)物可用于構(gòu)建重組DNAC泳道中是用Sa

2、l處理得到的酶切產(chǎn)物D圖中被酶切的DNA片段是單鏈DNA答案D解析通過圖1可知，兩種限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA分子的不同部位，說明兩種限制性核酸內(nèi)切酶識(shí)別的核苷酸序列不同，A正確；圖2中的酶切產(chǎn)物是DNA分子片段，可用于構(gòu)建重組DNA，B正確；觀察圖1可知，該DNA片段有3個(gè)Sal酶切位點(diǎn)，故用Sal處理后，可形成4個(gè)DNA分子片段，電泳后出現(xiàn)4條電泳帶，C正確；限制性核酸內(nèi)切酶作用的是雙鏈DNA片段，因此圖中被酶切的DNA片段應(yīng)是雙鏈DNA，D錯(cuò)誤。2用限制酶EcoR單獨(dú)切割某普通質(zhì)粒，可產(chǎn)生14b1b即1000個(gè)堿基對(duì)的長鏈，而同時(shí)用限制酶EcoR、Mbo聯(lián)合切割該質(zhì)粒，可得到三種長度的D

3、NA片段，見下圖其中*表示EcoR限制酶切割后的一個(gè)黏性末端。若用Mbo限制酶單獨(dú)切割該普通質(zhì)粒，則產(chǎn)生的DNA片段的長度為A和B和6C和8D6和8答案D解析依圖示可知，該質(zhì)粒上有1個(gè)EcoR限制酶的切點(diǎn)、2個(gè)Mbo限制酶的切點(diǎn)，故用限制酶Mbo單獨(dú)切割該質(zhì)粒時(shí)，將產(chǎn)生長度為6和8的兩種片段。32022全國，40圖a中的三個(gè)DNA片段上依次表示出了EcoR、BamH和Sau3A三種限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別序列與切割位點(diǎn)，圖b為某種表達(dá)載體的示意圖載體上的EcoR、Sau3A的切點(diǎn)是唯一的。根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)，回答下列問題：1經(jīng)BamH酶切后得到的目的基因可以與上述表達(dá)載體被_酶切后的產(chǎn)物連接

4、，理由是_。2若某人利用圖b所示的表達(dá)載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組子，如圖c所示。這三種重組子中，不能在宿主細(xì)胞中表達(dá)目的基因產(chǎn)物的有_，不能表達(dá)的原因是_。3DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有_和_，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是_。答案1Sau3A兩種酶切割后產(chǎn)生的片段具有相同的黏性末端2甲、丙甲中目的基因插入在啟動(dòng)子的上游，丙中目的基因插入在終止子的下游，二者的目的基因均不能被轉(zhuǎn)錄3EcoliDNA連接酶T4DNA連接酶T4DNA連接酶解析1分析圖a可知，限制酶Sau3A與BamH切割DNA后形成的黏性末端相同，故經(jīng)這兩種酶切割得到的產(chǎn)物可以用DN

5、A連接酶進(jìn)行連接。2構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，為保證目的基因能在宿主細(xì)胞中成功表達(dá)，目的基因應(yīng)插入在啟動(dòng)子和終止子之間，據(jù)此可判斷甲、丙均不符合要求，目的基因均不能表達(dá)。3常見的DNA連接酶有EcoliDNA連接酶和T4DNA連接酶，其中T4DNA連接酶既能連接黏性末端又能連接平末端?？茖W(xué)思維限制酶的選擇方法根據(jù)目的基因兩端的限制酶切點(diǎn)確定限制酶的種類。1應(yīng)選擇切點(diǎn)位于目的基因兩端的限制酶，如圖甲可選擇a。3為避免目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化和隨意連接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，如圖甲也可選擇用H酶切后，與用BamH酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)，用得到的混合物直接轉(zhuǎn)

6、化大腸桿菌，結(jié)果大腸桿菌有的未被轉(zhuǎn)化，有的被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種，分別是含有環(huán)狀目的基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌?；卮鹣铝袉栴}：1質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有_答出兩點(diǎn)即可，而作為基因表達(dá)載體，除滿足上述基本條件外，還需具有啟動(dòng)子和終止子。2如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在上述四種大腸桿菌細(xì)胞中，未被轉(zhuǎn)化的和僅含環(huán)狀目的基因的細(xì)胞是不能區(qū)分的，其原因是_；并且_和_的細(xì)胞也是不能區(qū)分的，其原因是_。在上述篩選的基礎(chǔ)上，若要篩選含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌的單菌落，還需使用含有_的固體培養(yǎng)基。3基因工程中，某些噬菌體經(jīng)改造

7、后可以作為載體，其DNA復(fù)制所需的原料來自于_。答案1能自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因2二者均不含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均不生長含有質(zhì)粒載體含有插入了目的基因的重組質(zhì)?；蚝兄亟M質(zhì)粒二者均含有氨芐青霉素抗性基因，在該培養(yǎng)基上均能生長四環(huán)素3受體細(xì)胞解析1質(zhì)粒作為載體應(yīng)具備的基本條件有：能自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因、含有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)等。2由題意可知，未被轉(zhuǎn)化的和僅含環(huán)狀目的基因的細(xì)胞中均不含有氨芐青霉素抗性基因，所以在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上均不能生長。質(zhì)粒載體上含有氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因，插入了目的基因的重組質(zhì)粒中僅含有氨芐青霉素抗性基因，所以含有質(zhì)粒載體和含有插入了目

8、的基因的重組質(zhì)粒的細(xì)胞均能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生長，但前者可以在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上生長而后者不能，所以可用含有四環(huán)素的培養(yǎng)基，篩選出含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌單菌落。3噬菌體屬于病毒，病毒增殖過程中所需的原料、酶等均來自于受體細(xì)胞?？键c(diǎn)二基因工程的操作過程與應(yīng)用1基因工程的基本操作過程1目的基因的獲取目的基因：主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因。獲取目的基因的方法a直接分離法：從自然界已有的物種中分離，如從基因組文庫或cDNA文庫中獲取。b人工合成：如果基因比較小，核苷酸序列又已知，可以通過DNA合成儀用化學(xué)方法直接人工合成；以RNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下人工合成。擴(kuò)增目的基因：

9、利用RNA上，分別控制翻譯過程的啟動(dòng)和終止。構(gòu)建過程3將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞生物種類植物動(dòng)物微生物常用方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射技術(shù)感受態(tài)細(xì)胞法受體細(xì)胞體細(xì)胞或受精卵受精卵原核細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的TDNA上農(nóng)桿菌導(dǎo)入植物細(xì)胞整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上表達(dá)將含有目的基因的表達(dá)載體提純?nèi)÷咽芫扬@微注射受精卵發(fā)育獲得具有新性狀的動(dòng)物Ca2處理細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞重組表達(dá)載體DNA分子與感受態(tài)細(xì)胞混合感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子4目的基因的檢測與鑒定2基因工程的應(yīng)用1植物基因工程：培育抗蟲轉(zhuǎn)基因植物、抗病轉(zhuǎn)基因植物和抗逆轉(zhuǎn)基因植物；利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì)。2動(dòng)物基因工程：用于提高動(dòng)物生長

10、速度從而提高產(chǎn)品產(chǎn)量；用于改善畜產(chǎn)品品質(zhì)；用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物；用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物作器官移植的供體等。3比較基因治療與基因診斷原理操作過程進(jìn)展基因治療基因表達(dá)利用正?；?qū)胗谢蛉毕莸募?xì)胞中，以表達(dá)出正常性狀來治療疾病臨床實(shí)驗(yàn)基因診斷堿基互補(bǔ)配對(duì)制作特定DNA探針與病人樣品DNA混合，分析雜交帶情況臨床應(yīng)用3蛋白質(zhì)工程1流程圖A轉(zhuǎn)錄，B翻譯，C分子設(shè)計(jì)，D多肽鏈，E預(yù)期功能。2結(jié)果：改造了現(xiàn)有蛋白質(zhì)或制造出新的蛋白質(zhì)。3應(yīng)用：主要集中應(yīng)用于對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，改良生物性狀。1有關(guān)基因工程原理與操作的判斷1設(shè)計(jì)擴(kuò)增目的基因的引物時(shí)不必考慮表達(dá)載體的序列2用RNA反轉(zhuǎn)錄cDNA與載體連接導(dǎo)入受體菌群

11、體某種生物體內(nèi)全部DNA限制酶許多DNA片段分別與載體連接導(dǎo)入受體菌群體文庫大小小大基因中啟動(dòng)子無有基因中內(nèi)含子無有基因多少某種生物的部分基因某種生物的全部基因物種間的基因交流可以部分基因可以說明基因文庫的組建過程就包含基因工程的基本操作步驟。從基因文庫中獲取目的基因的優(yōu)點(diǎn)是操作簡便，缺點(diǎn)是工作量大，具有一定的盲目性技術(shù)擴(kuò)增目的基因1ol/LNaCl溶液LNaCl溶液溶解規(guī)律DNA溶解析出蛋白質(zhì)部分發(fā)生鹽析沉淀溶解NaCl溶液濃度從2mol/L降低過程中，溶解度逐漸增大的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中的“2、4、4”加蒸餾水2次加到雞血細(xì)胞液中，使血細(xì)胞吸水漲破；加到含DNA的2mol/L的NaCl溶液中

12、，使NaCl溶液的物質(zhì)的量濃度稀釋到L，使DNA析出用紗布過濾4次過濾血細(xì)胞破裂液，得到含細(xì)胞核物質(zhì)的濾液；過濾用2mol/L的NaCl溶液充分溶解的DNA，濾去溶液中的雜質(zhì)；濾取L的NaCl溶液中析出的DNA黏稠物；過濾溶有DNA的2mol/L的NaCl溶液用NaCl溶液4次加2mol/L的NaCl溶液，溶解提取的細(xì)胞核物質(zhì)；用L的NaCl溶液使DNA析出；用2mol/L的NaCl溶液，溶解濾取的DNA黏稠物；用2mol/L的NaCl溶液，溶解絲狀物用于鑒定DNA問題探究下圖為“DNA粗提取和鑒定”實(shí)驗(yàn)的相關(guān)操作，請仔細(xì)觀察并分析：1操作和都是加入蒸餾水，其目的一樣嗎提示不一樣。是使雞血細(xì)胞

13、吸水漲破釋放出核物質(zhì)；是稀釋NaCl溶液使其濃度接近L1，去除溶于低濃度NaCl溶液的雜質(zhì)。2操作中加入酒精的目的是什么此時(shí)攪拌要注意什么提示中加入酒精的目的是析出DNA，去除其中溶于酒精的雜質(zhì)，這時(shí)候攪拌要沿一個(gè)方向，輕緩地進(jìn)行。3操作中的黏稠物是如何獲取的加入2mol/LNaCl的目的是什么提示黏稠物是經(jīng)過單層紗布過濾獲得的；加入2mol/LNaCl的目的是使DNA再次溶解。命題點(diǎn)DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)應(yīng)用1下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)的敘述，正確的是選項(xiàng)試劑操作作用A檸檬酸鈉溶液與雞血混合防止血液凝固B蒸餾水與雞血細(xì)胞液混合保持細(xì)胞形狀C蒸餾水加入到溶解有DNA的NaCl溶液中析出蛋

14、白質(zhì)D冷卻的酒精加入到過濾后含DNA的NaCl溶液中產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)答案A解析蒸餾水與雞血細(xì)胞液混合的目的是使紅細(xì)胞吸水漲破，釋放出核物質(zhì)，B項(xiàng)錯(cuò)誤；將蒸餾水加入到溶解有DNA的NaCl溶液中，其目的是降低DNA的溶解度，初步析出DNA，C項(xiàng)錯(cuò)誤；加入冷卻酒精的目的是進(jìn)一步析出DNA，D項(xiàng)錯(cuò)誤。2實(shí)驗(yàn)中對(duì)DNA進(jìn)行鑒定時(shí)，做如下操作：試管序號(hào)AB1加2mol/L的NaCl溶液5mL加2mol/L的NaCl溶液5mL2不加加入提取的DNA絲狀物并攪拌3加4mL二苯胺，混勻加4mL二苯胺，混勻4沸水浴5min沸水浴5min實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象實(shí)驗(yàn)結(jié)論1根據(jù)上圖，完成表格空白處的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。2對(duì)于B試管，完成1

15、、2、3的操作后溶液顏色如何變化_。3在沸水浴中加熱的目的是_，同時(shí)說明DNA對(duì)高溫有較強(qiáng)的_。4A試管在實(shí)驗(yàn)中的作用是_。5B試管中溶液顏色的變化程度主要與_有關(guān)。答案1溶液不變藍(lán)色溶液逐漸變藍(lán)色DNA在沸水浴的情況下遇二苯胺會(huì)被染成藍(lán)色2溶液顏色基本不變3加快顏色反應(yīng)速度耐受性4對(duì)照5加入試管中的DNA絲狀物的多少解析B試管中含DNA絲狀物，A試管中不含，其他條件均完全相同，A、B兩試管形成對(duì)照。本實(shí)驗(yàn)強(qiáng)調(diào)反應(yīng)條件是沸水浴加熱5min，這樣可加快顏色反應(yīng)的速度，觀察對(duì)比兩試管的顏色時(shí)要等到冷卻以后。矯正易錯(cuò)強(qiáng)記長句1限制酶是一類酶，而不是一種酶。2將一個(gè)基因從DNA分子上切割下來，需要切兩

16、處，同時(shí)產(chǎn)生四個(gè)黏性末端或平末端。3不同DNA分子用同一種限制酶切割，產(chǎn)生的末端都相同，同一個(gè)DNA分子用不同的限制酶切割，產(chǎn)生的末端一般不相同。4限制酶切割位點(diǎn)應(yīng)位于標(biāo)記基因之外，不能破壞標(biāo)記基因，以便進(jìn)行檢測。5目的基因的插入位點(diǎn)不是隨意的：基因表達(dá)需要啟動(dòng)子與終止子的調(diào)控，所以目的基因的插入位點(diǎn)應(yīng)在啟動(dòng)子與終止子之間。6受體細(xì)胞選擇時(shí)需注意：要合成糖蛋白、有生物活性的胰島素必須用真核生物酵母菌需內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體的加工、分泌；一般不用支原體，因?yàn)樗鼱I寄生生活；一定不能用哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞，因?yàn)樗鼰o細(xì)胞核，不能合成蛋白質(zhì)。1限制酶具有特異性，即一種限制酶只能識(shí)別特定的核苷酸序列，并在特定的

17、位點(diǎn)上切割DNA分子。DNA連接酶的作用部位是磷酸二酯鍵。2質(zhì)粒是常用的載體，它是一種小型的雙鏈環(huán)狀DNA分子，具有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)及標(biāo)記基因。3基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)。4培育轉(zhuǎn)基因動(dòng)物時(shí)，受體細(xì)胞必須是受精卵；培育轉(zhuǎn)基因植物時(shí)，受體細(xì)胞可以是受精卵，也可以是體細(xì)胞。5目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞常用顯微注射技術(shù)，導(dǎo)入微生物細(xì)胞常用感受態(tài)細(xì)胞法。6目的基因到了另一種生物體內(nèi)能夠成功表達(dá)的原理是所有生物共用一套遺傳密碼。重溫高考演練模擬12022全國，38某種熒光蛋白GFRNA”“總RNA”或“核DNA”作為RNA，常選用嫩葉而

18、不選用老葉作為實(shí)驗(yàn)材料，原因是_。提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是_。2以mRNA為材料可以獲得cDNA，其原理是_。3若要使目的基因在受體細(xì)胞中表達(dá)，需要通過質(zhì)粒載體而不能直接將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞，原因是_答出兩點(diǎn)即可。4當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是_。5若獲得的轉(zhuǎn)基因植株幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是_。答案1嫩葉中基因表達(dá)強(qiáng)烈，相應(yīng)的mRNA多或嫩葉組織細(xì)胞易破碎防止提取的mRNA被RNA酶降解2在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以mRNA為模板按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則合成cDNA3質(zhì)粒載

19、體中有啟動(dòng)子、終止子，便于目的基因的表達(dá)；質(zhì)粒中有標(biāo)記基因便于篩選；質(zhì)粒中含有復(fù)制原點(diǎn)等4磷酸二酯鍵5幾丁質(zhì)酶基因沒有轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄的mRNA沒有翻譯解析1由于嫩葉組織細(xì)胞比老葉組織細(xì)胞易破碎，所以適于作為提取幾丁質(zhì)酶的mRNA的實(shí)驗(yàn)材料。由于植物組織中存在的RNA酶能將RNA分解，所以實(shí)驗(yàn)過程中要添加RNA酶抑制劑以降低RNA酶的活性，保護(hù)提取的RNA不被分解。2以mRNA為材料獲得cDNA的過程為逆轉(zhuǎn)錄，即以mRNA為模板、以4種脫氧核糖核苷酸為原料，在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下，遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，合成cDNA的過程。3由于目的基因無復(fù)制原點(diǎn)，也無基因表達(dá)所需的啟動(dòng)子和終止子，所以需與質(zhì)粒構(gòu)建重組質(zhì)

20、粒后再導(dǎo)入受體細(xì)胞。4DNA連接酶可以催化兩個(gè)DNA片段的黏性末端或平末端連接形成磷酸二酯鍵。5幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中，但是植株抗真菌病的能力沒有提高，從中心法則角度分析，可能是轉(zhuǎn)基因植株細(xì)胞中幾丁質(zhì)酶基因沒有轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄的mRNA沒有翻譯導(dǎo)致的。一、選擇題12022聊城高三三模應(yīng)用基因工程技術(shù)將抗蟲基因A和抗除草劑基因B成功導(dǎo)入植株W2n40的染色體組中。植株W自交，子代中既不抗蟲也不抗除草劑的植株所占比例為1/16。取植株W某部位的一個(gè)細(xì)胞放在適宜條件下培養(yǎng)，產(chǎn)生4個(gè)子細(xì)胞。用熒光分子檢測基因A和基因B基因A、基因B均能被熒光標(biāo)記。下列敘述正確的是A植株W獲得抗蟲和抗除草劑變異

21、性狀，其原理是染色體變異B若4個(gè)子細(xì)胞都只含有一個(gè)熒光點(diǎn)，則子細(xì)胞中的染色體數(shù)是40C若有的子細(xì)胞不含熒光點(diǎn)，則細(xì)胞分裂過程中發(fā)生過基因重組D若4個(gè)子細(xì)胞都含有兩個(gè)熒光點(diǎn)，則細(xì)胞分裂過程中出現(xiàn)過20個(gè)四分體答案C解析題中應(yīng)用基因工程技術(shù)將兩種目的基因?qū)胫参锛?xì)胞，其原理是基因重組，A錯(cuò)誤；若4個(gè)子細(xì)胞都只含有一個(gè)熒光點(diǎn)，說明子細(xì)胞只含有基因A或基因B中的一個(gè)，進(jìn)而說明其進(jìn)行的是減數(shù)分裂，則子細(xì)胞中的染色體數(shù)目是20條，B錯(cuò)誤；若有的子細(xì)胞不含熒光點(diǎn)，說明細(xì)胞進(jìn)行的是減數(shù)分裂，減數(shù)分裂過程中會(huì)發(fā)生基因重組，C正確；若4個(gè)子細(xì)胞都含有兩個(gè)熒光點(diǎn)，說明細(xì)胞進(jìn)行的是有絲分裂，而有絲分裂過程中不會(huì)出現(xiàn)四

22、分體，D錯(cuò)誤。22022江西南昌二中高三上學(xué)期月考目前，歐洲、亞洲許多國家都發(fā)現(xiàn)了禽流感疫情，并引起了人體感染，造成多人死亡?？茖W(xué)工作者經(jīng)研究，發(fā)現(xiàn)了數(shù)種快速檢驗(yàn)禽流感病原體的方法，以正確診斷禽流感。下列與禽流感病原體研究、診斷有關(guān)的說法中錯(cuò)誤的是A鏡檢法：在光學(xué)顯微鏡下直接觀察病人的痰液或血液，以發(fā)現(xiàn)病原體Ba、EcoR、AaC抗卡那霉素基因的存在有利于將含有抗原基因的細(xì)胞篩選出來D除圖示組成外，表達(dá)載體中還應(yīng)該含有啟動(dòng)子和終止子等結(jié)構(gòu)答案B解析圖示過程為基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，是基因工程中的核心步驟，A正確；構(gòu)建過程中需要將目的基因完整切割下來，此時(shí)要用到限制酶RNA不能翻譯產(chǎn)生多酚氧化酶

23、D目的基因的表達(dá)序列與多酚氧化酶基因的表達(dá)序列互補(bǔ)，且要同時(shí)在同一細(xì)胞內(nèi)表達(dá)答案B解析圖示中的過程分別為轉(zhuǎn)錄、翻譯，多酚氧化酶基因的表達(dá)指多酚氧化酶基因控制多酚氧化酶合成的過程，需要經(jīng)過轉(zhuǎn)錄、翻譯兩個(gè)過程，A項(xiàng)正確；將目的基因成功導(dǎo)入蘋果細(xì)胞中需要構(gòu)建基因表達(dá)載體，該過程需要限制酶、DNA連接酶，不需要RNA聚合酶，B項(xiàng)錯(cuò)誤；據(jù)圖可知，目的基因轉(zhuǎn)錄形成的mRNA可以和多酚氧化酶基因轉(zhuǎn)錄形成的mRNA互補(bǔ)配對(duì)，形成RNA雙鏈，使mRNA不能與核糖體結(jié)合，從而阻止了翻譯過程，C項(xiàng)正確；要使目的基因轉(zhuǎn)錄形成的mRNA和多酚氧化酶基因轉(zhuǎn)錄形成的mRNA互補(bǔ)配對(duì)，應(yīng)使目的基因的表達(dá)序列與多酚氧化酶基因的

24、表達(dá)序列互補(bǔ)，且要同時(shí)在同一細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，D項(xiàng)正確。二、非選擇題6大腸桿菌的質(zhì)粒上含有l(wèi)acZ基因，其編碼的產(chǎn)物半乳糖苷酶在Xgal和Ia兩種限制酶，而切割質(zhì)粒時(shí)用到的限制酶是a酶切割，原因是_。圖中過程為防止質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化，應(yīng)選用_酶對(duì)外源DNA、質(zhì)粒進(jìn)行切割。3為確定轉(zhuǎn)基因煙草是否培育成功，可用放射性同位素標(biāo)記的_作為探針進(jìn)行分子雜交檢測，還需要在個(gè)體水平上鑒定，后者具體過程是_。答案1a會(huì)破壞質(zhì)粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因BamH和Hind3抗鹽基因或目的基因?qū)⑴嘤臒煵萦酌缭耘嘤诤幸欢}的土壤中，觀察煙草植株的生長狀態(tài)解析1在該過程中，研究人員首先獲取了抗鹽基因目的基因，并采用a酶的切割位點(diǎn)位于目的基因和M抗生素抗性基因上。分析抗鹽基因的DNA片段，可知該DNA含四種限制酶切點(diǎn)