HER2免疫組化檢測的質(zhì)量控制培訓

1、HER2免疫組化檢測的質(zhì)量控制蘇州大學附屬第一醫(yī)院郭凌川1內(nèi)容提要要HER2檢測的質(zhì)質(zhì)量控制制和質(zhì)量量保證HER2檢測質(zhì)量量的影響響因素檢測前檢測中檢測后HER2檢測的質(zhì)質(zhì)量保證證內(nèi)部質(zhì)保保外部質(zhì)保保Ring研究HER2檢測的質(zhì)質(zhì)量控制制和質(zhì)量量保證3質(zhì)量體系系定義義質(zhì)量控制制（QC）用以確保保HER2檢測結(jié)果果正確性性的內(nèi)部部驗證步步驟質(zhì)量保證證（QA）通過與其其他實驗驗室檢測測結(jié)果相相比較而而得到的的檢測技技術(shù)評價價的方式式（例如，外部控控制）BilousM,etal.Mod Path2003;16:173182.質(zhì)量控制制與質(zhì)量量保證有有何區(qū)別別？質(zhì)控達到和/或維持目目標質(zhì)量量在檢測中中

2、每個步步驟均進進行樣品品檢查，從而決決定是否否進行相相關(guān)改進進操作步驟驟的內(nèi)部部驗證每批實驗驗都應進進行確保每個個檢測結(jié)結(jié)果均準準確質(zhì)保旨在改善善總體檢檢測操作作與其他檢檢測中心心相比較較質(zhì)控/質(zhì)保原則則（推薦薦）內(nèi)部質(zhì)量控制a) 染色 嚴格遵守免疫組化或原位雜交操作步驟 設立對照組:細胞系和組織標本免疫組化評分0/1+, 2+, 3+ 需經(jīng)原位雜交確定 若對照組檢測未能達標，需重新進行實驗b) 評分 評價:若正常組織檢測為陰性而腫瘤組織檢測細胞膜膜染色陽性，則免疫組化檢測即以足夠乳腺癌：僅浸潤性腫瘤不均勻: 選擇代表性區(qū)域異質(zhì)性特異區(qū)域: 按最高分評分c) 實驗室 設立適當對照組d) 檢測步

3、驟 難以確定的檢測病例1) 重新檢測2) 將免疫組化檢測結(jié)果與原位雜交檢測結(jié)果對比3) 咨詢外部實驗室e) 記錄 使用標準化檢測報告表 記錄任何:與標準化標本處理步驟相違背的不當操作難以確定病理診斷的病例持續(xù)質(zhì)量評價對相關(guān)從業(yè)人員進行教育培訓每年重新檢測約5%的陽性和陰性病例 參與Ring研究Adapted by permissionfromMacmillanPublishersLtd; BilousMetal.Mod Pathol2003;16:173182.2003.質(zhì)控/質(zhì)保原則則（推薦薦）內(nèi)部質(zhì)量控制a) 染色 嚴格遵守免疫組化或原位雜交操作步驟 設立對照組:細胞系和組織標本免疫組化評

4、分0/1+, 2+, 3+ ，2+需經(jīng)原位雜交確定 若對照組檢測未能達標，需重新進行實驗b) 評分 評價:若正常組織檢測為陰性而腫瘤組織檢測細胞膜膜染色陽性，則免疫組化檢測即以足夠胃癌或胃食管交界癌：選擇代表性區(qū)域不均勻: 選擇代表性區(qū)域異質(zhì)性特異區(qū)域: 按最高分評分c) 實驗室 設立適當對照組d) 檢測步驟 難以確定的檢測病例1) 重新檢測2) 將免疫組化檢測結(jié)果與原位雜交檢測結(jié)果對比3) 咨詢外部實驗室e) 記錄 使用標準化檢測報告表 記錄任何:與標準化標本處理步驟相違背的不當操作難以確定病理診斷的病例持續(xù)質(zhì)量評價對相關(guān)從業(yè)人員進行教育培訓每年重新檢測約5%的陽性和陰性病例 參與Ring研

5、究Adapted by permissionfromMacmillanPublishersLtd; BilousMetal.Mod Pathol2003;16:173182.2003.HER2檢測質(zhì)量量的影響響因素8影響IHC檢測結(jié)果果之常見見問題諸多因素會影響IHC結(jié)果的評評估標本固定定較差1染色不均均細胞質(zhì)染染色,IHC02彌散性非非均一性性細胞質(zhì)質(zhì)染色標本點狀狀假陽性性染色2棕色點狀狀染色為為胞質(zhì)染染色而非非胞膜染染色標本邊緣緣假陽性性染色1腫瘤標本本邊緣染染色而中中心無染染色W Hanna供圖;Dako供圖.影響FISH檢測結(jié)果果之常見見問題標本制備備染色步驟驟固定不完完全1片狀染色色

6、;信號較弱弱或缺失失過分固定定1持續(xù)性自自發(fā)性熒熒光;信號較弱弱或缺失失消化封閉閉不完全全2較強自發(fā)發(fā)性熒光光；背景景亦呈現(xiàn)現(xiàn)較強非非特異性性染色Abbott供圖;2.Ventana供圖.取樣組織處理理固定方式式檢測儀器器精準度度實驗室步步驟固定時間間檢測方法驗證檢測人員員抗原修復復類型實驗試劑劑對照實驗條件件使用圖像像分析判讀標準報告內(nèi)容容評分系統(tǒng)統(tǒng)HER2檢測偏倚倚檢測后檢測前檢測中影響HER2檢測結(jié)果果之因素素WolffAC,etal.J ClinOncol2007;25:118145.HER2檢測的影影響因素素：檢測測前12影響HER2檢測結(jié)果果之因素素:檢測前取樣組織處理理固定方式式

7、固定時間間Pre-analyticHER2檢測偏倚倚WolffAC,etal.JClin Oncol2007;25:118145.檢測前取樣原發(fā)性乳乳腺癌最好為手手術(shù)切除除而非活活檢標本本，包含含癌旁乳乳腺組織織避免細針穿刺活檢檢取樣轉(zhuǎn)移性乳乳腺癌穿刺活檢檢取樣胃癌經(jīng)內(nèi)鏡活活檢取樣樣或經(jīng)手手術(shù)切除除之標本本影響HER2檢測結(jié)果果之因素素:檢測前取樣HER2檢測偏倚倚WolffAC,etal.JClin Oncol2007;25:118145.檢測前HER2檢測偏倚倚影響HER2檢測結(jié)果果之因素素:檢測前組織處理理方式提供新鮮鮮及已定定位之標本或或切除后后迅速經(jīng)經(jīng)甲醛固固定之標標本立即轉(zhuǎn)送送至備

8、檢檢實驗室室:盡量縮短短從標本本切除至至浸入10%NBF固定之間間的時間間，通常?？刂圃谠?030分鐘以內(nèi)內(nèi)乳腺癌： 最多多1小時胃癌：2030分鐘之內(nèi)內(nèi)從手術(shù)切切除到實實驗室接接收之間間的組織織處理不不當會造造成不理理想和不一致致的HER2檢測結(jié)果果最壞的情情況下，檢測有有可能失失敗組織處理理HER2檢測偏倚倚檢測前HER2檢測偏倚倚影響HER2檢測結(jié)果果之因素素:檢測前固定時間間乳腺癌最少6小時不超過48小時胃癌穿刺活檢檢最少1小時（以以便充分分固定）比較大的的樣本需需要至少少8小時不超過48小時固定時間間HER2檢測偏倚倚檢測前HER2檢測偏倚倚乳腺癌HER2檢測指南南（2009版）編寫

9、組乳乳腺癌癌HER2檢測指南南（2009版）中華華病理學學雜2009;38(12):836840.胃癌HER2檢測指南南編寫組胃胃癌癌HER2檢測指南南 中華華病理學學雜志2011;40(8):553-557.影響HER2檢測結(jié)果果之因素素:檢測前固定方式式首選10%中性緩沖沖福爾馬馬林（NBF）10%NBF相當于4%甲醛溶液液固定方式式HER2檢測偏倚倚檢測前HER2檢測偏倚倚WolffAC,etal.JClin Oncol2007;25:118145.HER2檢測的影影響因素素：檢測測中18影響HER2檢測結(jié)果果之因素素：檢測中中檢測儀器器精準度度實驗室檢檢測步驟驟檢測人員員抗原修復復類型

10、實驗試劑劑對照實驗條件件HER2檢測偏倚檢測中WolffAC,etal.JClin Oncol2007;25:118145.檢測方法法驗證影響HER2檢測結(jié)果果之因素素：檢測中中驗證檢測測方法用于檢測之實實驗步驟驟應經(jīng)已已知實驗驗結(jié)果驗驗證標準化實實驗條件件需經(jīng)標標準化試試驗方法法驗證后后才可常常規(guī)應用用HER2檢測偏倚檢測中檢測方法法驗證WolffAC,etal.JClin Oncol2007;25:118145.影響HER2檢測結(jié)果果之因素素：檢測中中檢測儀器器之精準準度應有常規(guī)規(guī)校準及及維護檢檢測儀器器的相關(guān)關(guān)操作流流程移液器孵育箱水浴鍋溫度計檢測儀器器精準性性WolffAC,etal.

11、JClin Oncol2007;25:118145.HER2檢測偏倚檢測中儀器準確確度指該該實驗儀儀器能正正確顯示示操作者者的設定定方式正正確運作作儀器精確確度指該該實驗儀儀器每次次操作都都能顯示示相同的的檢測結(jié)結(jié)果可重復性性影響HER2檢測結(jié)果果之因素素：檢測中中實驗室步步驟須經(jīng)驗證證之免疫疫組化實實驗步驟驟實驗室步步驟HER2檢測偏倚檢測中WolffAC,etal.JClin Oncol2007;25:118145.影響HER2檢測結(jié)果果之因素素：檢測中中檢測人員員相關(guān)檢測測人員應應接受正正規(guī)檢測測技術(shù)培培訓（包包括資格考試試）并給予予相應支支持定期考評評：例如如年度考評檢測人員員Wolf

12、fAC,etal.JClin Oncol2007;25:118145;乳腺癌HER2檢測指南南（2009版）編寫組乳乳腺癌癌HER2檢測指南南（2009版）中華華病理學學雜志2009,38(12):836-840HER2檢測偏倚檢測中影響HER2檢測結(jié)果果之因素素：檢測中中抗原修復復類型所采用之之抗原修修復系統(tǒng)統(tǒng)與現(xiàn)有有實驗條條件相適適應，并并能產(chǎn)生生可重復復性結(jié)果果抗原修復復類型WolffAC,etal.JClin Oncol2007;25:118145.HER2檢測偏倚檢測中相同F(xiàn)ISH陰性乳腺癌組組織標本本應用相同同濃度抗抗HER2抗體檢測測結(jié)果合理抗原修復過度抗原修復假陽性抗原修復復對

13、免疫疫組化檢檢測結(jié)果果很重要要圖片由A Morey,StVincentsHospital, NSW,Australia提供.影響HER2檢測結(jié)果果之因素素：檢測中中檢測試劑劑所有試劑劑應確保保其質(zhì)量量穩(wěn)定，經(jīng)對照照組實驗驗驗證后后可使用用所有驗證證應當記記錄，簽簽名和登登記日期期檢測試劑劑WolffAC,etal.JClin Oncol2007;25:118145.HER2檢測偏倚檢測中影響HER2檢測結(jié)果果之因素素：檢測中中對照對照組與與實驗組組實驗過過程應一一致應使用已已知實驗驗結(jié)果的的組織作作為對照照可用已經(jīng)經(jīng)驗證的的對照檢檢測新抗抗體活性性用于對照的組組織標本本可自行行制備或或購買而而

14、得對照HER2檢測偏倚檢測中陽性及陰陰性對照照組織標本本陽性對對照組理想之陽陽性對照照組, HER2陽性(IHC3+)1W Hanna供圖;2.L Bornstein供圖.MDAMB175,HER2陰性(IHC1+)2對照細胞胞系之準準備SK-BR-3,HER2陽性(IHC3+)1內(nèi)部對照照設置患者標本本中腫瘤瘤未累及及部分可可作為內(nèi)內(nèi)部陰性性對照組組；若陰陰性對照照結(jié)果亦亦出現(xiàn)染染色，則則原腫瘤瘤標本之之染色結(jié)結(jié)果無效效對照監(jiān)控控如若對照照組未顯顯示預期期結(jié)果，則實驗驗應重做做例如，正正常乳腺上皮膜染染色重復免疫疫組化檢測W Hanna供圖.影響HER2檢測結(jié)果果之因素素：檢測中中檢測實驗驗

15、條件檢測應于適當條件下進行溫度及濕濕度的變變化會影影響染色色結(jié)果檢測條件件需確保保得到可可靠且可可重復的的HER2檢測結(jié)果果檢測條件件WolffAC,etal.JClin Oncol2007;25:118145.HER2檢測偏倚檢測中如何達到到高質(zhì)量量免疫組組化檢測測勿讓低年年資實驗驗室技術(shù)術(shù)人員配配置試劑劑若試劑未未能正確確配制，免疫組組化結(jié)果果將不可可靠低年資技技術(shù)人員員應接收收試劑配制訓練及上上級指導導監(jiān)督正確的抗抗體稀釋釋可避免免疫組化化的誤差差記錄每次次抗體稀稀釋的濃濃度，每每次登記記相應日日期及時時間如遇錯誤誤檢測結(jié)結(jié)果，上上述記錄錄數(shù)據(jù)可可用來追追溯錯誤誤原因完善改進進抗原修修復

16、方法法較耗時但但必須進進行設計驗證證步驟目的確定經(jīng)證證實或驗驗證之相相關(guān)實驗驗步驟是是否可于于本實驗驗室可行行確定檢測測參數(shù)固定檢測方法法及條件件試劑及濃濃度操作設定定(若自動化化操作)操作人員員技術(shù)能能力樣本(檢測組)選擇25100個樣本用用不同經(jīng)經(jīng)證實的的檢測方方式進行行檢測，可使用用組織芯芯片請注意:乳腺癌與與胃癌標標本進行行檢測驗驗證應分分開進行行設計驗證證步驟記錄實驗驗驗證的的每一操操作步驟驟這些記錄錄可用于于建立實實驗室標標準化操操作參考考指南記錄所有有操作步步驟若任何一一個步驟驟發(fā)生變變化，整整個實驗驗必須重重做目標：陽陽性及陰陰性實驗驗驗證組組與原實實驗結(jié)果果達95%的一致性性

17、使用自動動化平臺有助助HER2檢測標準準化方法抗體單位HER2 檢測準確性自我評估專家評估自動4B5694.7%95.2%自動A0485390.0%92.0%自動CB11481.0%83.5%手動A0485678.4%85.7%手動CB11981.6%82.0%手動SP3278.0%88.0%如果使用用自動化化檢測，必須基基于現(xiàn)有有的經(jīng)驗證的的手動操作方案案PQCC委員會提提供數(shù)據(jù)據(jù)國家質(zhì)量量控制認認證項目目中自動動與手動動HER2檢測方法法對比HER2檢測的影影響因素素：檢測測后35影響HER2檢測結(jié)果果之因素素：檢測后后圖像分析析方法判讀標準報告內(nèi)容容評分系統(tǒng)統(tǒng)HER2檢測偏倚倚檢測后Wo

18、lffAC,etal.JClin Oncol2007;25:118145.影響HER2檢測結(jié)果果之因素素：檢測后后檢測結(jié)果果判讀標準及評評分系統(tǒng)統(tǒng)需依國內(nèi)內(nèi)/國際HER2檢測指南南進行標標準化操操作HER2檢測偏倚檢測后HER2檢測偏倚判讀標準評分系統(tǒng)統(tǒng)圖像分析析方法IHC檢測結(jié)果果判讀及及評分多數(shù)操作作指南推推薦下列列分析免免疫組化化檢測結(jié)結(jié)果的標標準：依細胞染染色百分分比及強強度進行行評分:乳腺癌:全膜染色色評估染色色侵入部部分，但但不包括括原位部部分尋找完整整深染色色及均勻勻的全膜膜區(qū)域胃癌：基基底側(cè)膜膜、側(cè)膜膜或完全全性膜染染色分析檢測測結(jié)果時時，細胞胞質(zhì)染色色應排除除在外。若細胞胞質(zhì)

19、染色色干擾細細胞膜染染色結(jié)果果判斷時時，應重重新檢測測。正常上皮皮細胞不不應有染染色出現(xiàn)現(xiàn)。若出出現(xiàn)染色色，則應應重新檢檢測。留意待檢檢標本出出現(xiàn)收縮縮/破損,這些現(xiàn)象象會造成成檢測結(jié)結(jié)果的假假陽性若標本染染色不均均，應依依染色最最強部位位進行評評分根據(jù)對照照組實驗驗結(jié)果決決定實驗驗組檢測測結(jié)果是是否可信信乳腺癌或或胃癌檢檢測應使使用其特特異性評評分標準準ISH檢測結(jié)果果判讀及評分所有乳腺腺癌及胃胃癌IHC2+標本均需需再次進進行ISH檢測進行行確定分析ISH檢測結(jié)果果時之注注意事項項：乳腺癌：依H&E和/或免疫組組化染色色檢測結(jié)結(jié)果來確確定腫瘤瘤的侵及及程度;原位癌不不予評分分從浸潤性性腫瘤

20、的的兩個不不同區(qū)域數(shù)細胞胃癌：由由于HER2的表達異異質(zhì)性，必需篩選出整個擴增增區(qū)域包包括來自自于不同同腫瘤領領域的細細胞以提提供一個個更加統(tǒng)統(tǒng)一的分分析評分分標準Brightfield方法如SISH建議確認認HER2擴增重點點區(qū)域依對照組組檢測結(jié)結(jié)果決定定實驗組組檢測結(jié)結(jié)果是否否可信于兩個腫瘤瘤侵及區(qū)區(qū)域計數(shù)數(shù)至少20個不重疊疊的細胞胞若信號不不均勻(25%)，應重新新檢測若檢測結(jié)結(jié)果自發(fā)發(fā)熒光過過強或核核清晰度度較差時時則應重重新檢測測若背景干干擾信號號辨識時時，應重重新檢測測(10%細胞質(zhì)信信號)重復信號號作單一一計數(shù)影響HER2檢測結(jié)果果之因素素：檢測后后檢測報告告檢測報告告應包含含以

21、下信信息：標本部位位及類型型固定液種種類標本離體體至固定定時間標本固定定的時間間抗體檢測方法法圖像分析析方法對照設置置HER2檢測偏倚檢測后HER2檢測偏倚報告內(nèi)容容乳腺癌HER2檢測指南南（2009版）編寫組乳乳腺癌癌HER2檢測指南南（2009版）中華華病理學學雜2009;38(12):836840.HER2檢測的質(zhì)量保證證理想的質(zhì)量體系系包括內(nèi)部質(zhì)保保計劃外部質(zhì)保保計劃參與Ring研究內(nèi)部質(zhì)保保43內(nèi)部質(zhì)保保理想想計劃繼續(xù)進行行質(zhì)控及及檢測儀儀器維護護繼續(xù)進行行實驗室室人員技技術(shù)訓練練及能力力測評實驗步驟驟嚴格格遵守標標準化操操作方案案常規(guī)對照照組(陽性，陰陰性及內(nèi)內(nèi)部對照照組)；任何對

22、對照組若若出現(xiàn)非預期實驗驗結(jié)果，則應重重新檢測測將檢測陽陽性率及及陰性率率與已發(fā)發(fā)表數(shù)據(jù)據(jù)比較，從而監(jiān)控控檢測質(zhì)質(zhì)量對病理醫(yī)醫(yī)生進行行繼續(xù)教教育及能能力測評評(如進行同同行檢測測能力比比較)繼續(xù)進行行常規(guī)評評價及總總結(jié)，分析現(xiàn)存存問題，及時彌彌補不足足外部質(zhì)保保45外部質(zhì)保保內(nèi)容美國病理理學會（CAP）認證內(nèi)內(nèi)容要求求檢查時時記錄驗證檢測測之方法法檢測步驟驟之使用用檢測技術(shù)術(shù)人員之之培訓標本及試試劑之正正確標記記標本及試試劑之正正確貯存存檢測儀器器之校準準及質(zhì)控控內(nèi)部質(zhì)保保計劃及及實施依據(jù)檢測質(zhì)量量檢測技術(shù)術(shù)人員及及病理醫(yī)醫(yī)生檢測測能力之之測評檢測報告告之準確確性及質(zhì)質(zhì)量正確提交交檢測結(jié)結(jié)果W

23、olffAC,etal.J ClinOncol2007;25:118145.參與外部部質(zhì)保之之益處可證明本本實驗室室HER2檢測結(jié)果果是否準準確可驗證本本實驗室室檢測方方法檢測操作作較差之之實驗室室可得到到較多相相關(guān)建議議及幫助助本實驗室室檢測技技術(shù)及檢檢測結(jié)果果判讀的困難可得得到及時時糾正及及彌補美國病理理醫(yī)師學學會（CAP）認證（乳腺癌）CAP提供HER2檢測認證證熟練檢測測(按照ASCO*/CAPHER2檢測指南南和認證證列表)質(zhì)量管理理/QC結(jié)果報告告具有IHC或ISH進行HER2檢測條件件的CAP認證實驗驗室需要要注冊并并參與CAP認可的熟熟練性測測試實驗室表表現(xiàn)將被被監(jiān)測；實驗室必

24、必須達到到90%或以上的的測試評評分（如如果每次次測試都都能成功功提交的的話）發(fā)送HER2切片到其其他設備備進行組組織處理理和染色色、并將將結(jié)果拿拿回進行行判讀的的實驗室室，必須須參與熟熟練性測測試*ASCO,美國臨床床腫瘤醫(yī)醫(yī)師協(xié)會會英國國家家外部質(zhì)質(zhì)量保證證評價計計劃（乳腺癌癌）向全球?qū)崒嶒炇议_開放計劃針對對免疫組組化及原原位雜交交檢測參與該計計劃的實實驗室每每季度需需對該計計劃組織織所提供供的細胞胞系標本本進行免免疫組化化檢測，檢測結(jié)結(jié)果將交交回該計計劃組織織送回該計計劃組織織之檢測測結(jié)果將將由四位位專家進進行最終終評分，取平均均分作為為參與實實驗室最最后得分分最終評分分結(jié)果有有利于相關(guān)實驗驗室改進進現(xiàn)有實實驗操作作技術(shù)以以及