專題突破練習(xí)24

1、專題突破練習(xí)24一、選擇題在細(xì)菌培養(yǎng)過程中,有關(guān)操作正確的是(C)涂布器用火焰灼燒進(jìn)行滅菌培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進(jìn)行滅菌倒平板和取菌液都必須要在酒精燈火焰旁進(jìn)行分離得到的菌落應(yīng)先接種在平板上，直接置于4C冰箱保存解析:涂布器應(yīng)該用酒精燈引燃;培養(yǎng)基應(yīng)該先滅菌再倒平板;倒平板和取菌液都必須要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，以防止雜菌污染;分離得到的菌落接種后應(yīng)該置于37C的恒溫箱培養(yǎng)24h,再置于4C冰箱保存。下列有關(guān)平板劃線接種法的操作錯(cuò)誤的是(D)將接種環(huán)放在火焰上灼燒將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中只蘸取一次蘸取菌液和劃線要在火焰旁進(jìn)行劃線時(shí)要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)的劃線相連解析:劃線過程中,接種環(huán)需放在火

2、焰上灼燒滅菌;待接種環(huán)冷卻后伸入菌液中蘸取菌液一次;蘸取菌液和劃線都要防止空氣中雜菌污染,要在火焰旁進(jìn)行;劃線時(shí)不能將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)的劃線相連,否則無法分離得到單菌落?，F(xiàn)有一升水樣，梯度稀釋至10-3倍。各取0.1mL已稀釋10-3倍的水樣分別接種到三個(gè)培養(yǎng)基上培養(yǎng),記錄的菌落數(shù)分別為15、16、17個(gè),則每升原水樣中大腸桿菌數(shù)為個(gè)(D)160B.1.6X103C.1.6X107D.1.6X108解析:題中梯度稀釋的倍數(shù)是10-3，三個(gè)菌落的平均數(shù)=(15+16+17)/3=16,則每毫升樣品中菌株數(shù)=16/0.1X103=1.6X105個(gè),所以每升土壤浸出液中的菌株數(shù)=1.6X105

3、X103=1.6X108個(gè)。(2016浙江溫州期末)如圖是微生物平板劃線示意圖。劃線的順序?yàn)?、2、3、4、5。下列操作方法正確的是(D)操作前要將接種環(huán)放在火焰旁滅菌劃線操作須在火焰上進(jìn)行只有在5區(qū)域中才有可能得到所需菌落在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都要對接種環(huán)進(jìn)行滅菌解析:進(jìn)行平板劃線操作之前,將接種環(huán)在酒精燈火焰上進(jìn)行灼燒滅菌;平板劃線操作應(yīng)在火焰旁進(jìn)行,不能在火焰上進(jìn)行;由題圖可知,5區(qū)域是最后一個(gè)區(qū)域,有可能在5區(qū)域獲得所需要的菌落,在4區(qū)域也有可能得到所需要的菌落;在2、3、4、5區(qū)域中劃線前都要對接種環(huán)進(jìn)行灼燒滅菌,保證每次劃線的菌種來自上一區(qū)域的末端,1區(qū)域劃線前要對接種

4、環(huán)進(jìn)行灼燒滅菌目的是防止雜菌污染,5區(qū)域劃線后進(jìn)行灼燒滅菌是防止污染環(huán)境及操作者。下列關(guān)于分離以尿素為氮源的微生物的實(shí)驗(yàn)操作中,不正確的是(C)將土壤樣品用無菌水進(jìn)行一系列的梯度稀釋同一濃度的土壤稀釋液應(yīng)至少涂布三個(gè)平板對尿素固體培養(yǎng)基的滅菌應(yīng)采用121C(500g/cm2壓力)的高壓蒸汽滅菌法若要檢測培養(yǎng)基是否被污染,可將未接種的培養(yǎng)基在相同條件下進(jìn)行培養(yǎng)解析:將土壤樣品用無菌水進(jìn)行一系列的梯度稀釋,便于統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目;同一濃度的土壤稀釋液應(yīng)至少涂布三個(gè)平板,這樣求得的平均值更接近真實(shí)值;尿素遇高溫會分解,因此不能采用高壓蒸汽滅菌,應(yīng)采用G6玻璃漏斗進(jìn)行過濾;生物實(shí)驗(yàn)的原則之一是對照實(shí)

5、驗(yàn),將未接種的培養(yǎng)基在相同條件下培養(yǎng)作為對照,排除非測試因素對實(shí)驗(yàn)的影響,可使結(jié)論更有說服力。二、非選擇題(2016浙江效實(shí)中學(xué)期中)下圖為“大腸桿菌的培養(yǎng)和分離”實(shí)驗(yàn)的基本流程,請回答下列問題:A過程配制的是通用的細(xì)菌培養(yǎng)基，稱為培養(yǎng)基。配制時(shí)除了加入特定的營養(yǎng)物質(zhì)以外,還要加入一定量的氯化鈉,以維TOC o 1-5 h z持。對培養(yǎng)基酸堿度的調(diào)節(jié),應(yīng)該在B過程的(填“前面”或“后面”)。E過程所需的溫度是。D過程后，一個(gè)菌體便會形成一個(gè),這種分離方法是的通用方法,也是篩選特定菌株的最簡便方法之一。C過程培養(yǎng)的目的是。解析：(1)LB液體培養(yǎng)基是通用的細(xì)菌培養(yǎng)基,LB固體平面培養(yǎng)基則用于劃線

6、分離,氯化鈉充當(dāng)溶質(zhì)的作用是維持培養(yǎng)基的滲透壓,調(diào)整好酸堿度后才能進(jìn)行滅菌,若滅菌后再進(jìn)行調(diào)整酸堿度的話,又會產(chǎn)生新的污染。(2)在液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上加入一定量的瓊脂就成了固體培養(yǎng)基,培養(yǎng)好后的菌種置于4C冰箱中保存。(3)通過劃線分離后一個(gè)菌體就會繁殖出一個(gè)菌落。(4)為保證菌體的數(shù)量,劃線分離前一般用液體培養(yǎng)基進(jìn)行菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)。答案：(1)LB液體滲透壓前面(2)4C(3)(單)菌落消除污染雜菌(純化菌種)(4)菌種擴(kuò)大培養(yǎng)(2016浙江嘉興一模)為了從土壤中分離出以尿素為氮源的微生物,某小組做了相關(guān)實(shí)驗(yàn),其基本流程如下。請據(jù)圖回答下列問題：實(shí)驗(yàn)流程中，物質(zhì)甲是。為了體現(xiàn)尿素培養(yǎng)基的分離

7、效果,需設(shè)置對照組，對照組的培養(yǎng)基是培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基常用的滅菌方法是。下表中有四種培養(yǎng)基,為了分離出以尿素為氮源的微生物,應(yīng)采用的培養(yǎng)基是。培養(yǎng)基蛋白胨葡萄糖NaClKHPO24酚紅瓊脂糖瓊脂水尿素A一+一+B一+一+一C+一+一+D一+一+制備菌液時(shí)，步驟乙的操作是A.滅菌B.稀釋C.過濾D.擴(kuò)大培養(yǎng)為了統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中以尿素為氮源的微生物的數(shù)目，接種時(shí)宜采用法。將相同濃度的土壤稀釋液分別接種在實(shí)驗(yàn)組和對照組培養(yǎng)基上，在C的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2448h,觀察、比較菌落數(shù)，發(fā)現(xiàn)對照組培養(yǎng)基中菌落的數(shù)目比實(shí)驗(yàn)組。解析:(1)圖示為從土壤中分離出以尿素為氮源的微生物的過程。土壤需用無菌水(物質(zhì)甲)

8、進(jìn)行溶解。分離以尿素為氮源微生物時(shí)，需設(shè)置對照組，該組所采用的培養(yǎng)基為LB全營養(yǎng)固體培養(yǎng)基,使用之前采用高壓蒸汽滅菌。(2)分離以尿素為氮源的微生物，需在培養(yǎng)基中添加尿素，并以尿素為唯一氮源;尿素培養(yǎng)基除尿素作為氮源外，不能含有其他含氮化合物，蛋白胨和瓊脂中都含有含氮化合物。(3)獲取土壤懸液后進(jìn)行梯度稀釋,以便進(jìn)行涂布分離。(4)劃線分離和涂布分離均能分離微生物,但是若要統(tǒng)計(jì)微生物的數(shù)目,應(yīng)采用涂布分離法。通過涂布分離，將菌種接種到培養(yǎng)基表面，然后將培養(yǎng)基倒置于37C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2448h后進(jìn)行觀察，由于自然界中能夠分解尿素的微生物含量較少，因此，對比后會發(fā)現(xiàn)對照組(LB全營養(yǎng)培養(yǎng)基)上

9、菌落數(shù)遠(yuǎn)多于實(shí)驗(yàn)組(尿素培養(yǎng)基)。答案：(1)無菌水LB(全營養(yǎng))固體高壓蒸汽滅菌A(3)B(4)涂布分離37多大腸桿菌是生活在人和高等動物體內(nèi)的一種常見細(xì)菌，在飲用水的檢測中常用它作為水源是否受到污染的指示菌，在遺傳學(xué)上常作為實(shí)驗(yàn)材料，在基因工程中常用它作為受體細(xì)胞。請回答下列有關(guān)大腸桿菌的問題：在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮、和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、易培養(yǎng)、等優(yōu)點(diǎn)，因此常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和消毒；空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外

10、線能損傷DNA的結(jié)構(gòu)，還能。培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，。通常對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小、硬度和顏色等對細(xì)菌進(jìn)行初步的鑒定(或分類)。若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過_處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。解析:(1)培養(yǎng)微生物，不但需要適宜的營養(yǎng)物質(zhì)，還需要考慮微生物生長所需的溫度、pH和滲透壓等條件。大腸桿菌是體積小、結(jié)構(gòu)簡單的原核生物，具有繁殖周期短、易培養(yǎng)等特點(diǎn)，通常作為生物遺傳學(xué)研究的材料。(2)排除雜菌的污染是微生物培養(yǎng)的關(guān)鍵，不但需要對培養(yǎng)基和培養(yǎng)

11、皿進(jìn)行滅菌，還要對實(shí)驗(yàn)者的雙手用70%酒精擦拭消毒，而空氣中的微生物常采用紫外線殺菌(主要原理是紫外線損傷DNA,并使蛋白質(zhì)變性)。(3)對大腸桿菌等微生物培養(yǎng)時(shí)，檢測培養(yǎng)基是否滅菌徹底最簡便的方法是將滅菌后未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下培養(yǎng)一段時(shí)間，若出現(xiàn)菌落，說明培養(yǎng)基被污染，滅菌不徹底，反之說明培養(yǎng)基滅菌徹底。(4)不同菌種形成的菌落存在差異，可以通過菌落的形狀、大小、硬度和顏色等菌落特征對細(xì)菌進(jìn)行初步的鑒定。(5)微生物培養(yǎng)結(jié)束后，要防止培養(yǎng)對象對環(huán)境造成污染和擴(kuò)散，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過高壓蒸汽滅菌處理后才能丟棄。答案：(1)溫度酸堿度(pH)生活周期短(或繁殖快)滅菌使蛋白

12、質(zhì)變性觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生菌落特征(5)滅菌某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機(jī)化合物A。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基，成功篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌(目的菌)。實(shí)驗(yàn)的主要步驟如圖所示，請分析回答下列問題:污水池中污泥樣品候選菌重復(fù)多次宜至獲得目的菌振蕩培養(yǎng)若干天后，測定各瓶中化合物A的含暈污水池中污泥樣品候選菌重復(fù)多次宜至獲得目的菌振蕩培養(yǎng)若干天后，測定各瓶中化合物A的含暈2接種接種固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入化合物A的目的是固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入化合物A的目的是,這種培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基。“目的菌”生長所需的氮源和碳源是來自培養(yǎng)基中的。實(shí)驗(yàn)需要振蕩培養(yǎng)

13、，由此推測“目的菌”的代謝類型是。在上述實(shí)驗(yàn)操作過程中，獲得純凈“目的菌”的關(guān)鍵是轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)基時(shí)，常采用平板劃線的方法進(jìn)行接種，此過程中所用的接種工具是,操作時(shí)采用滅菌的方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行滅菌處理才能倒掉，這樣做的目的是。某同學(xué)計(jì)劃統(tǒng)計(jì)污水池中“目的菌”的總數(shù),他選用10-4、10-5、10-6稀釋液進(jìn)行平板劃線,每種稀釋液都設(shè)置了3個(gè)培養(yǎng)皿。從設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)的角度看,還應(yīng)設(shè)置的一組對照實(shí)驗(yàn)是,此對照實(shí)驗(yàn)的目的是解析:(1)在選擇培養(yǎng)基中加入特定物質(zhì),可以篩選出特定的細(xì)菌。(2)根據(jù)題目所給的培養(yǎng)基配方,“目的菌”生長所需的氮源和碳源只能來自培養(yǎng)基中的化合物A。異養(yǎng)需氧型細(xì)菌

14、在培養(yǎng)時(shí)需要振蕩。(3)獲得純凈特定“目的菌”的關(guān)鍵是防止外來雜菌入侵。(4)采用平板劃線法進(jìn)行接種,此過程中所用的接種工具是接種環(huán),操作時(shí)一般采用灼燒滅菌。(5)為防止造成環(huán)境污染,實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,使用過的培養(yǎng)基應(yīng)該進(jìn)行滅菌處理才能倒掉。(6)計(jì)數(shù)“目的菌”數(shù)量時(shí),注意設(shè)置一組不接種的空白培養(yǎng)基作為對照,此對照實(shí)驗(yàn)的目的是檢測培養(yǎng)基制備過程中是否被雜菌污染。答案:(1)篩選目的菌選擇化合物A異養(yǎng)需氧型防止外來雜菌入侵(4)接種環(huán)灼燒(5)防止造成環(huán)境污染不接種的空白培養(yǎng)基檢測培養(yǎng)基制備過程中是否被雜菌污染利用微生物分解淀粉生產(chǎn)糖漿具廣闊的應(yīng)用前景。某同學(xué)為了從長期種植馬鈴薯的土壤中分離出能夠高效

15、分解淀粉的細(xì)菌,進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)步驟:配制以為唯一碳源的固體培養(yǎng)基，為了使培養(yǎng)基凝固成固體,應(yīng)該向培養(yǎng)基中加入的物質(zhì)是。將土壤樣品接種到已滅菌的培養(yǎng)基上，在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時(shí)間,培養(yǎng)基上出現(xiàn)。將接種針滅菌后，從(2)中的培養(yǎng)基上挑取一定量細(xì)菌，接種入_(填“固體”“半固體”或“液體”)培養(yǎng)基，在恒溫?fù)u床上培養(yǎng)24h，使細(xì)菌大量繁殖。配制與中相同的培養(yǎng)基，并加入少量碘液，用法將上一步大量繁殖后的細(xì)菌接種到已滅菌的培養(yǎng)基上。培養(yǎng)一段時(shí)間后，觀察菌落周圍培養(yǎng)基的顏色變化和變化范圍的大小。周圍出現(xiàn)現(xiàn)象的菌落即為初選菌落，經(jīng)進(jìn)一步分離、純化后即可達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康?。解?(1)篩選分離出能夠高效分解淀

16、粉的細(xì)菌需要使用以淀粉為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，瓊脂常常作為凝固劑制作固體培養(yǎng)基。(2)將稀釋后的土壤樣品接種到已滅菌的培養(yǎng)基上，在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時(shí)間后，培養(yǎng)基上出現(xiàn)許多菌落。(3)淀粉分解菌屬于異養(yǎng)需氧型微生物，需要將其接種到液體培養(yǎng)基進(jìn)行搖床振蕩培養(yǎng)。(4)淀粉分解菌的鑒定需要將其用涂布分離法接種到已滅菌的培養(yǎng)基上。(5)淀粉遇到碘液會變藍(lán)色，在固體平板培養(yǎng)基上，淀粉分解菌能夠?qū)⒌矸鄯纸舛沟靡缘矸鄯纸饩錇橹行牡姆撬{(lán)色的透明圈，出現(xiàn)透明圈的就是淀粉分解菌，經(jīng)進(jìn)一步純化培養(yǎng)可達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹４鸢?(1)淀粉瓊脂(2)菌落(3)液體(4)涂布分離淺色范圍大或較大透明圈常見的釀酒酵母只能利

17、用葡萄糖而不能利用木糖來進(jìn)行酒精發(fā)酵,而自然界中某些酵母菌能分解木糖產(chǎn)生酒精,但是對酒精的耐受能力差。科學(xué)家利用基因工程培育了能利用這兩種糖進(jìn)行發(fā)酵且對酒精耐受能力強(qiáng)的釀酒酵母。請分析回答下列問題:制備酵母菌培養(yǎng)基要進(jìn)行倒平板操作,待平板冷凝后,要將平板倒置,其主要原因是取自然成熟的葡萄,用無菌水將葡萄皮上的微生物沖洗到無菌的三角瓶中,然后按圖甲所示過程進(jìn)行酵母菌的純化培養(yǎng)。圖乙圖丙圖乙是經(jīng)過圖甲過程A純化培養(yǎng)的結(jié)果，在培養(yǎng)基上接種時(shí)劃線的順序依次是。A.B.C.D.接種環(huán)通過灼燒滅菌，完成圖中劃線操作，共需灼燒接種環(huán)次。A.1次B.2次C.3次D.4次研究者在圖甲過程C的操作培養(yǎng)過程中，得到

18、了一個(gè)經(jīng)培養(yǎng)后菌落分布如圖丙所示的平板，推測接種時(shí)可能的操作失誤是。將培養(yǎng)基上的酵母菌菌株轉(zhuǎn)接到僅以為碳源的培養(yǎng)基中，無氧條件下培養(yǎng)一周后，有些酵母菌死亡，說明這些酵母菌不能利用木糖發(fā)酵。將目的基因連接到具有尿嘧啶合成酶基因作為標(biāo)記基因的質(zhì)粒上，TOC o 1-5 h z然后將所得的重組質(zhì)粒導(dǎo)入酵母菌時(shí)，應(yīng)選擇缺乏能力的釀酒酵母作為受體菌。將經(jīng)上述流程培育獲得的轉(zhuǎn)基因釀酒酵母接種在含的培養(yǎng)基中進(jìn)行酒精發(fā)酵能力測試。隨著發(fā)酵的持續(xù)進(jìn)行，若該釀酒酵母能夠存活，說明它能,即說明所需菌株培育成功。解析:(1)倒平板操作時(shí)，需對冷凝后的平板倒置，主要原因是防止皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染。(2)分析圖示可知，圖乙分離方式為劃線分離，劃線分離的基本原理是在劃線的過程中，隨著接種環(huán)上的菌液逐漸減少，劃線最后部分的細(xì)菌間距離加大。因此，接種越靠前的區(qū)域，菌落越密集，反之稀疏，故在培養(yǎng)基上接種時(shí)劃線的順序依次是;接種環(huán)每次劃線之前均需要灼燒,由圖示3個(gè)區(qū)域的菌落可知，接種環(huán)劃線3次，由于接種結(jié)束之后還要對接種環(huán)進(jìn)行灼燒，以殺死接種環(huán)上殘留的菌種，故總共灼燒4次。圖丙中,菌落密度適宜，說明菌液稀釋程度適宜，但是菌落未均勻分布在培養(yǎng)基上，推測可能是