羅氏試劑盒說明書 Estradiol II 12176190001V15

1、12176190001V15雌二醇（E2）試劑盒說明書 2009-05， V 15 中文 5/5 Elecsys和cobas e 分析儀03000079 122 100測試本試劑盒適用于以下分析儀Elecsys1010Elecsys2010MODULARANALYTICSE170cobas e 411cobas e 601主要用途用于體外定量檢測人血清和血漿中雌二醇含量。Elecsys和cobas e免疫分析儀的檢測原理是電化學(xué)發(fā)光免疫分析法（ECLIA）。概述1,2,3,4雌激素能促使女性的第二性征發(fā)育。它與促孕激素（孕酮）協(xié)同調(diào)控女性的生殖過程。具有生物學(xué)活性的雌激素是17-雌二醇，是一種

2、分子量約為272道爾頓的甾類激素。雌激素主要在卵巢（卵泡、黃體）中生成，睪丸和腎上腺皮質(zhì)也會生成少量的雌激素。妊娠期間，雌激素主要生成于胎盤。約98%的雌二醇是與轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（SHBG：性激素結(jié)合球蛋白）結(jié)合運(yùn)轉(zhuǎn)。在月經(jīng)周期中，雌激素的分泌分為兩個階段。檢測雌二醇主要用于臨床診療下丘腦-垂體-性腺軸功能紊亂性疾病、男性乳房增生癥、分泌雌激素的卵巢/睪丸腫瘤以及腎上腺皮質(zhì)增生癥。此外尚可應(yīng)用于不孕不育的治療和判定體外授精（IVF）的排卵時間。Elecsys雌二醇檢測法是采用特異性針對17-雌二醇的多克隆抗體的競爭法實(shí)驗(yàn)原理。甲二氫睪酮促使內(nèi)源性雌二醇從樣本中釋放與釕復(fù)合物a標(biāo)記的雌二醇衍生物競爭生物

3、素抗體的結(jié)合位點(diǎn)。三聯(lián)吡啶釕檢測原理競爭法，總檢測時間：18分鐘第一次孵育：樣本（35l）中添加生物素標(biāo)記的雌二醇特異性抗體，形成免疫復(fù)合物，其量依賴于樣本中分析物濃度。第二次孵育：加入包被鏈霉親和素的磁珠微粒和釕復(fù)合物標(biāo)記的雌二醇衍生物，原本未被占據(jù)的生物素抗體位點(diǎn)被占據(jù)，形成抗體-半抗原復(fù)合物。所有的復(fù)合物通過生物素和鏈霉親和素的相互作用結(jié)合到固相載體上。將反應(yīng)液吸入測量池中，通過電磁作用將磁珠吸附在電極表面。未與磁珠結(jié)合的物質(zhì)通過ProCell被去除。給電極加以一定的電壓，使復(fù)合物化學(xué)發(fā)光，并通過光電倍增器測量發(fā)光強(qiáng)度。儀器通過2點(diǎn)定標(biāo)校正試劑條形碼包含的廠商定標(biāo)曲線，自動計(jì)算得到檢測結(jié)

4、果。試劑工作溶液M 包被鏈霉親和素的磁珠微粒（透明瓶蓋），1瓶，6.5mL：包被鏈霉親和素的磁珠微粒0.72mg/mL；防腐劑。R1 生物素標(biāo)記的Anti-estradiol-Ab（灰蓋），1瓶8mL：生物素化Anti-estradiol多克隆抗體（兔），45ng/mL；甲二氫睪酮130ng/mL；MES緩沖液 50mmol/L，PH 6.0；防腐劑。R2 Estradiol-peptideRu(bpy)32+（黑蓋）；1瓶8ml：釕復(fù)合物標(biāo)記的雌二醇衍生物，濃度為2.75ng/mL；MES緩沖液 50mmol/L，PH 6.0；防腐劑。警告和注意事項(xiàng)僅用于體外診斷。使用本試劑盒時必須遵循所有

5、試驗(yàn)室試劑操作注意事項(xiàng)。所有廢棄物必須按照當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)進(jìn)行處置。專業(yè)人員可要求獲得安全數(shù)據(jù)報告。避免試劑和各樣本（樣本、定標(biāo)品和質(zhì)控品）產(chǎn)生氣泡。試劑處理該試劑盒為即用型，請勿分開使用。試劑相關(guān)信息可以通過試劑條形碼獲取。儲存及穩(wěn)定性于28下儲存請垂直擺放Elecsys E2試劑盒，確保使用前儀器自動攪拌器能夠完全混勻磁珠微粒。穩(wěn)定性：未開封試劑，28有效期內(nèi)均可使用開封試劑，2812周MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 6018周Elecsys 2010和cobas e 4118周Elecsys 10104周（試劑交替放置于冰箱內(nèi)和分析儀中-溫度為20-25；持續(xù)開蓋的

6、情況下至多20）樣本的采集和準(zhǔn)備僅以下所列樣本可用于檢驗(yàn)。血清樣本須用標(biāo)準(zhǔn)試管或含有分離膠的真空管收集。肝素鋰、肝素鈉、肝素銨、K3-EDTA、檸檬酸鈉和氟化鈉/草酸鉀血漿。標(biāo)準(zhǔn)：回收率在血清值的90%-110%以內(nèi)，斜率0.9-1.1，截距在2倍分析靈敏度（LDL）以內(nèi)，相關(guān)系數(shù)0.95。穩(wěn)定性： 2-8可保存2天；-20可保存6個月。僅能凍融一次選擇合適的試管進(jìn)行不同類型樣本的采集，并非所有廠商的試管均可用于檢測。不同廠商的樣本采集系統(tǒng)可能含有不同的物質(zhì)，某些情況下會影響檢測結(jié)果。如果使用原始管進(jìn)行檢測（樣本前處理系統(tǒng)）時，應(yīng)遵循生產(chǎn)商所提供的指導(dǎo)。有沉淀的樣本在檢測前必須先作離心處理。請

7、勿使用熱滅活的樣本和添加疊氮化合物的樣本和質(zhì)控品。檢測前，確保病人樣本、定標(biāo)品及質(zhì)控品在室溫下(20-25考慮到蒸發(fā)效應(yīng)，樣本、定標(biāo)品和質(zhì)控品應(yīng)在2小時內(nèi)完成檢測。提供的物品參閱“試劑工作溶液”章節(jié)。需要的物品（未提供）貨號03064921，Estradiol II CalSet II 規(guī)格4 x1 ml貨號11731416122，PreciControl Universal，規(guī)格2 x3 ml，分別為PreciControl Universal1和2 或貨號11731416190，PreciControl Universal，規(guī)格2 x3 ml，分別為PreciControl Univers

8、al1和2貨號11731416160，PreciControl Universal，規(guī)格2 x3 ml，分別為PreciControl Universal1和2（美國）貨號03609987190, Diluent MultiAssay, 2 x 16 mL 樣本稀釋液實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)設(shè)備Elecsys 1010/2010，MODULAR ANALYTICS E170或cobas e 分析儀Elecsys 1010/2010和cobas e 411配件：貨號11662988122，ProCell ，6 x 380mL 系統(tǒng)緩沖液貨號11662970122， CleanCell ，6x 380mL測量池

9、洗液 貨號11930346122，Elecsys SysWash，1 x 500mL洗液添加劑貨號11933159001， SysClean適配器貨號11706829001，Elecsys 1010AssayCup，1232反應(yīng)杯或貨號11706802001，Elecsys 2010AssayCup，6060反應(yīng)杯貨號11706799001，Elecsys 1010AssayTip，30120吸頭MODULAR ANALYTICS E170或cobas e 601配件：貨號04880340190，ProCell M，2 x 2L 貨號04880293190， CleanCell M，2x 2L

10、測量池洗液 貨號12135027190， CleanCell M，1x 2L測量池洗液貨號03023141001，PC/CC-Cups，12個杯，用于ProCell M和CleanCell M使用前的預(yù)熱貨號03005712190, ProbeWash M, 12 x 70 mL 清洗液，用于檢測完畢后或更換試劑時清洗試劑針。Cat. No. 03004899190, PreClean M, 5 x 600 mL 檢測清洗液貨號12102137001，AssayTip/AssayCup Combimagazine M ，48盒84反應(yīng)杯或移液管吸頭，廢物袋 貨號03023150001, Was

11、teLiner，廢物袋 貨號03027651001，SysClean AdapterM所有分析儀配件：貨號11298500316, Elecsys SysClean, 5 x 100 mL 系統(tǒng)清洗液 只用于美國：貨號11776835160，Elecsys Estradiol II CalCheck，3個濃度范圍檢測為達(dá)最佳檢測性能，請遵照本說明書中有關(guān)分析儀的相關(guān)指導(dǎo)說明。具體的分析儀檢測說明參見操作手冊。MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析儀：需要PreClean M 溶液使用前，分析儀會自動攪拌磁珠微粒，使其處于懸浮狀態(tài)。試劑相關(guān)信息可通過條形碼自動讀

12、取，不需要人工輸入。特殊情況下，分析儀無法自動讀取條碼信息時，請輸入條碼標(biāo)簽上的15位數(shù)字序列。MODULAR ANALYTICS E170、Elecsys 2010和cobas e分析儀：將冷藏試劑室溫平衡至20C左右，放置分析儀的試劑盤（20C）內(nèi)。避免泡沫產(chǎn)生。分析儀系統(tǒng)會自動調(diào)節(jié)試劑溫度和各試劑盒瓶蓋開/關(guān)。Elecsys 1010分析儀：將冷藏試劑室溫平衡至20-25C左右，放置分析儀的樣品/試劑盤（溫度20-25C）內(nèi)。避免泡沫產(chǎn)生。試劑瓶蓋需手工打開和蓋上。使用完畢后需置于2定標(biāo)溯源性：該方法可溯源至ID-GC/MS (“同位素稀釋-氣相色譜質(zhì)譜分析”).6參考測量程序。每個E2

13、試劑都有一個條形碼包含了各批號試劑定標(biāo)的具體信息。使用Elecsys Estradiol II CalSet可以調(diào)整預(yù)設(shè)置的定標(biāo)曲線。定校頻率：使用新批號試劑時必須進(jìn)行定標(biāo)（新試劑盒在分析儀上放置不能超過24小時）。以下情況建議重新定標(biāo)：MODULAR ANALYTICS E170、Elecsys 2010和cobas e分析儀:使用同一批號試劑，1月后（28天）7天后（分析儀上使用同一試劑盒）Elecsys 1010分析儀:每次更換試劑7天后（環(huán)境溫度20-25C）3天后（環(huán)境溫度25-32所有分析儀：根據(jù)需要：如質(zhì)控超限。質(zhì)控使用Elecsys PreciControl Universal

14、 1和2進(jìn)行質(zhì)控。其他合適的質(zhì)控品也可使用。各濃度質(zhì)控至少每24小時內(nèi)檢測一次，每次更換試劑盒或定標(biāo)后也須進(jìn)行質(zhì)控。各實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)需求制定各自的質(zhì)控限和質(zhì)控周期。質(zhì)控值必須處于規(guī)定的質(zhì)控限內(nèi)。各實(shí)驗(yàn)室必須建立應(yīng)對失控的相應(yīng)糾正措施。請遵循政府法規(guī)和當(dāng)?shù)匦袠I(yè)導(dǎo)則進(jìn)行質(zhì)量控制。計(jì)算儀器會自動計(jì)算各樣本分析物濃度（在MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析儀上既可以使用pmol/L、pg/mL、ng/L也可以使用nmol/L作為單位）。轉(zhuǎn)換因子：pmol/L X 0.273 = pg/mL（ng/L） pg/mL X 3.67 = pmol/L干擾因素以下情況下，檢測

15、結(jié)果不受干擾：黃疸（膽紅素1129mol/L或66 mg/dL）, 溶血（血紅蛋白0.621mmol/L或 1g/dL，血脂(甘油三脂1000mg/dL)和生物素147nmol/L或36ng/mL標(biāo)準(zhǔn)：回收率在初值10之內(nèi)。對于接受高劑量生物素治療的患者（5mg/天），需在末次生物素治療8小時后采集樣本。類風(fēng)濕因子1200 IU/ml時，檢測結(jié)果不受影響。對18種常用藥物進(jìn)行體外檢測未發(fā)現(xiàn)會影響檢測結(jié)果。檢測接種過兔血清疫苗或?qū)⑼米赢?dāng)作寵物的患者樣本可能會得到錯誤的結(jié)果。少數(shù)病例中，高滴度的抗分析物特異性抗體，抗鏈霉素或釕的抗體會影響檢測結(jié)果。恰當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)可將影響程度降到最低。作為診斷指標(biāo)，

16、必須結(jié)合患者病史，臨床檢查和其他臨床資料來綜合評估檢測結(jié)果。檢測范圍18.4-15781 pmol/L（5.00-4300 pg/mL）（通過最低檢測限和廠商定標(biāo)曲線的最高值確定）。檢測值低于檢出限則報告18.4 pmol/L或5.00 pg/mL。檢測值高于檢測上限時則報告15781 pmol/L或4300 pg/mL（5倍稀釋樣本后可報告至78905 pmol/L或21500 pg/mL）。稀釋樣本中雌二醇含量超出檢測范圍時，MODULAR ANALYTICS E170、Elecsys 1010/2010和cobas e分析儀自動稀釋檢測樣本。推薦稀釋比是1:5。稀釋后樣本濃度必須1835

17、 pmol/L（500 pg/mL）。分析儀稀釋檢測樣本濃度，分析儀軟件自動乘以稀釋倍數(shù)。超出檢測范圍稀釋時，不考慮稀釋液中內(nèi)源性分析物濃度（220 pmol/L或60 pg/mL）。期望值以下參考值由德國和奧地利的4個臨床中心使用Elecsys Estradiol II檢測方法檢測總共520例健康個體樣本研究得到。（研究號: B00P023 和 C00P032 - status 2001年12月）受試者數(shù)量百分位數(shù)pmol/Lpg/mL男性前3月男孩女孩* 18.4 pmol/L（5.0 pg/mL）是檢測方法的分析靈敏度。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)進(jìn)行自身人群期望值調(diào)查評估，如有必要，可建立自己的參考范圍

18、。特殊性能指標(biāo)試劑在分析儀上的性能試驗(yàn)數(shù)據(jù)如下。由于具體情況不同，各實(shí)驗(yàn)室所得出的數(shù)據(jù)可能會稍有差異。精密度根據(jù)NCCLS（臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會）中EP5-A準(zhǔn)則，采用Elecsys試劑、人混合血清和質(zhì)控品進(jìn)行重復(fù)性檢測：每天測定6次，共10天（n=60）；MODULAR AMALYTICS E170分析儀批內(nèi)精密度，n=21。所得結(jié)果如下：b）HS：人血清c）PC U：PreciControl Universal如下結(jié)果包括低濃度范圍人血清樣本檢測的總精密度。這些值是在3個實(shí)驗(yàn)室（美國、日本、奧地利）研究MODULAR ANALYTICS E170性能過程中得到的。分析靈敏度（最低檢測限）

19、18.4 pmol/L（5.00 pg/mL）檢測限是指能夠檢測出的區(qū)別于零濃度最低分析物濃度。計(jì)算為最低標(biāo)準(zhǔn)以上兩個標(biāo)準(zhǔn)差（主定標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)12SD，批內(nèi)精密度，n=21）方法學(xué)比較a）Elecsys E2 II法（y）和ID-GC/MS法（x）對臨床樣本檢測結(jié)果進(jìn)行方法學(xué)比較，相關(guān)性如下：樣本數(shù)n=32Passing/Bablok7 線性回歸y=1.00 x+4.43 y=1.01x+18.0T=0.855 r=0.996樣本濃度范圍:13-11550 pmol/L（約3.6-3141 pg/mL）b）Elecsys E2 II法（y）和一種商品化的雌二醇檢測方法（x）對臨床樣本檢測結(jié)果進(jìn)行方

20、法學(xué)比較，相關(guān)性如下：樣本數(shù)n=136Passing/Bablok7 線性回歸y=1.06x-18.6 y=1.07x-18.2T=0.918 r=0.984樣本濃度范圍:88-3652pmol/L（約24-995 pg/mL）分析特異性使用抗體衍生物，交叉反應(yīng)如下（%）：a)每添加0.1 g/mL物質(zhì)：醛固酮0.006雄烯二酮n.d.*馬烯雌酮0.018雌三醇0.077雌酮0.515雌酮-3-葡萄糖苷酸0.012雌酮-3-硫酸鹽0.004脫水羥基孕酮0.010醋酸炔諾酮0.006孕烯醇酮0.008孕酮0.0092-甲氧基-雌二醇0.05417-雌二醇-3,17-硫酸鹽0.41117-雌二醇-

21、3-D-葡萄糖苷酸0.03317-雌二醇-17-D-葡萄糖苷酸0.01417-雌二醇-3-葡萄糖苷酸-17-硫酸鹽0.01317-雌二醇-3-硫酸-17-葡萄糖苷酸0.01117-雌二醇-3-硫酸鹽0.03817-雌二醇-17-戊酸鹽0.29417-雌二醇-17-硫酸鹽0.00217-羥孕酮0.010b) 每添加0.2 g/mL物質(zhì)：0.003皮質(zhì)醇可的松n.d.三苯氧胺n.d.17-乙炔基-雌二醇0.309c)每添加0.25 g/mL物質(zhì)：氯地酚n.d.d)每添加1.0 g/mL物質(zhì)：潑尼松龍0.001e)每添加10 g/mL物質(zhì)：達(dá)那唑0.001DHEA-Sn.d.硫酸脫氫表雄酮0.011

22、睪酮n.d.5-二氫睪酮0.0015-雄甾烯-3-,17-二醇0.001 * n.d.：未檢測到功能靈敏度44 pmol/L（12 pg/mL）功能靈敏度定義為批間重復(fù)CV為20%時對應(yīng)檢測限樣品具有的最低分析物濃度。參考文獻(xiàn)1. Johnson MR, Carter G, Grint C, Lightman SL. Relationship between ovarian steroids, gonadotropin and relaxin during the menstrualcycle. Acta Endocrinol 1993;129/2:121-125.2. Lichtenberg

23、 V, Schulte-Baukloh A, Lindner Ch, Braendle W. Discrepanciesbetween results of serum 17-Oestradiol E2 determinations carried out using different immunoassay kits in women receiving oestrogen replacement therapy. Lab med 1992;16:412-416.3. Runnebaum B, Rabe T. Gynkologische Endokrinologie und Fortpfl

24、anzungsmedizin Springer Verlag 1994;Band 1:83-86,517-524. Band 2:395-400,403-408. ISBN 3-540-57345-3, ISBN 3-540-57347-x.4. Iqbal MJ, Dalton M, Sawers RS. Binding of testosterone and oestradiol to sex hormone binding globulin, human serum albumin and other plasma proteins: evidence for non-specific binding of oestradiol to sex hormo