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1、PAGE3限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶是可以識別DNA的特異序列,并在識別位點(diǎn)或其周圍切割雙鏈DNA的一類內(nèi)切酶,簡稱限制酶。根據(jù)限制酶的結(jié)構(gòu),輔因子的需求切位與作用方式,可將限制酶分為三種類型,分別是第一型(TyyloliquefaciensH中提取的限制性內(nèi)切酶稱為BamH,在同一品系細(xì)菌中得到的識別不同堿基順序的幾種不同特異性的酶,可以編成不同的號,如HindII、HindIII,HoHI、HindII、HindIII等。其分子量小于105道爾頓;反應(yīng)只需Mg2;最重要的是在所識別的特定堿基順序上有特異性的切點(diǎn),因而DNA分子經(jīng)過II類酶作用后,可產(chǎn)生特異性的酶解片斷,這些片斷可用凝
2、膠電泳法進(jìn)行分離、鑒別。限制性內(nèi)切酶識別DNA序列中的回文序列。有些酶的切割位點(diǎn)在回文的一側(cè)(如EcoRI、BamHI、Hind等),因而可形成粘性末端,另一些II類酶如AluI、BsuRI、BalI、HalIII、HaI等,切割位點(diǎn)在回文序列中間,形成平整末端。AluI的切割位點(diǎn)如下:5-AGCT-33-TCGA-5在已發(fā)現(xiàn)的限制性內(nèi)切酶中,近百種酶的識別順序已被測定。有很多,這種酶稱為“異源同功酶”(isochiomer,同限制內(nèi)切酶;同裂酶)。應(yīng)該注意的是,這些酶雖然有相同的識別順序,但它們的切點(diǎn)并不完全一樣。例如XmaI和SmaI都識別六核苷酸CCCGGG,但XmaI的切點(diǎn)在cCCGGG,而EmaI的切點(diǎn)則在CCCGgGG,前者切割DNA分子,形成帶有CCGG粘性末端的DNA片段,而后者并不形成粘性末端。當(dāng)然,也有識別順序和切點(diǎn)都相同的酶,如HanoI,都在識別順序CCGG內(nèi)有一相同的切點(diǎn),HalIII和BsuRI同樣在識別順序GGCC內(nèi)有一相同的切點(diǎn)。用途用于DNA基因組物理圖譜的組建;基因的定位和基因分離;DNA分子堿基序列分析;比
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