CTC循環(huán)腫瘤細(xì)胞共25張課件-2

CTC循環(huán)腫瘤細(xì)胞56、死去何所道，托體同山阿。57、春秋多佳日，登高賦新詩(shī)。58、種豆南山下，草盛豆苗稀。晨興理荒穢，帶月荷鋤歸。道狹草木長(zhǎng)，夕露沾我衣。衣沾不足惜，但使愿無(wú)違。59、相見(jiàn)無(wú)雜言，但道桑麻長(zhǎng)。60、迢迢新秋夕，亭亭月將圓。CTC循環(huán)腫瘤細(xì)胞CTC循環(huán)腫瘤細(xì)胞56、死去何所道，托體同山阿。57、春秋多佳日，登高賦新詩(shī)。58、種豆南山下，草盛豆苗稀。晨興理荒穢，帶月荷鋤歸。道狹草木長(zhǎng)，夕露沾我衣。衣沾不足惜，但使愿無(wú)違。59、相見(jiàn)無(wú)雜言，但道桑麻長(zhǎng)。60、迢迢新秋夕，亭亭月將圓。腫瘤循環(huán)細(xì)胞（CTC）檢測(cè)行業(yè)背景中國(guó)腫瘤發(fā)病率285.91/10萬(wàn)，每年新發(fā)病例321萬(wàn)，6人/分鐘確診惡性腫瘤。腫瘤13標(biāo):中晚期蛋白標(biāo)記物，PSA,CA125,CA199等。影像學(xué)檢測(cè)：CT，MRI,PET，僅檢出5mm以上腫瘤。病理診斷：穿刺樣本檢測(cè)，創(chuàng)傷性。技術(shù)瓶頸：僅能檢測(cè)中晚期腫瘤、難以早期診斷！液體活檢：通過(guò)檢測(cè)血液及其他體液中更加特異的腫瘤指紋來(lái)實(shí)現(xiàn)腫瘤早期診斷。循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）：腫瘤上脫落的活細(xì)胞，可能代表了轉(zhuǎn)移的種子；循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）則是來(lái)自死細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，通常以DNA短片段的形式存在。CTC循環(huán)腫瘤細(xì)胞56、死去何所道，托體同山阿。CTC循環(huán)腫CTC循環(huán)腫瘤細(xì)胞共25張課件_22CTC循環(huán)腫瘤細(xì)胞共25張課件_23CTC循環(huán)腫瘤細(xì)胞共25張課件_24CTC循環(huán)腫瘤細(xì)胞共25張課件_25CTCs檢測(cè)的臨床可行性實(shí)時(shí)方便及時(shí)準(zhǔn)確微創(chuàng)CTCs檢測(cè)的臨床可行性實(shí)時(shí)方便及時(shí)準(zhǔn)確微創(chuàng)6健康狀態(tài)癌前病變惡性腫瘤腫瘤轉(zhuǎn)移CTC檢測(cè)臨床意義CTC監(jiān)測(cè)分析耐藥性檢測(cè)動(dòng)態(tài)跟蹤C(jī)TC數(shù)目，判斷是否產(chǎn)生耐藥性腫瘤復(fù)發(fā)檢測(cè)CTC數(shù)目增多是腫瘤復(fù)發(fā)的前兆腫瘤新藥物的開(kāi)發(fā)配合研制新的抗腫瘤藥物體外早期診斷腫瘤在1mm時(shí)，血液中可檢測(cè)出CTC預(yù)后判斷根據(jù)治療前后CTC個(gè)數(shù)判斷預(yù)后及存活時(shí)間化療藥物的療效評(píng)判根據(jù)化療前后CTC數(shù)目變化，確定藥物是否有效健康狀態(tài)CTC檢測(cè)臨床意義CTC耐藥性檢測(cè)體外早期診斷7

如何檢測(cè)CTCs？由于外周血中CTC非常稀少，通常CTC檢測(cè)會(huì)首先利用細(xì)胞的物理性質(zhì)或生物特性等對(duì)CTC加以分離富集。CTCs的富集：如何獲取CTCs？※從紅細(xì)胞和白細(xì)胞中富集惡性腫瘤細(xì)胞CTCs的鑒定：如何鑒定所獲細(xì)胞為CTCs？※將惡性腫瘤細(xì)胞與紅細(xì)胞、白細(xì)胞、正常上皮細(xì)胞、造血干細(xì)胞等區(qū)分開(kāi)來(lái)循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)如何檢測(cè)CTCs？循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)8對(duì)于分離富集的CTC可以進(jìn)行基因型或者表型分析等以計(jì)數(shù)CTC或者鑒定其分子特性免疫表型分析：靶細(xì)胞丟失PCR分析：高效率，高靈敏度，特異性，操作簡(jiǎn)單。假陽(yáng)性率較高、細(xì)胞形態(tài)學(xué)被破壞、需要更嚴(yán)格的標(biāo)本保存條件和實(shí)驗(yàn)條件單個(gè)CTC分子信息監(jiān)測(cè)（克服白細(xì)胞污染）循環(huán)腫瘤細(xì)胞的分析鑒定對(duì)于分離富集的CTC可以進(jìn)行基因型或者表型分析等以計(jì)數(shù)CTC9循環(huán)腫瘤細(xì)胞的分離富集循環(huán)腫瘤細(xì)胞的分離富集10CTCs分離、分型、分析CTCs分離、分型、分析11原理技術(shù)產(chǎn)品免疫捕獲法(根據(jù)細(xì)胞表面標(biāo)志物)陽(yáng)性富集法：CellsearchTM系統(tǒng)CTC芯片（CTC-chip）MACS?CellSeparation陰性篩選法：EasySepCyttel過(guò)濾法(根據(jù)細(xì)胞大小)ISET膜過(guò)濾

密度梯度離心（根據(jù)細(xì)胞密度）OncoQuick分離體系CTCs的檢測(cè)方法及代表技術(shù)產(chǎn)品原理技術(shù)產(chǎn)品陽(yáng)性富集法：過(guò)濾法(根據(jù)細(xì)胞大小)ISET膜12免疫捕獲法——磁珠分選

原理：

將特異性抗原包被在已有同源二抗的磁珠上制成免疫磁珠再與靶細(xì)胞上抗抗原結(jié)合成“靶細(xì)胞—抗原抗體—磁珠”復(fù)合物，在磁場(chǎng)作用下向一定方向移動(dòng)，從而富集靶細(xì)胞.分選策略陽(yáng)性富集：使用表面耦聯(lián)抗目的細(xì)胞抗體的磁珠，細(xì)胞與磁珠結(jié)合后直接在磁場(chǎng)中被分離出來(lái)。負(fù)性篩選：通過(guò)去除無(wú)關(guān)細(xì)胞使目的細(xì)胞得以純化免疫捕獲法——磁珠分選

原理：13陽(yáng)性富集CellsearchTM系統(tǒng)CTC芯片（CTC-chip）MACS?CellSeparation

磁性細(xì)胞分選系統(tǒng)原理：

采用抗EpCAM（CD326）結(jié)合免疫磁珠捕獲EpCAM陽(yáng)性CTCs特點(diǎn)：捕獲的CTCs純度較高能夠捕獲到血液中上皮型、上皮間質(zhì)混合型的CTCs無(wú)法捕獲到間質(zhì)型CTCs（EpCAM陰性）陽(yáng)性富集CellsearchTM系統(tǒng)14

magnetAnti-EpCAMCoatedferrofluids7.5mlAnti-CK(epithelialcells)Anti-CD45(WBCs)DAPI(viablecells)Automatedfluorescencedetectionsystemmagnet使用抗EpCAM抗體抗體包被磁微粒，使其與腫瘤細(xì)胞結(jié)合，在特定磁場(chǎng)作用下達(dá)到分離CTC的目的。陽(yáng)性富集-CellsearchTMCTCWBCmagnetAnti-EpCAM7.5mlAnti15CellsearchTMCTCs鑒定上皮來(lái)源的CTCs的判定：DAPI（細(xì)胞核）陽(yáng)性、角蛋白CKs陽(yáng)性、CD45陰性CellsearchTMCTCs鑒定上皮來(lái)源的CTCs的判16芯片的表層排布了78000個(gè)包被抗EpCAM抗體的微位點(diǎn)血液樣本流經(jīng)芯片時(shí)，抗體與腫瘤細(xì)胞結(jié)合粘附在芯片上制造相對(duì)困難，成本昂貴，顯微位點(diǎn)周?chē)难魍〞承韵拗屏伺c抗體覆蓋位點(diǎn)接觸的CTC數(shù)量陽(yáng)性富集-CTCs-Chip芯片的表層排布了78000個(gè)包被抗陽(yáng)性富集-CTCs-C17原理：聯(lián)合上皮細(xì)胞標(biāo)志及腫瘤特異性標(biāo)志通過(guò)免疫磁珠分選特異性腫瘤的CTCs聯(lián)合抗MUC1和EpCAM抗體檢測(cè)乳腺癌和直腸癌通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增腫瘤標(biāo)志物來(lái)鑒定CTCs特點(diǎn)：較單一使用EpCAM抗體更特異不適用于EpCAM和CK陰性或弱化的CTCsPCR鑒定敏感性高，但易造成假陽(yáng)性陽(yáng)性富集-AdnaTest檢測(cè)系統(tǒng)原理：陽(yáng)性富集-AdnaTest檢測(cè)系統(tǒng)18陰性富集Cyttel/Cytelligen檢測(cè)系統(tǒng)原理:

利用CD45磁珠抗體吸附白細(xì)胞，在磁場(chǎng)作用

下去除白細(xì)胞，CTCs被富集沉淀特點(diǎn)：

可檢出EpCAM、CK陰性的間質(zhì)型CTCs樣本處理步驟多，CTCs易丟失陰性富集Cyttel/Cytelligen檢測(cè)系統(tǒng)19陰性篩選法--Cyttel步驟較多，CTCs容易丟失鑒定不穩(wěn)定

判定標(biāo)準(zhǔn)：DAPI陽(yáng)性、CD45陰性，8號(hào)染色體擴(kuò)增；特異性不足陰性篩選法--Cyttel步驟較多，CTCs容易丟失鑒定不穩(wěn)20基于細(xì)胞大小過(guò)濾原理：根據(jù)腫瘤細(xì)胞的體積大于白細(xì)胞體積分離CTC代表技術(shù)：濾膜濾法分離上皮源腫瘤細(xì)胞（ISET）方法：將全血經(jīng)過(guò)帶小孔8μm的聚碳酸酯膜的過(guò)濾，即可除去白細(xì)胞

富集得到CTCs.特點(diǎn)：細(xì)胞完整性好；可完全分離上皮型、間質(zhì)型CTCs；可檢出循環(huán)腫瘤拴子；局限：不宜檢出細(xì)胞直徑小于8μm的腫瘤如神經(jīng)內(nèi)分泌瘤HepG2cellsstainedwithanti-KL1濾膜法基于細(xì)胞大小過(guò)濾原理：根據(jù)腫瘤細(xì)胞的體積大于白細(xì)胞體積分離C21密度梯度離心原理：

根據(jù)腫瘤細(xì)胞與白細(xì)胞密度不同，通過(guò)梯度離心分離CTCsOncoQuick分離體系方法：

密度梯度離心后，白細(xì)胞通過(guò)多孔濾膜被濾除，而CTCs被富集在介

質(zhì)層中，洗脫后得到CTCs.特點(diǎn)：可分離CK陽(yáng)性和陰性細(xì)胞局限性：CTCs遷移可能至血漿層、紅細(xì)胞層和粒細(xì)胞層而丟失；CTCs微栓子可能沉入紅細(xì)胞層而丟失；與腫瘤細(xì)胞特性、離心時(shí)間和溫度等有關(guān)；用血量多15-30ml密度梯度離心原理：22流式細(xì)胞術(shù)原理：根據(jù)白細(xì)胞表達(dá)CD45抗原、CK陽(yáng)性CTCs表達(dá)EpCAM，采用不同熒光素標(biāo)記的抗CD45和抗EpCAM，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析和分選CK陽(yáng)性細(xì)胞的CTC（CD45-EpCAM+）可在檢測(cè)的同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)、DNA倍數(shù)分析敏感性較低，需要的血液樣本量大缺乏規(guī)范的臨床操作方法流式細(xì)胞術(shù)原理：23技術(shù)優(yōu)勢(shì)局限性陽(yáng)性率樣本量CellsearchTM特異性好、重復(fù)性好、可自動(dòng)化不能分型、漏檢轉(zhuǎn)移侵襲能力較強(qiáng)的間質(zhì)型CTCs及CTM71%（MBC）47%（MCRC）78%（AIPC）7.5mLCTCs-chip(HB-chip)特異性好、靈敏度高、HB芯片可富集到CTM不能分型、漏檢轉(zhuǎn)移侵襲能力較強(qiáng)的間質(zhì)型CTCs93%(MPC)0.9-5mlCyttel可檢測(cè)出EpCAM、CK陰性的CTC、未對(duì)CTC進(jìn)行任何標(biāo)記不能分型、鑒定不穩(wěn)定、鑒定時(shí)易發(fā)生CTCs丟失64.5%(NSCLC)5mLISET膜過(guò)濾CTC丟失少、適用于CK陰性腫瘤、適用于形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)和基因特異性分析不適合小神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞、特異性低、殘留大的白細(xì)胞>80%（BC）1-15ml常見(jiàn)CTCs一代檢測(cè)技術(shù)的比較技術(shù)優(yōu)勢(shì)局限性陽(yáng)性率樣本量CellsearchTM特異性好、242526、要使整個(gè)人生都過(guò)得舒適、愉快，這是不可能的，因?yàn)槿祟?lèi)必須具備一種能應(yīng)付逆境的態(tài)度?！R梭

27、只有把抱怨環(huán)境的心情，化為上進(jìn)的力量，才是成功的保證?！_曼·羅蘭

28、知之者不如好之者，好之者不如樂(lè)之者?！鬃?/p>

29、勇猛、大膽和堅(jiān)定的決心能夠抵得上武器的精良?！_(dá)·芬奇

30、意志是一個(gè)強(qiáng)壯的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本華謝謝！2526、要使整個(gè)人生都過(guò)得舒適、愉快，這是不可能的，因?yàn)槿薈TC循環(huán)腫瘤細(xì)胞56、死去何所道，托體同山阿。57、春秋多佳日，登高賦新詩(shī)。58、種豆南山下，草盛豆苗稀。晨興理荒穢，帶月荷鋤歸。道狹草木長(zhǎng)，夕露沾我衣。衣沾不足惜，但使愿無(wú)違。59、相見(jiàn)無(wú)雜言，但道桑麻長(zhǎng)。60、迢迢新秋夕，亭亭月將圓。CTC循環(huán)腫瘤細(xì)胞CTC循環(huán)腫瘤細(xì)胞56、死去何所道，托體同山阿。57、春秋多佳日，登高賦新詩(shī)。58、種豆南山下，草盛豆苗稀。晨興理荒穢，帶月荷鋤歸。道狹草木長(zhǎng)，夕露沾我衣。衣沾不足惜，但使愿無(wú)違。59、相見(jiàn)無(wú)雜言，但道桑麻長(zhǎng)。60、迢迢新秋夕，亭亭月將圓。腫瘤循環(huán)細(xì)胞（CTC）檢測(cè)行業(yè)背景中國(guó)腫瘤發(fā)病率285.91/10萬(wàn)，每年新發(fā)病例321萬(wàn)，6人/分鐘確診惡性腫瘤。腫瘤13標(biāo):中晚期蛋白標(biāo)記物，PSA,CA125,CA199等。影像學(xué)檢測(cè)：CT，MRI,PET，僅檢出5mm以上腫瘤。病理診斷：穿刺樣本檢測(cè)，創(chuàng)傷性。技術(shù)瓶頸：僅能檢測(cè)中晚期腫瘤、難以早期診斷！液體活檢：通過(guò)檢測(cè)血液及其他體液中更加特異的腫瘤指紋來(lái)實(shí)現(xiàn)腫瘤早期診斷。循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）：腫瘤上脫落的活細(xì)胞，可能代表了轉(zhuǎn)移的種子；循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）則是來(lái)自死細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，通常以DNA短片段的形式存在。CTC循環(huán)腫瘤細(xì)胞56、死去何所道，托體同山阿。CTC循環(huán)腫CTC循環(huán)腫瘤細(xì)胞共25張課件_227CTC循環(huán)腫瘤細(xì)胞共25張課件_228CTC循環(huán)腫瘤細(xì)胞共25張課件_229CTC循環(huán)腫瘤細(xì)胞共25張課件_230CTCs檢測(cè)的臨床可行性實(shí)時(shí)方便及時(shí)準(zhǔn)確微創(chuàng)CTCs檢測(cè)的臨床可行性實(shí)時(shí)方便及時(shí)準(zhǔn)確微創(chuàng)31健康狀態(tài)癌前病變惡性腫瘤腫瘤轉(zhuǎn)移CTC檢測(cè)臨床意義CTC監(jiān)測(cè)分析耐藥性檢測(cè)動(dòng)態(tài)跟蹤C(jī)TC數(shù)目，判斷是否產(chǎn)生耐藥性腫瘤復(fù)發(fā)檢測(cè)CTC數(shù)目增多是腫瘤復(fù)發(fā)的前兆腫瘤新藥物的開(kāi)發(fā)配合研制新的抗腫瘤藥物體外早期診斷腫瘤在1mm時(shí)，血液中可檢測(cè)出CTC預(yù)后判斷根據(jù)治療前后CTC個(gè)數(shù)判斷預(yù)后及存活時(shí)間化療藥物的療效評(píng)判根據(jù)化療前后CTC數(shù)目變化，確定藥物是否有效健康狀態(tài)CTC檢測(cè)臨床意義CTC耐藥性檢測(cè)體外早期診斷32

如何檢測(cè)CTCs？由于外周血中CTC非常稀少，通常CTC檢測(cè)會(huì)首先利用細(xì)胞的物理性質(zhì)或生物特性等對(duì)CTC加以分離富集。CTCs的富集：如何獲取CTCs？※從紅細(xì)胞和白細(xì)胞中富集惡性腫瘤細(xì)胞CTCs的鑒定：如何鑒定所獲細(xì)胞為CTCs？※將惡性腫瘤細(xì)胞與紅細(xì)胞、白細(xì)胞、正常上皮細(xì)胞、造血干細(xì)胞等區(qū)分開(kāi)來(lái)循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)如何檢測(cè)CTCs？循環(huán)腫瘤細(xì)胞的檢測(cè)33對(duì)于分離富集的CTC可以進(jìn)行基因型或者表型分析等以計(jì)數(shù)CTC或者鑒定其分子特性免疫表型分析：靶細(xì)胞丟失PCR分析：高效率，高靈敏度，特異性，操作簡(jiǎn)單。假陽(yáng)性率較高、細(xì)胞形態(tài)學(xué)被破壞、需要更嚴(yán)格的標(biāo)本保存條件和實(shí)驗(yàn)條件單個(gè)CTC分子信息監(jiān)測(cè)（克服白細(xì)胞污染）循環(huán)腫瘤細(xì)胞的分析鑒定對(duì)于分離富集的CTC可以進(jìn)行基因型或者表型分析等以計(jì)數(shù)CTC34循環(huán)腫瘤細(xì)胞的分離富集循環(huán)腫瘤細(xì)胞的分離富集35CTCs分離、分型、分析CTCs分離、分型、分析36原理技術(shù)產(chǎn)品免疫捕獲法(根據(jù)細(xì)胞表面標(biāo)志物)陽(yáng)性富集法：CellsearchTM系統(tǒng)CTC芯片（CTC-chip）MACS?CellSeparation陰性篩選法：EasySepCyttel過(guò)濾法(根據(jù)細(xì)胞大小)ISET膜過(guò)濾

密度梯度離心（根據(jù)細(xì)胞密度）OncoQuick分離體系CTCs的檢測(cè)方法及代表技術(shù)產(chǎn)品原理技術(shù)產(chǎn)品陽(yáng)性富集法：過(guò)濾法(根據(jù)細(xì)胞大小)ISET膜37免疫捕獲法——磁珠分選

原理：

將特異性抗原包被在已有同源二抗的磁珠上制成免疫磁珠再與靶細(xì)胞上抗抗原結(jié)合成“靶細(xì)胞—抗原抗體—磁珠”復(fù)合物，在磁場(chǎng)作用下向一定方向移動(dòng)，從而富集靶細(xì)胞.分選策略陽(yáng)性富集：使用表面耦聯(lián)抗目的細(xì)胞抗體的磁珠，細(xì)胞與磁珠結(jié)合后直接在磁場(chǎng)中被分離出來(lái)。負(fù)性篩選：通過(guò)去除無(wú)關(guān)細(xì)胞使目的細(xì)胞得以純化免疫捕獲法——磁珠分選

原理：38陽(yáng)性富集CellsearchTM系統(tǒng)CTC芯片（CTC-chip）MACS?CellSeparation

磁性細(xì)胞分選系統(tǒng)原理：

采用抗EpCAM（CD326）結(jié)合免疫磁珠捕獲EpCAM陽(yáng)性CTCs特點(diǎn)：捕獲的CTCs純度較高能夠捕獲到血液中上皮型、上皮間質(zhì)混合型的CTCs無(wú)法捕獲到間質(zhì)型CTCs（EpCAM陰性）陽(yáng)性富集CellsearchTM系統(tǒng)39

magnetAnti-EpCAMCoatedferrofluids7.5mlAnti-CK(epithelialcells)Anti-CD45(WBCs)DAPI(viablecells)Automatedfluorescencedetectionsystemmagnet使用抗EpCAM抗體抗體包被磁微粒，使其與腫瘤細(xì)胞結(jié)合，在特定磁場(chǎng)作用下達(dá)到分離CTC的目的。陽(yáng)性富集-CellsearchTMCTCWBCmagnetAnti-EpCAM7.5mlAnti40CellsearchTMCTCs鑒定上皮來(lái)源的CTCs的判定：DAPI（細(xì)胞核）陽(yáng)性、角蛋白CKs陽(yáng)性、CD45陰性CellsearchTMCTCs鑒定上皮來(lái)源的CTCs的判41芯片的表層排布了78000個(gè)包被抗EpCAM抗體的微位點(diǎn)血液樣本流經(jīng)芯片時(shí)，抗體與腫瘤細(xì)胞結(jié)合粘附在芯片上制造相對(duì)困難，成本昂貴，顯微位點(diǎn)周?chē)难魍〞承韵拗屏伺c抗體覆蓋位點(diǎn)接觸的CTC數(shù)量陽(yáng)性富集-CTCs-Chip芯片的表層排布了78000個(gè)包被抗陽(yáng)性富集-CTCs-C42原理：聯(lián)合上皮細(xì)胞標(biāo)志及腫瘤特異性標(biāo)志通過(guò)免疫磁珠分選特異性腫瘤的CTCs聯(lián)合抗MUC1和EpCAM抗體檢測(cè)乳腺癌和直腸癌通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增腫瘤標(biāo)志物來(lái)鑒定CTCs特點(diǎn)：較單一使用EpCAM抗體更特異不適用于EpCAM和CK陰性或弱化的CTCsPCR鑒定敏感性高，但易造成假陽(yáng)性陽(yáng)性富集-AdnaTest檢測(cè)系統(tǒng)原理：陽(yáng)性富集-AdnaTest檢測(cè)系統(tǒng)43陰性富集Cyttel/Cytelligen檢測(cè)系統(tǒng)原理:

利用CD45磁珠抗體吸附白細(xì)胞，在磁場(chǎng)作用

下去除白細(xì)胞，CTCs被富集沉淀特點(diǎn)：

可檢出EpCAM、CK陰性的間質(zhì)型CTCs樣本處理步驟多，CTCs易丟失陰性富集Cyttel/Cytelligen檢測(cè)系統(tǒng)44陰性篩選法--Cyttel步驟較多，CTCs容易丟失鑒定不穩(wěn)定

判定標(biāo)準(zhǔn)：DAPI陽(yáng)性、CD45陰性，8號(hào)染色體擴(kuò)增；特異性不足陰性篩選法--Cyttel步驟較多，CTCs容易丟失鑒定不穩(wěn)45基于細(xì)胞大小過(guò)濾原理：根據(jù)腫瘤細(xì)胞的體積大于白細(xì)胞體積分離CTC代表技術(shù)：濾膜濾法分離上皮源腫瘤細(xì)胞（ISET）方法：將全血經(jīng)過(guò)帶小孔8μm的聚碳酸酯膜的過(guò)濾，即可除去白細(xì)胞

富集得到CTCs.特點(diǎn)：細(xì)胞完整性好；可完全分離上皮型、間質(zhì)型CTCs；可檢出循環(huán)腫瘤拴子；局限：不宜檢出細(xì)胞直徑小于8μm的腫瘤如神經(jīng)內(nèi)分泌瘤HepG2cellsstainedwithanti-KL1濾膜法基于細(xì)胞大小過(guò)濾原理：根據(jù)腫瘤細(xì)胞的體積大于白細(xì)胞體積分離C46密度梯度離心原理：

根據(jù)腫瘤細(xì)胞與白細(xì)胞密度不同，通過(guò)梯度離心分離CTCsOncoQuick分離體系方法：

密度梯度離心后，白細(xì)胞通過(guò)多孔濾膜被濾除，而CTCs被富集在介

質(zhì)層中，洗脫后得到CTCs.特點(diǎn)：可分離CK陽(yáng)性和陰性細(xì)胞局限性：CTCs遷移可能至血漿層、紅細(xì)胞層和粒細(xì)胞層而丟失；CTCs微栓子可能沉入紅細(xì)胞層而丟失；與腫瘤細(xì)胞特性、離心時(shí)間和溫度等有關(guān)；用血量多15-3