《一-免疫應(yīng)答》課件(陜西省縣級優(yōu)課)

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——單克隆抗體的制備人們獲得抗體的傳統(tǒng)方法是?二：動物細(xì)胞融合的成功應(yīng)用單克隆抗體的制備—極富創(chuàng)造性的方案將能夠產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞和具有無限增殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合在一起，形成雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞既能在體外快速生長，又能持續(xù)分泌成分單一的特異性抗體。這種單一類型的只針對某一特定抗原決定簇的抗體分子，就是單克隆抗體。米爾斯坦(阿根廷)和科勒(德國)因此在1984年獲諾貝爾獎。單克隆抗體的制備—極富創(chuàng)造性的方案雜交細(xì)胞滅活的病毒等手段小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞經(jīng)免疫的小鼠提取雜交瘤細(xì)胞第一次篩選用特定的選擇性培養(yǎng)基第二次篩選能產(chǎn)生特定抗體、培養(yǎng)條件下能無限增殖的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔提取單克隆抗體雜交細(xì)胞滅活的病毒等手段小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞經(jīng)免疫的小單抗的制備過程要點(diǎn)：分離B淋巴細(xì)胞（B）；找到骨髓瘤細(xì)胞（G）。注意B淋巴細(xì)胞是一個系列。（B1,B2,B3,---Bn）細(xì)胞融合——三種融合方式:（BB;BG;GG）第一次篩選：在“選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)”上培養(yǎng)篩選雜交瘤細(xì)胞（只有BG雜交瘤細(xì)胞存活。但BG雜交瘤細(xì)胞也是一個系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在動物特異性免疫此培養(yǎng)基上不能存活。）單抗的制備過程要點(diǎn)：5.第二次篩選：在“多孔培養(yǎng)板上”培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞系列

，每孔只放一個雜交瘤細(xì)胞?！翱寺』囵B(yǎng)”每個雜交瘤細(xì)胞，并進(jìn)行“單一抗體檢測”，“檢測陽性”的孔內(nèi)即是所需要的雜交瘤細(xì)胞。6.選擇所需要的雜交瘤克隆細(xì)胞群，體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。7.提取單克隆抗體。5.第二次篩選：在“多孔培養(yǎng)板上”培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞系列，每孔3）、為何要進(jìn)行兩次篩選？4）、如何進(jìn)行第2次篩選？培養(yǎng)在多孔培養(yǎng)板上，每孔只有一個雜交瘤細(xì)胞。第1次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（多種）。第2次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞群。問題強(qiáng)化：1）、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動物細(xì)胞培養(yǎng)原理2）、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體3）、為何要進(jìn)行兩次篩選？4）、如何進(jìn)行第2次篩選？培養(yǎng)在多1、作為診斷試劑：在臨床生化診斷、病理組織定位、體內(nèi)腫瘤的定位等,與常規(guī)抗體相比,具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速特點(diǎn).2、用于治療疾病和運(yùn)載藥物：主要用于癌癥治療。生物導(dǎo)彈：抗癌細(xì)胞的單克隆抗體+放射性同位素+化學(xué)藥物或細(xì)胞毒素。（單克隆抗體：導(dǎo)向。準(zhǔn)確找到癌細(xì)胞位置，原位殺死癌細(xì)胞。）2、單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏度高，可大量制備。3、單克隆抗體的應(yīng)用1、作為診斷試劑：在臨床生化診斷、病理組織定位、體內(nèi)腫瘤的定例題1：1975年，英國劍橋大學(xué)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的科勒和米爾斯坦，把小鼠的淋巴細(xì)胞（脾細(xì)胞）和小鼠的骨髓瘤細(xì)胞融合起來，成為雜交瘤細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)在體外大量生產(chǎn)抗體的目的。實(shí)驗(yàn)過程如圖所示。(1)淋巴細(xì)胞能與骨髓瘤細(xì)胞融合成一個細(xì)胞，兩種細(xì)胞膜也能“融合”

在一起，說明細(xì)胞膜

。(2)單克隆抗體的準(zhǔn)確定義應(yīng)為()A．一類特殊抗體B．無性繁殖系

C．單一抗體細(xì)胞的無性繁殖第產(chǎn)生的抗體

D．單一抗體細(xì)胞的有性繁殖系產(chǎn)生的抗體(3)雜交瘤細(xì)胞繁殖進(jìn)行的是_______分裂，其遺傳性狀__________。(4)單克隆抗體注入體內(nèi)后可以自動追蹤抗原(病原體或癌變細(xì)胞等)并與之結(jié)合，而絕不攻擊任何正常細(xì)胞，故稱為“生物導(dǎo)彈”這是利用了

_____________

。具有一定的流動性C有絲不變抗體能與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的特點(diǎn)例題1：(1)淋巴細(xì)胞能與骨髓瘤細(xì)胞融合成一個細(xì)胞，兩種細(xì)胞[例題2]（1）在用動物細(xì)胞融合技術(shù)制備單克隆抗體時，將抗原注射到小鼠體內(nèi)，可獲得(多選)

（）

A．T淋巴細(xì)胞B．效應(yīng)B淋巴細(xì)胞

C．抗體D．記憶細(xì)胞（2）下列關(guān)于單克隆抗體的制備和應(yīng)用的敘述中，正確的是(多選)（）

A．B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合，一般需要滅活的仙臺病毒或聚乙二醇誘導(dǎo)

B．融合后形成的雜交瘤細(xì)胞既能無限增殖，又能產(chǎn)生單克隆抗體

C．體外培養(yǎng)時，一個B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生一種抗體，但不能無限增殖

D．單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，特異性強(qiáng)，靈敏度高，優(yōu)越性明顯

BCD

ACD[例題2]BCDACD例2、已知細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基喋呤阻斷。人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤細(xì)胞中盡管沒有S途徑，但能不斷分裂增殖，將這兩種細(xì)胞在試管中混合，加聚乙二醇促融，獲得雜種細(xì)胞。請回答：（1）試管中除融合的雜種細(xì)胞外，還有

種融合細(xì)胞。（2）設(shè)計(jì)一方法（不考慮機(jī)械方法），從培養(yǎng)液中分離出雜種細(xì)胞，并說原理。方法：

。原理：培養(yǎng)液中加入氨基喋呤，收集增殖的細(xì)胞加入氨基喋呤后,使D合成的途徑阻斷,所以僅D合成途徑的骨髓瘤細(xì)胞或彼此融合的細(xì)胞就不能增殖,但雜種細(xì)胞則可以利用淋巴細(xì)胞中的S途徑合成DNA而增殖例2、已知細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC

下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌單克隆抗體的實(shí)驗(yàn)方案3、圖中B為________過程，常用_________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是__________2、A是從小鼠的脾臟中取得_______,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生______4、C過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括_____培養(yǎng)和_____培養(yǎng)兩個階段，其中_____代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。制備單克隆抗體B細(xì)胞抗體細(xì)胞融合滅活病毒雙親細(xì)胞分泌抗體無限增殖原代傳代50例3：B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到AC1.動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是：（）

A．動物細(xì)胞融合

B．胚胎移植

C．動物細(xì)胞培養(yǎng)

D．核移植Ｃ課堂練習(xí);1.動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是：（）Ｃ課堂練習(xí);２．在動物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（）A．結(jié)果是相同的

B．雜種細(xì)胞的形成過程基本相同C．操作過程中酶的作用相同D．誘導(dǎo)融合的手段相同Ｂ２．在動物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（）３.單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（）①淋巴細(xì)胞②小鼠骨髓瘤細(xì)胞③B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞④小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞⑤雜交瘤細(xì)胞A．②④B．①③⑤C．①②③④D．②③C３.單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞C《一-免疫應(yīng)答》課件(陜西省縣級優(yōu)課)《一-免疫應(yīng)答》課件(陜西省縣級優(yōu)課)《一-免疫應(yīng)答》課件(陜西省縣級優(yōu)課)《一-免疫應(yīng)答》課件(陜西省縣級優(yōu)課)《一-免疫應(yīng)答》課件(陜西省縣級優(yōu)課)解析解析返回返回《一-免疫應(yīng)答》課件(陜西省縣級優(yōu)課)《一-免疫應(yīng)答》課件(陜西省縣級優(yōu)課)《一-免疫應(yīng)答》課件(陜西省縣級優(yōu)課)《一-免疫應(yīng)答》課件(陜西省縣級優(yōu)課)《一-免疫應(yīng)答》課件(陜西省縣級優(yōu)課)《一-免疫應(yīng)答》課件(陜西省縣級優(yōu)課)《一-免疫應(yīng)答》課件(陜西省縣級優(yōu)課)解析解析返回返回《一-免疫應(yīng)答》課件(陜西省縣級優(yōu)課)解析解析返回返回《一-免疫應(yīng)答》課件(陜西省縣級優(yōu)課)《一-免疫應(yīng)答》課件(陜西省縣級優(yōu)課)解析解析返回返回《一-免疫應(yīng)答》課件(陜西省縣級優(yōu)課)解析解析返回返回人們獲得抗體的傳統(tǒng)方法是?將抗原注入動物體,然后從動物血清中提取抗體這種方法的缺點(diǎn)是什么?效率低，產(chǎn)量有限，純度低，動物抗體注入人體可能產(chǎn)生嚴(yán)重的過敏反應(yīng)。運(yùn)用已學(xué)知識，設(shè)想怎樣獲得單一類型的抗體？能否用單個B淋巴細(xì)胞通過克隆形成的細(xì)胞群來產(chǎn)生單一類型的抗體呢？B淋巴細(xì)胞在體外不能無限增殖。二：動物細(xì)胞融合的成功應(yīng)用

——單克隆抗體的制備人們獲得抗體的傳統(tǒng)方法是?二：動物細(xì)胞融合的成功應(yīng)用單克隆抗體的制備—極富創(chuàng)造性的方案將能夠產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞和具有無限增殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合在一起，形成雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞既能在體外快速生長，又能持續(xù)分泌成分單一的特異性抗體。這種單一類型的只針對某一特定抗原決定簇的抗體分子，就是單克隆抗體。米爾斯坦(阿根廷)和科勒(德國)因此在1984年獲諾貝爾獎。單克隆抗體的制備—極富創(chuàng)造性的方案雜交細(xì)胞滅活的病毒等手段小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞經(jīng)免疫的小鼠提取雜交瘤細(xì)胞第一次篩選用特定的選擇性培養(yǎng)基第二次篩選能產(chǎn)生特定抗體、培養(yǎng)條件下能無限增殖的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔提取單克隆抗體雜交細(xì)胞滅活的病毒等手段小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞經(jīng)免疫的小單抗的制備過程要點(diǎn)：分離B淋巴細(xì)胞（B）；找到骨髓瘤細(xì)胞（G）。注意B淋巴細(xì)胞是一個系列。（B1,B2,B3,---Bn）細(xì)胞融合——三種融合方式:（BB;BG;GG）第一次篩選：在“選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)”上培養(yǎng)篩選雜交瘤細(xì)胞（只有BG雜交瘤細(xì)胞存活。但BG雜交瘤細(xì)胞也是一個系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在動物特異性免疫此培養(yǎng)基上不能存活。）單抗的制備過程要點(diǎn)：5.第二次篩選：在“多孔培養(yǎng)板上”培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞系列

，每孔只放一個雜交瘤細(xì)胞。“克隆化培養(yǎng)”每個雜交瘤細(xì)胞，并進(jìn)行“單一抗體檢測”，“檢測陽性”的孔內(nèi)即是所需要的雜交瘤細(xì)胞。6.選擇所需要的雜交瘤克隆細(xì)胞群，體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。7.提取單克隆抗體。5.第二次篩選：在“多孔培養(yǎng)板上”培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞系列，每孔3）、為何要進(jìn)行兩次篩選？4）、如何進(jìn)行第2次篩選？培養(yǎng)在多孔培養(yǎng)板上，每孔只有一個雜交瘤細(xì)胞。第1次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（多種）。第2次篩選得到能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞群。問題強(qiáng)化：1）、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細(xì)胞融合原理和動物細(xì)胞培養(yǎng)原理2）、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體3）、為何要進(jìn)行兩次篩選？4）、如何進(jìn)行第2次篩選？培養(yǎng)在多1、作為診斷試劑：在臨床生化診斷、病理組織定位、體內(nèi)腫瘤的定位等,與常規(guī)抗體相比,具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速特點(diǎn).2、用于治療疾病和運(yùn)載藥物：主要用于癌癥治療。生物導(dǎo)彈：抗癌細(xì)胞的單克隆抗體+放射性同位素+化學(xué)藥物或細(xì)胞毒素。（單克隆抗體：導(dǎo)向。準(zhǔn)確找到癌細(xì)胞位置，原位殺死癌細(xì)胞。）2、單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏度高，可大量制備。3、單克隆抗體的應(yīng)用1、作為診斷試劑：在臨床生化診斷、病理組織定位、體內(nèi)腫瘤的定例題1：1975年，英國劍橋大學(xué)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的科勒和米爾斯坦，把小鼠的淋巴細(xì)胞（脾細(xì)胞）和小鼠的骨髓瘤細(xì)胞融合起來，成為雜交瘤細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)在體外大量生產(chǎn)抗體的目的。實(shí)驗(yàn)過程如圖所示。(1)淋巴細(xì)胞能與骨髓瘤細(xì)胞融合成一個細(xì)胞，兩種細(xì)胞膜也能“融合”

在一起，說明細(xì)胞膜

。(2)單克隆抗體的準(zhǔn)確定義應(yīng)為()A．一類特殊抗體B．無性繁殖系

C．單一抗體細(xì)胞的無性繁殖第產(chǎn)生的抗體

D．單一抗體細(xì)胞的有性繁殖系產(chǎn)生的抗體(3)雜交瘤細(xì)胞繁殖進(jìn)行的是_______分裂，其遺傳性狀__________。(4)單克隆抗體注入體內(nèi)后可以自動追蹤抗原(病原體或癌變細(xì)胞等)并與之結(jié)合，而絕不攻擊任何正常細(xì)胞，故稱為“生物導(dǎo)彈”這是利用了

_____________

。具有一定的流動性C有絲不變抗體能與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的特點(diǎn)例題1：(1)淋巴細(xì)胞能與骨髓瘤細(xì)胞融合成一個細(xì)胞，兩種細(xì)胞[例題2]（1）在用動物細(xì)胞融合技術(shù)制備單克隆抗體時，將抗原注射到小鼠體內(nèi)，可獲得(多選)

（）

A．T淋巴細(xì)胞B．效應(yīng)B淋巴細(xì)胞

C．抗體D．記憶細(xì)胞（2）下列關(guān)于單克隆抗體的制備和應(yīng)用的敘述中，正確的是(多選)（）

A．B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合，一般需要滅活的仙臺病毒或聚乙二醇誘導(dǎo)

B．融合后形成的雜交瘤細(xì)胞既能無限增殖，又能產(chǎn)生單克隆抗體

C．體外培養(yǎng)時，一個B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生一種抗體，但不能無限增殖

D．單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，特異性強(qiáng)，靈敏度高，優(yōu)越性明顯

BCD

ACD[例題2]BCDACD例2、已知細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基喋呤阻斷。人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤細(xì)胞中盡管沒有S途徑，但能不斷分裂增殖，將這兩種細(xì)胞在試管中混合，加聚乙二醇促融，獲得雜種細(xì)胞。請回答：（1）試管中除融合的雜種細(xì)胞外，還有

種融合細(xì)胞。（2）設(shè)計(jì)一方法（不考慮機(jī)械方法），從培養(yǎng)液中分離出雜種細(xì)胞，并說原理。方法：

。原理：培養(yǎng)液中加入氨基喋呤，收集增殖的細(xì)胞加入氨基喋呤后,使D合成的途徑阻斷,所以僅D合成途徑的骨髓瘤細(xì)胞或彼此融合的細(xì)胞就不能增殖,但雜種細(xì)胞則可以利用淋巴細(xì)胞中的S途徑合成DNA而增殖例2、已知細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的