動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)-完整版課件

動(dòng)物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)核移植動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體技術(shù)其中，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是其他技術(shù)的基礎(chǔ)回顧：植物細(xì)胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物組織培養(yǎng),植物體細(xì)胞雜交閱讀P44-46，思考：1.什么是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)？2.怎樣將組織塊分散成單個(gè)細(xì)胞？3.培養(yǎng)中出現(xiàn)了什么現(xiàn)象？怎么解除這種現(xiàn)象？4.培養(yǎng)過程分幾個(gè)階段？5.培養(yǎng)條件有哪些？一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)概念：從動(dòng)物有機(jī)體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個(gè)細(xì)胞,然后放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。在培養(yǎng)瓶懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁?！雠囵B(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿壁要求：細(xì)胞貼壁：表面光滑、易于帖附

當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖—細(xì)胞出現(xiàn)接觸抑制。

由于遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，可無限增殖，并失去了接觸抑制——腫瘤細(xì)胞。接觸抑制：

胚胎或幼齡動(dòng)物器官和組織剪碎組織胰蛋白酶處理細(xì)胞培養(yǎng)單個(gè)細(xì)胞2.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過程原因：它們的細(xì)胞分化程度低，增殖能力很強(qiáng)，易于培養(yǎng)細(xì)胞懸浮液細(xì)胞貼滿瓶壁（大約10代）50代細(xì)胞原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)原代培養(yǎng):傳代培養(yǎng):將動(dòng)物組織經(jīng)胰蛋白酶等處理后的初次培養(yǎng)對(duì)貼滿瓶壁的細(xì)胞用胰蛋白酶處理，然后再分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。3.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件⑴無菌、無毒的環(huán)境培養(yǎng)液、用具無菌處理；培養(yǎng)液中加抗生素；定期更換培養(yǎng)液（防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞的毒害)⑵充足的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)培養(yǎng)液的成分：

葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、動(dòng)物血清⑶適宜的溫度和pH哺乳動(dòng)物：T:36.5±0.5℃pH:7.2~7.4⑷氣體環(huán)境（95%O2+5%CO2）O2：保證有氧呼吸等細(xì)胞代謝的正常進(jìn)行CO2:維持培養(yǎng)液的pH用胃蛋白酶代替胰蛋白酶分散細(xì)胞行嗎？4.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用（1）獲得蛋白質(zhì)生物制品：?jiǎn)慰寺】贵w、疫苗、干擾素（2）用于植皮、器官移植（3）基因工程受體細(xì)胞培養(yǎng)（4）用于檢測(cè)有毒的物質(zhì)（5）用于生理、病理、藥理等

方面的研究細(xì)胞的全能性大量細(xì)胞主要是植物體培養(yǎng)結(jié)果動(dòng)物血清植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目某牧場(chǎng)從荷蘭進(jìn)口了一頭產(chǎn)奶量高、但價(jià)格特別高昂的奶牛。若想在該牧場(chǎng)獲得高產(chǎn)后代，提高該農(nóng)場(chǎng)的牛奶收益，該怎么辦？請(qǐng)根據(jù)你所了解的知識(shí)用簡(jiǎn)圖畫出理論上克隆高產(chǎn)奶牛的過程：卵細(xì)胞普通奶牛高產(chǎn)奶牛乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核移植早期胚胎普通奶牛子宮子代高產(chǎn)奶牛分娩妊娠重組細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物1.動(dòng)物核移植的定義動(dòng)物核移植是將一個(gè)動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)去核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體。用核移植的方法得到的動(dòng)物稱為克隆動(dòng)物我國(guó)首批自主體細(xì)胞克隆牛（2001年）懷孕

這5頭出生在山東的克隆牛于2003年8月通過人工授精成功受孕，2004年4月中旬產(chǎn)子。這是我國(guó)自主完成的本土體細(xì)胞“克隆?！笔状瓮ㄟ^有性方式懷孕。

2、核移植的種類胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植細(xì)胞分化程度恢復(fù)全能性分化程度低分化程度高相對(duì)容易十分困難3、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)的過程細(xì)胞培養(yǎng)重組細(xì)胞去核供體思考：（1）為何體細(xì)胞核移植過程中要選用去核卵母細(xì)胞？（2）體細(xì)胞核移植之前，為什么要先去掉受體卵母

細(xì)胞的核？（3）供體細(xì)胞為什么一般選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞？（4）細(xì)胞核移植生產(chǎn)的克隆動(dòng)物是對(duì)體細(xì)胞供體動(dòng)

物進(jìn)行了100%復(fù)制嗎？為什么？

卵母細(xì)胞能提供細(xì)胞核表達(dá)所需要的物質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)條件；且卵母細(xì)胞個(gè)體大，易操作4.核移植等動(dòng)物克隆技術(shù)的應(yīng)用前景⑴快速繁殖優(yōu)良品種克隆技術(shù)可以完整保持種畜的優(yōu)良性狀，在短時(shí)間內(nèi)大量繁殖優(yōu)良種畜，并可定向培育母畜⑵拯救瀕臨滅絕的動(dòng)物2009年5月13日在新疆吐魯番火焰山下拍攝的瀕危物種長(zhǎng)耳跳鼠“沙漠米老鼠”北極熊被列為瀕危物種

⑶克隆轉(zhuǎn)基因動(dòng)物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白（治療疾?。?997年，第二只克隆羊Polly誕生，攜帶有人類的基因。乳液含有一種血凝結(jié)蛋白質(zhì)可以制造醫(yī)治血友病的藥物克隆羊之父——威爾穆特⑷培育人造器官進(jìn)行器官移植長(zhǎng)有人造耳朵的裸鼠5、體細(xì)胞核移植存在的問題（1）成活率低（2）存在健康問題（3）克隆動(dòng)物食品的安全性277次乳腺細(xì)胞核移植，獲得29個(gè)8細(xì)胞胚胎，植入13只代孕母親子宮，只有1只小羊出生2003年2月14日，患有進(jìn)行性肺病（羊的老年?。┒嗬粚?shí)施了“安樂死”。壽命不到7歲1978年，美國(guó)科幻小說家D.Rorvick的小說《ThecloningofMan》中國(guó)政府的態(tài)度：禁止生殖性克隆人！