藥敏試驗PPT資料

藥敏試驗(shìyàn)MIC：在與微生物生長速率有關(guān)的特定時間間隔內(nèi)，通常是18－24小時，能夠抑制被測菌生長的最低藥物濃度。對倍稀釋的優(yōu)點：操作容易敏感(mǐngǎn)株的MIC呈正態(tài)分布區(qū)分異常(R)與敏感(S)的菌群第一頁，共五十三頁。藥敏試驗(shìyàn)折點的建立1.MIC的分布 2.藥代動力學和藥效學 定MIC的折點3.臨床療效和細菌去除率4.抑菌圈直徑的分布…………定抑菌圈折點統(tǒng)計學的線性回歸(huíguī)計算錯誤率：盡可能減少極重要誤差(假敏感率)第二頁，共五十三頁。MIC的分布(fēnbù)第三頁，共五十三頁。藥代動力學和藥效學藥代動力學：藥物吸收，分布(fēnbù)，代謝，排泄藥效學：藥物對機體的作用時間依賴型〔％T>MIC〕：β－內(nèi)酰胺類，大環(huán)內(nèi)酯類濃度依賴型〔AUC/MIC比率〕：AGS,FQ這些參數(shù)可用于計算具有最正確藥效的給藥方案第四頁，共五十三頁。MIC與抑菌圈直徑(zhíjìng)的線性關(guān)系耐藥中介(zhōngjiè)敏感RISLog2.MICD1d2抑菌圈直徑(zhíjìng)〔mm)第五頁，共五十三頁。抑菌圈直徑(zhíjìng)與MIC的關(guān)系第六頁，共五十三頁。不同(bùtónɡ)國家的判定折點

－可能不同原因：用藥劑量不同，服藥的間隔不同評價敏感時較保守更強調(diào)檢測(jiǎncè)出耐藥株〔即特定的耐藥群〕技術(shù)因素：接種、培養(yǎng)基第七頁，共五十三頁。敏感性分類(fēnlèi)(NCCLS的定義)敏感〔Susceptible〕用常規(guī)用量治療有效常規(guī)用藥時到達的平均血藥濃度超過(chāoguò)細菌的MIC5倍以上。耐藥〔Resistance〕用常規(guī)用量治療不能抑制細菌的生長MIC高于藥物在血、體液中可能到達的濃度第八頁，共五十三頁。敏感性分類(fēnlèi)〔2〕中介(Intermediate)MIC接近血、體液中藥物的濃度，治療反響率低于敏感(mǐngǎn)株藥物生理濃集部位有效(尿－FQ)加大用藥劑量可能有效緩沖區(qū)：防止操作的系統(tǒng)誤差造成重大結(jié)果的判定錯誤第九頁，共五十三頁。藥敏試驗(shìyàn)的方法學半定量…紙片擴散法(抑菌圈直徑(zhíjìng))MIC法：稀釋法(肉湯、瓊脂)自動化儀法抗生素連續(xù)梯度法(Etest)流式細胞儀第十頁，共五十三頁。藥敏試驗方法(fāngfǎ)的選擇紙片法有獨特(dútè)之處選藥靈活、廉價、易懂MIC法：商品肉湯法(自動化法)↑可用于厭氧菌、苛氧菌計算機管理快速，但可能有錯誤〔如誘導型菌〕新藥的評價第十一頁，共五十三頁。藥敏試驗(shìyàn)方法1〔紙片擴散法〕材料：浸有一定Abs的枯燥的園濾紙片步驟：制備菌懸液－涂平板－貼紙片－孵育－卡尺測量抑菌圈直徑－判定R、I、S優(yōu)點：選藥靈活、廉價(biànyí)、一個平皿可測多個藥缺點：影響因素多適用于快生長菌、局部苛養(yǎng)菌第十二頁，共五十三頁。紙片擴散(kuòsàn)法－影響因素MIC接種菌量細菌生長率抗生素含量、擴散性平皿厚度溫度，預孵育(fūyù)時間第十三頁，共五十三頁。紙片擴散(kuòsàn)法－標準化NCCLS：美國實驗室標準化委員會(NationalCommitteeforClinicalLaboratoryStandards)每年修訂(xiūdìng)更改包括質(zhì)控新藥的判定標準特殊耐藥性的檢測第十四頁，共五十三頁。NCCLS的法規(guī)(fǎguī)規(guī)定紙片含量、接種濃度、培養(yǎng)基、平皿厚度、判定標準(biāozhǔn)、質(zhì)控規(guī)定常規(guī)測試報告的抗生素不同的藥判定標準不同不同的菌判定標準也不同第十五頁，共五十三頁。常規(guī)測試并報告(bàogào)的藥物分組(1)

腸桿菌(gǎnjūn)科

綠膿和非腸桿菌科一級氨芐 頭孢他啶唑林，慶大 慶大，替卡，哌拉二級阿米卡星 阿米卡星氨芐/舒，阿莫/克 吡肟，哌酮，氨曲南頭孢膚肟，頭霉 環(huán)丙，亞胺培南，替卡/克噻肟，曲松，環(huán)丙 妥布，磺胺亞胺培南，替卡，哌拉三級氨曲南，頭孢他啶 頭孢曲松卡那，奈替，妥布 氯霉素，奈替四環(huán)素，氯霉素 第十六頁，共五十三頁。常規(guī)測試并報告(bàogào)的藥物分組(2)

葡萄球菌(pútáoqiújūn)

腸球菌一級苯唑，青霉素 青霉素，氨芐二級紅霉素類 萬古霉素克林，萬古三級氯霉素 慶大第十七頁，共五十三頁。常規(guī)測試并報告(bàogào)的藥物分組(3)

流感(liúɡǎn)嗜血桿菌

肺炎鏈球菌一級氨芐，青霉素 青霉素，紅霉素TMP/SMZTMP/SMZ二級頭孢膚肟，噻肟 氧氟，四環(huán)素他啶，氯霉素萬古霉素三級阿奇，頭孢克羅 氯霉素，利福平環(huán)丙，亞胺培南 利福平，四環(huán)素第十八頁，共五十三頁。預報(yùbào)用藥(一)測試藥 菌名 推測其它藥物的敏感性苯唑西林 葡萄球菌 所有β－內(nèi)酰胺類四環(huán)素 所有〔除葡 多西環(huán)素，米諾環(huán)素 萄球菌(qiújūn)和不 動桿菌〕紅霉素 G＋球菌 羅紅，克拉，阿奇克林霉素 所有 林可霉素第十九頁，共五十三頁。預報(yùbào)用藥(二)測試藥 菌名 推測其它藥物的敏感性氨芐西林 腸球菌 青霉素青霉素G 葡萄球菌(pútáoqiújūn) 氨芐，美洛，替卡頭孢噻吩 腸桿菌科 拉定，頭孢氨芐，克羅奈啶酸s

腸桿菌科 所有FQs萬古霉素s

所有 替考拉寧s第二十頁，共五十三頁。紙片擴散(kuòsàn)法操作規(guī)程(一)培養(yǎng)基：MH(重復性好，低抑制劑，營養(yǎng)(yíngyǎng)好)厚度：4mmPH：7.2~7.4pH低時，氨基糖甙,大環(huán)內(nèi)酯↓pH高時，青霉素類的活性↑離子濃度(Ca2+,Mg2+)影響氨基糖甙類、四環(huán)素對Pae活性高時，抑菌圈↓；第二十一頁，共五十三頁。紙片擴散(kuòsàn)法操作規(guī)程(二)接種：純的新鮮(xīnxiān)菌落，0.5號麥氏比濁管菌懸液在15分鐘內(nèi)種入平皿內(nèi)紙片中心的間距>=24mm孵育：CO2影響Ags,Tet,Macrolides質(zhì)控:

ATCC25922,35218ATCC27853,ATCC25923第二十二頁，共五十三頁。紙片擴散法結(jié)果(jiēguǒ)的判定1.先看菌名〔鑒定到種〕2.不同的藥物(yàowù)使用不同的折點藥名 菌名 R S 菌株1 菌株2Pip/Taz 綠膿 ≤17 ≥18 16R 30SCAZ 綠膿 ≤14 ≥18 16I 19S3.同是S時，偏離敏感折點越高的藥,

MIC越低，活性也越高第二十三頁，共五十三頁。抑菌圈的分布(fēnbù)第二十四頁，共五十三頁。抑菌圈的分布(fēnbù)第二十五頁，共五十三頁。非NCCLS系統(tǒng)的擴散(kuòsàn)試驗方法 國家 學會 培養(yǎng)基 評論比較法 UK BSAC Iso-Sensitest 不校正MICsStokes UK BSAC Iso-Sensitest 不校正MICsSFM 法國 SFM MH 與NCCLS相近DIN 德國 DIN MH 與NCCLS相近SIR 瑞典 SMS PDM－ASM MIC相關(guān)值低Neo-sensitabs丹麥、比利時 MH 藥片，易保存(bǎocún)雙歧 澳大利亞 Sensitest 無中介第二十六頁，共五十三頁。藥敏試驗的錯誤(cuòwù)來源(一)每個系統(tǒng)特有的局限性〔快生長菌〕培養(yǎng)基〔成分、厚度、pH、離子濃度〕各種材料的正確(zhèngquè)保存(紙片－20℃)操作步驟純菌、35℃、16－28h葡萄球菌、腸球菌24h第二十七頁，共五十三頁。藥敏試驗的錯誤(cuòwù)來源(二)體內(nèi)、體外試驗的不一致性某些菌測某些藥，結(jié)果有誤頭孢菌素(tóubāojūnsù)、氨基糖甙類：沙門菌、志賀菌頭孢菌素：李斯特菌屬頭孢菌素、氨基糖、克林、TMP/SMZ：腸球菌Beta－內(nèi)酰胺類：MRS即使敏感，也應(yīng)報告耐藥第二十八頁，共五十三頁。問題(wèntí)菌和耐藥機制有些菌無標準化的藥敏試驗棒桿菌(gǎnjūn)、芽胞桿菌(gǎnjūn)、氣單胞菌、巴斯德菌某些耐藥機制需要多種檢測方法誘導型：VanB,BushI型酶MRS的異質(zhì)型表達ESBL藥敏可能無法檢出新出現(xiàn)的耐藥，VISA第二十九頁，共五十三頁。藥敏試驗方法(fāngfǎ)2－肉湯稀釋法4 8 16 32 64128256ug/ml混

混清抗生素倍比稀釋，種菌105CFU/ml，孵育(fūyù)35℃，16-20h，判讀第三十頁，共五十三頁。藥敏試驗方法(fāngfǎ)2－肉湯稀釋法調(diào)節(jié)離子濃度的MH肉湯宏量(hónɡliànɡ)肉湯法〔2ml,13x100mm〕 微量肉湯法〔0.1ml,微量板〕自動化儀優(yōu)點：準確，可靠，可用于研究缺點：勞動強度大細菌生長情況不可查第三十一頁，共五十三頁。藥敏試驗(shìyàn)方法3－瓊脂稀釋法

濃度(nóngdù)

16 32 64128256ug/ml制備含對倍抗生素濃度梯度的平板，制備菌懸液，點種(diǎnzhǒng)菌，104/每個點，孵育，判讀結(jié)果第三十二頁，共五十三頁。藥敏試驗方法(fāngfǎ)3－瓊脂稀釋法優(yōu)點：金標準精確可靠可同時測定多株菌〔40株〕細菌生長(shēngzhǎng)情況可查缺點：測多個藥時勞動強度大制備平皿費時費力第三十三頁，共五十三頁。藥敏試驗(shìyàn)方法4－Etest法

細菌(xìjūn)生長區(qū)Etest塑料(sùliào)條橢圓形細菌生長抑制區(qū)2561288016判讀抑菌濃度〔MICug/ml)第三十四頁，共五十三頁。藥敏試驗(shìyàn)方法4－Etest法優(yōu)點連續(xù)濃度梯度，與瓊脂稀釋法相關(guān)性好影響因素少，穩(wěn)定性高操作簡單，省時缺點：昂貴(ángguì)用途：快生長菌，苛養(yǎng)菌，厭氧菌，酵母菌， 分枝桿菌第三十五頁，共五十三頁。評價(píngjià)藥物體外抗菌活性的指標MIC50,MIC90,MIC均值，MIC范圍，R，I，SMIC50/MIC90：MIC從小到排列，位于第50/90百分位菌株的MIC值單純比較MIC50，MIC90是片面(piànmiàn)的，還要同時看平均MIC及MIC范圍同時結(jié)合R，I，S，〔不同藥物血濃度不同，平安范圍不同〕第三十六頁，共五十三頁?？股丶毦梭wRESISTANCEPHARMACODYNAMICSINFECTIONIMMUNITYSIDEEFFECTSPHARMACOKINETICS抗生素、細菌(xìjūn)、人體第三十七頁，共五十三頁。第三十八頁，共五十三頁。TimeaboveMIC

CorrelationofserumpharmacokineticswithMIC(susceptibility)

ofanorganism

TimeaboveMICTimeAntibioticconcentration(ug/ml)2DrugADrugBABDrugApresentatconcentrationof2ug/mlfor50%ofdosingintervalDrugBpresentatconcentrationof2ug/mlfor30%ofdosinginterval4680第三十九頁，共五十三頁。39*RelationshipbetweenTimeaboveMICand

efficacyinanimalinfectionmodels020406080100020406080100TimeaboveMIC(%)PenicillinsCephalosporinsMortalityafter4daysoftherapy(%)Craig.DiagnMicrobiolInfectDis1996;25:213–217第四十頁，共五十三頁。Antibiotic

concentrationMIC

TimeAreaunderthecurveoverMIC24-hrAUC/MICiscorrelatedwithoutcomeofinfection,themagnituderequiredforsuccessandMICatwhichthisoccursbecomesthePDbreakpoint

24-hrAUC/MIC

CorrelationofserumpharmacokineticswithMIC(susceptibility)

ofanorganism

第四十一頁，共五十三頁。41*Therelationshipbetween‘timeaboveMIC90’andbacteriologicalcureinS.pneumoniae(red)and

H.influenzae(blue)inotitismediaandsinusitisOtitismediaSinusitis‘TimeAboveMIC’(%ofdosinginterval)Bacteriologicalcure(%)020406080100020406080100Craig,ECCMID2000,Stockholm,Sweden第四十二頁，共五十三頁。42*抗生素選擇時需考慮(kǎolǜ)的因素藥物(yàowù)感染部位(bùwèi)濃度對細菌MIC結(jié)果微生物學抗菌機制抗菌譜藥代動力學吸收、分布、代謝、排泄給藥方案藥效學時間/濃度依賴型殺菌劑/抑菌劑組織滲透抗菌時效臨床效果細菌去除患者依從性耐受性耐藥產(chǎn)生第四十三頁，共五十三頁?？股刂委?zhìliáo)失敗的主要原因病人相關(guān)原因依從性差不適當給藥途徑免疫抑制病灶藥物原因給藥劑量與方式不當藥效學考慮欠妥藥物失活微生物相關(guān)的原因病原確立錯誤治療中出現(xiàn)耐藥抗菌活性不足接種效應(yīng)其他原因非感染（誤診）基礎(chǔ)疾病第四十四頁，共五十三頁?？股厮幮W與藥代動力學關(guān)系(guānxì)研究

PK/PD—藥代條件(tiáojiàn)下的藥效

PARAMETERS：PK：Cmax、AUC、T1/2

PD：MIC

PK/PD：AUC/MICCmax/MICT>MIC第四十五頁，共五十三頁?？股厮幮W與藥代動力學關(guān)系(guānxì)研究

抗生素PK/PD分類(fēnlèi)抗生素分類PK/PD參數(shù)藥物時間依賴型（短PAE）T>MIC青霉素類、頭孢菌素類、氨曲南、碳青霉烯類、大環(huán)內(nèi)酯類、克林霉素、惡唑烷酮類、氟胞嘧啶時間依賴型（長PAE）AUC24/MIC鏈陽霉素、四環(huán)素、萬古霉素、替考拉林、氟康唑、阿齊霉素濃度依賴型AUC24/MICorCmax/MIC氨基糖苷類、氟喹諾酮類、daptomycin、酮內(nèi)酯、甲硝唑、兩性霉素B第四十六頁，共五十三頁?？股厮幮W與藥代動力學關(guān)系(guānxì)研究

PK/PD研究(yánjiū)的應(yīng)用—給藥方案的制定與優(yōu)化第四十七頁，共五十三頁。抗菌藥物合理(hélǐ)應(yīng)用的藥理學考慮藥動學/藥效學參數(shù)(cānshù)與抗菌效力〔動物模型〕參數(shù)(cānshù)