胃癌標(biāo)本的正確固定許課件

胃癌標(biāo)本的正確固定許斌主要內(nèi)容標(biāo)本及時(shí)固定對(duì)生物標(biāo)志物檢測(cè)的重要性胃癌手術(shù)標(biāo)本固定的實(shí)踐問(wèn)題主要內(nèi)容標(biāo)本及時(shí)固定對(duì)生物標(biāo)志物檢測(cè)的重要性胃癌手術(shù)標(biāo)本固定的實(shí)踐問(wèn)題固定目的1、保持組織形態(tài)學(xué)特征清晰和穩(wěn)定2、阻止組織、細(xì)胞自溶與腐敗3、凝固或沉淀組織細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)4、保存組織細(xì)胞抗原性5、使組織保持一定的硬度和彈性KhouryT,etal.ModPathol2009;22:1457-1467.延遲固定導(dǎo)致激素受體染色減弱固定延遲時(shí)間01234567平均Q值0min10min30min1h2h4h8hERPRER、PR的平均Q值隨固定延遲時(shí)間的增加而下降ER染色減弱的標(biāo)本比例(n=58)(n=39)離體至固定時(shí)間P=0.03LiXX,etal.ModPathol2013;26,71-78.延遲固定導(dǎo)致激素受體染色減弱延遲2h以上時(shí)間固定，出現(xiàn)染色減弱的比例升高+，無(wú)減弱；任一字母代表減弱，A：因細(xì)胞輪廓模糊，B：因非一致性信號(hào)；C：因核分辨不清病例編號(hào)0min10min30min1h2h4h8h過(guò)夜總的熒光減弱例數(shù)1++++A,CCA,CA,C42++++A,B,CA,B,CA,B,CA,B,C43+++++CCC34+++CCCCC55+++CB,CB,CB,CB,C56+++++CCC37++++A,BA,BA,BA,B48+++A,BA,BA,BA,BA,B59++++++++010++++++A,BA,B2總的熒光減弱例數(shù)+++3689935HER2熒光原位雜交檢測(cè)結(jié)果與固定延遲時(shí)間的關(guān)系KhouryT,etal.ModPathol2009;22:1457-1467.延遲固定導(dǎo)致HER2染色改變延遲1h之后，F(xiàn)ISH染色開(kāi)始減弱；2h之后，統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異(P<0.05)0min10min30min1h2h4h8hONE-cadherin230230230230208204204204EGFR202020203311與延遲固定時(shí)間相關(guān)的膜標(biāo)志物的表達(dá)(中位值)ON：過(guò)夜延遲固定導(dǎo)致EGFR和E-cadherin表達(dá)改變KhouryT,etal.ApplImmunohistochemMolMorphol2012;20:531-542.EGFR和E-cadherin表達(dá)水平自延遲固定2h起開(kāi)始下降延遲固定時(shí)間190195200205210215220225230235ON8h4h2h1H30min10min0scoreE-cadherin染色評(píng)分隨延遲固定時(shí)間的變化手術(shù)切除標(biāo)本的有絲分裂象較活檢標(biāo)本平均高出3倍多(20±6vs6±2有絲分裂/10個(gè)高倍視野,P=0.008)；而兩者間MIB-1免疫染色的腫瘤細(xì)胞比例則相當(dāng)有絲分裂象計(jì)數(shù)采用MIB-1免疫組化檢測(cè)評(píng)估乳腺癌的增殖指數(shù)活檢標(biāo)本手術(shù)切除標(biāo)本有絲分裂/10HPF活檢標(biāo)本手術(shù)切除標(biāo)本MIB-1(占腫瘤細(xì)胞的比例)LehrHA,etal.ModernPathology2012:1-7.延遲固定導(dǎo)致腫瘤生物學(xué)特點(diǎn)改變手術(shù)切除標(biāo)本有絲分裂象增加源自固定延遲：活檢標(biāo)本自離體至固定的時(shí)間為15~30min，而手術(shù)切除標(biāo)本則需數(shù)個(gè)小時(shí)手術(shù)標(biāo)本及時(shí)固定的時(shí)間SEOM/SEAP胃癌HER2檢測(cè)共識(shí)1手術(shù)標(biāo)本應(yīng)在切除后30min內(nèi)固定中國(guó)胃癌HER2檢測(cè)指南2規(guī)范的標(biāo)本固定是HER2檢測(cè)質(zhì)量的保障，能使組織形態(tài)保存良好，防止細(xì)胞內(nèi)蛋白和核酸的降解所有標(biāo)本應(yīng)在離體后20~30min內(nèi)進(jìn)行標(biāo)記、切開(kāi)、固定等初步處理WernerM,etal3

標(biāo)本應(yīng)在手術(shù)切除后30min內(nèi)盡快地固定，器官和實(shí)體瘤應(yīng)予以切開(kāi)以確保固定液快速滲透1.Gómez-MartínC,etal.ClinTranslOncol2011;13:636-651.2.《胃癌HER2檢測(cè)指南》編寫(xiě)組.ChinJPathol2011;40:553-557.3.WernerM,etal.AmJSurgPathol2000;24(7):1016-1019.SEOM/SEAP：西班牙內(nèi)科腫瘤學(xué)會(huì)和西班牙病理學(xué)家學(xué)會(huì)據(jù)報(bào)道約20％的進(jìn)展期胃癌有HER2過(guò)表達(dá)或擴(kuò)增。一項(xiàng)國(guó)際多中心隨機(jī)對(duì)照Ⅲ期臨床研究(TOGA試驗(yàn))的結(jié)果顯示，化療聯(lián)合針對(duì)HER2的曲妥珠單抗治療可顯著延長(zhǎng)進(jìn)展期胃癌患者的生存期，基于這一結(jié)果，2010年歐洲藥品管理局及美國(guó)食品和藥品管理局(FDA)先后批準(zhǔn)化療聯(lián)合使用曲妥珠單抗治療HER2陽(yáng)性胃及胃和食管交界處癌(以下統(tǒng)稱胃癌)患者?！段赴〩ER2檢測(cè)指南》準(zhǔn)確的胃癌HER2表達(dá)和基因擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果是進(jìn)展期胃癌HER2靶向治療患者篩選和療效預(yù)測(cè)的前提《胃癌HER2檢測(cè)指南》一、HER2檢測(cè)方法包括免疫組織化學(xué)染色(IHC)和原位雜交(inhibridization)技術(shù)，后者包括熒光原位雜交(FlSH)和雙色銀染原位雜交(DSISH)。FSH和DSISH兩種檢測(cè)方法符合率高。各有特點(diǎn)，其中DSISH是一種亮視野下檢測(cè)HER2基因擴(kuò)增的方法，易于觀察，被認(rèn)為更具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。本指南推薦IHC與FSH和DSISH相結(jié)合的檢測(cè)策略?！段赴〩ER2檢測(cè)指南》二、HER2檢測(cè)適宜范圍

有可能進(jìn)行曲妥珠單抗治療的進(jìn)展期胃癌有必要行準(zhǔn)確的HER2檢測(cè)?！段赴〩ER2檢測(cè)指南》《胃癌HER2檢測(cè)指南》對(duì)固定的要求免疫組化檢測(cè)固定較差示例：胃癌固定不完全會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性檢查結(jié)果細(xì)胞質(zhì)染色可能由于使用了不適當(dāng)?shù)墓潭ǚ绞綀D片由TargosMolecularPathology.提供30分鐘內(nèi)：應(yīng)當(dāng)完成什么？

應(yīng)當(dāng)由誰(shuí)完成？

需要的哪些材料？

組織處理不良示例未剪開(kāi)固定固定液比例不足組織處理規(guī)范示例釘于標(biāo)本板上供圖：紹興市人民醫(yī)院病理科組織處理規(guī)范示例供圖：紹興市人民醫(yī)院病理科組織處理規(guī)范示例浸泡于足量的固定液中供圖：紹興市人民醫(yī)院病理科30分鐘內(nèi)：應(yīng)當(dāng)完成什么？

應(yīng)當(dāng)由誰(shuí)完成？

需要的哪些材料？

應(yīng)當(dāng)根據(jù)醫(yī)院的實(shí)際情況，由手術(shù)室和病理科協(xié)商決定如標(biāo)本能于離體后30min內(nèi)送至病理科并完成處理，可以建議由病理科完成

如標(biāo)本不能于離體后30min內(nèi)送至病理科并完成處理，可以建議在手術(shù)室完成30分鐘內(nèi)：應(yīng)當(dāng)完成什么？

應(yīng)當(dāng)由誰(shuí)完成？

需要的哪些材料？

10%中性緩沖福爾馬林溶液即4%中性緩沖甲醛溶液中性（pH7.2–7.4）避免酸性環(huán)境對(duì)組織和抗原造成的破壞用自來(lái)水或純水配置的甲醛溶液，常見(jiàn)pH5–7，可能使分子標(biāo)志物檢測(cè)的陽(yáng)性率顯著降低，導(dǎo)致誤診緩沖體系：避免外界物質(zhì)（如胃酸等）造成固定液pH值顯著變化，進(jìn)而對(duì)組織和抗原造成的破壞容器其他如標(biāo)本板，大頭針，