幾種抗腫瘤篩選模型簡介課件

抗腫瘤藥物的幾種初篩模型2003/6/27于志斌前言

近年來,國內(nèi)外在海洋生物抗腫瘤活性物質(zhì)篩選和研究上已取得了初步的成果。NCI每年篩選的出3萬個新的抗腫瘤化合物這些化合物絕大多數(shù)具有獨特的化學(xué)結(jié)構(gòu)和明顯的抗癌、抗病毒作用,有以影響ＤＮＡ、ＲＮＡ、蛋白質(zhì)為主的,也有以干擾有絲分裂或誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信息分子的改變?yōu)橹鞯?。除了一些新的化合物，在一些老的化合物中也發(fā)現(xiàn)很多具有抗腫瘤的活性?；钚曰衔锏暮Y選關(guān)鍵問題之一在于選擇有效的活性篩選模型。本文對ＭＴＴ法、ＤＤＲＴ法、稻瘟霉法以及鐮刀菌等幾種篩選模型進(jìn)行簡單的介紹。MTT法ＭＴＴ法是一種檢測細(xì)胞生存和增殖狀態(tài)的方法,該方法以其簡單、快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點被用于細(xì)胞毒和淋巴因子生長抑制的定量檢測,尤其在腫瘤化療藥敏實驗中廣泛使用。其原理是ＭＴＴ可被活細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為藍(lán)色的甲基化合物,再經(jīng)適當(dāng)溶劑溶解后,其吸光度與活細(xì)胞數(shù)相關(guān),從而可作為檢測活細(xì)胞數(shù)的指標(biāo)。因此ＭＴＴ法可用于細(xì)胞毒活性物質(zhì)的篩選。DDRT法（differentDNArepairtest）試驗菌株343/591為賴氨酸和生物素營養(yǎng)缺陷型并具有發(fā)酵乳糖能力和DNA修復(fù)缺陷的菌種；343/636為不能發(fā)酵乳糖的脯氨酸營養(yǎng)缺陷型菌株并具有紫外線損傷和DNA修復(fù)能力。DDRT法是一種利用兩個菌株對DNA損傷修復(fù)的差異性建立的方法,可以用來檢測試驗物的DNA毒性。343/591為DNA修復(fù)缺陷菌株,而343/636菌株具有紫外線損傷和DNA修復(fù)能力,因而通過兩個菌株的修復(fù)能力不同可以檢測出受試物的DNA毒性。因而DDRT法可用于篩選得到作用于DNA的抗腫瘤活性菌株。DDRT法的步驟343/636和343/591菌株分別接種于含5ml蛋白胨-肉湯培養(yǎng)基中；在37℃振蕩培養(yǎng)16ｈ；用分光光度計測450ｎｍ處的343/591和343/636的ＯＤ值,用蛋白胨-肉湯培養(yǎng)基稀釋343/636菌液使其ＯＤ值與343/591相同；在100ml中性紅瓊脂培養(yǎng)基中加入1ml菌液后倒入平皿中靜置1ｈ；將所要測定的放線菌發(fā)酵液和受試物滴加在覆蓋于瓊脂培養(yǎng)基上直徑為8ｍｍ的濾紙片上；37℃培養(yǎng)24ｈ,以絲裂霉素為標(biāo)準(zhǔn)藥物對照,根據(jù)發(fā)酵液產(chǎn)生的抑菌圈大小的差異來判定其對ＤＮＡ造成損傷的大小及是否有抗腫瘤活性.稻瘟霉模型

近年來,人們發(fā)現(xiàn)大量的抗真菌和抗腫瘤化合物有明顯的致稻瘟霉菌絲彎曲作用或抑制發(fā)芽管生長作用,說明化合物使稻瘟霉分生孢子或菌絲形態(tài)生長異常(卷曲、膨脹、菌絲分枝過多或念珠狀等)或生長抑制與其抗真菌、抗腫瘤活性之間存在一定的相關(guān)性。因此,利用稻瘟霉這一模型篩選抗真菌、抗腫瘤活性菌株有一定的實驗依據(jù)。稻瘟霉為一種植物病原真菌,中間有2個橫隔為多細(xì)胞絲狀真菌,其個體比較大,形狀特殊,呈亞梨形,易于觀察;在沙氏培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)只需14～16ｈ,因此非常快速;用96孔平板進(jìn)行定量,操作程序簡單、易于掌握;菌種引進(jìn)后由自己傳代培養(yǎng),比較經(jīng)濟(jì);此外,用樣量少,重現(xiàn)性好,決定其作為初篩模型的優(yōu)越性。稻瘟霉活性篩選指標(biāo)抑制孢子芽萌發(fā),孢子基本保持原有狀態(tài)為抑制活性,用“×”表示（a）;孢子不萌發(fā)、萌發(fā)或菌絲生長,但形態(tài)發(fā)生嚴(yán)重變化,為強(qiáng)變形活性,用“+++”表示(b);孢子萌發(fā)或菌絲生長,但形態(tài)發(fā)生中等強(qiáng)度的變化,為中等變形活性,用“++”表示(c)。菌絲生長,但生長狀態(tài)異常,為弱變形活性,用“+”表示(d);菌絲正常生長為陰性,用“-”表示(e)。鐮刀菌篩選模型中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物生物技術(shù)國家重點實驗室在篩選抗鐮刀菌抗生素時發(fā)現(xiàn)鐮刀菌也可應(yīng)用于抗腫瘤、抗真菌活性物質(zhì)的篩選,為此他們建立了鐮刀菌篩選模型,應(yīng)用于海洋微生物抗腫瘤活性物質(zhì)的篩選。鐮刀菌活性篩選指標(biāo)與稻瘟霉指標(biāo)相同。鐮刀菌模型篩選步驟將鐮刀菌接種在土豆培養(yǎng)基上,28℃培養(yǎng)1～2周后,加入無菌水刮下孢子,搖勻過濾;以土豆液體培養(yǎng)基稀釋成1×104/ｍＬ孢子的孢子液,然后將50μＬ待篩樣品，分別加到96孔板,第1行各孔中(從第3列開始,第1、2