標(biāo)準(zhǔn) DB37T 3676-2019 種豬場偽狂犬病凈化技術(shù)規(guī)范規(guī)范

ICS?FORMTEXT65.020.30FORMTEXTB41FORMTEXT?????DBFORMTEXT37DBFORMTEXT37/T3676—2019FORMTEXT?????FORMTEXT種豬場偽狂犬病凈化技術(shù)規(guī)范FORMTEXTTechnicalRegulationofEradicationofPseudorabiesinSwineBreedingFarms2019-08-30發(fā)布2019-09-30實施FORMTEXT山東省市場監(jiān)督管理局???發(fā)布DB37/T3676—2019前言 III1范圍 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14檢測方法 24.1儀器 24.2耗材 24.3試劑 24.4核酸檢測 24.5血清學(xué)檢測 25凈化群的建立 35.1凈化策略 35.2感染狀況普查階段 35.3強(qiáng)化免疫階段 35.4檢測與淘汰階段 45.5強(qiáng)制凈化階段 45.6假定健康階段 45.7凈化場的評估階段 46凈化場的維持階段 46.1免疫 56.2監(jiān)測 56.3引種檢疫 56.4生產(chǎn)記錄不佳的種豬檢測 57綜合生物安全措施 57.1合理的豬場選址 57.2生產(chǎn)模式 57.3飼養(yǎng)管理 57.4消毒措施 57.5無害化處理措施 67.6有害生物防治措施 67.7其它生物安全措施 67.8檔案管理 6附錄A（資料性附錄）豬偽狂犬病免疫無疫評估實驗室檢測方法及抽樣要求 7附錄B（資料性附錄）豬偽狂犬病凈化評估實驗室檢測方法及抽樣要求 8前??言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧獸醫(yī)局提出并監(jiān)督實施。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：山東省動物疫病預(yù)防與控制中心、山東省畜牧總站、山東匯眾獸醫(yī)科技服務(wù)公司。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：李云崗、張棟、張月、周開鋒、楚遵峰、汪洋、王士榮、王敏、曹振山、劉波。種豬場偽狂犬病凈化技術(shù)規(guī)范范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了種豬場豬偽狂犬病凈化的檢測方法、凈化群的建立、凈化場的維持及綜合生物安全措施。本標(biāo)準(zhǔn)適用于種豬場豬偽狂犬病凈化。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T17823集約化豬場防疫基本要求GB/T17824.2規(guī)模豬場生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程GB/T18641偽狂犬病診斷技術(shù)GB/T35911偽狂犬病病毒熒光PCR檢測方法NY/T1168畜禽糞便無害化處理技術(shù)規(guī)范NY/T1568標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)模養(yǎng)豬場建設(shè)規(guī)范DB37/T2384種豬場消毒技術(shù)規(guī)范《病死及病害動物無害化處理技術(shù)規(guī)范》農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2017〕25號《跨省調(diào)運乳用種用動物產(chǎn)地檢疫規(guī)程》農(nóng)牧發(fā)〔2019〕2號術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。偽狂犬病Pseudorabies偽狂犬病是由皰疹病毒科皰疹病毒Ⅰ型偽狂犬病毒（PRV）引起的豬及多種家畜和野生動物的傳染病。凈化eradication對種豬場采取一系列措施，達(dá)到消滅和清除豬偽狂犬病的過程。在某一限定的種豬場內(nèi)，根據(jù)豬偽狂犬病的監(jiān)測結(jié)果，及時發(fā)現(xiàn)并淘汰感染豬只，使種豬群中豬偽狂犬病逐漸被清除的疫病控制方法。豬偽狂犬gE基因缺失疫苗PseudorabiesgEgene-deletedvaccine利用豬偽狂犬gE基因缺失病毒株所制成的疫苗。檢測方法儀器熒光PCR檢測儀。PCR儀和凝膠成像系統(tǒng)（根據(jù)實驗室條件選擇，替換4.1.1）。高速臺式冷凍離心機(jī)：可控溫至4℃、離心速度可達(dá)12000r/min以上。組織研磨器或者研缽。普通冰箱。微量移液器：0.2μL～2μL，1μL～10μL，10μL～100μL，20μL～200μL，100μL～1000μL。酶標(biāo)儀。恒溫箱。高壓滅菌鍋。耗材1.5mL離心管。0.2mLPCR薄壁管。酶標(biāo)板,移液器吸頭。試劑除非另有說明，在檢測中使用的試劑均為分析純，實驗室用水應(yīng)符合GB/T6682的要求。商品化DNA抽提試劑，于4℃保存。無水乙醇，-20℃預(yù)冷。75%乙醇，無水乙醇和雙蒸水配制，-20℃預(yù)冷。含dATP、dGTP、dCTP、dTTP各10mmol/L，-20℃保存，避免反復(fù)凍融。普通PCR引物參照GB/T18641。熒光PCR引物和探針參照GB/T35911。酶標(biāo)檢測試劑等效采用PRV-gE基因缺失疫苗配套的商品化鑒別檢測試劑。核酸檢測活豬采集扁桃體或全血，病死豬或流產(chǎn)胎兒采集大腦、扁桃體、淋巴結(jié)、肺臟等組織。依據(jù)GB/T18641或GB/T35911，使用PCR方法，檢測組織中的豬偽狂犬病病毒核酸。血清學(xué)檢測豬偽狂犬病病毒gB（PRV-gB）抗體檢測采集豬血，分離血清。采用商品化ELISA試劑盒，檢測豬血清中的PRV-gB抗體，評估免疫抗體水平。豬偽狂犬病病毒gE（PRV-gE）特異性抗體檢測采集豬血，分離血清。采用商品化ELISA試劑盒，檢測豬血清中的PRV-gE特異性抗體，評估野毒感染狀態(tài)。合格免疫抗體判定標(biāo)準(zhǔn)個體免疫抗體合格標(biāo)準(zhǔn)，PRV-gB抗體按所選取的試劑盒判定標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。群體免疫抗體合格標(biāo)準(zhǔn)，群體PRV-gB抗體陽性率不低于90%。凈化群的建立凈化策略采用gE基因缺失疫苗免疫、野毒鑒別診斷技術(shù)淘汰陽性感染豬的策略。適時淘汰生產(chǎn)成績差的母豬。做好引種監(jiān)測，每年引進(jìn)的公豬和后備豬應(yīng)為全陰性。綜合生物安全措施保障到位。感染狀況普查階段采樣技術(shù)前腔靜脈或扁桃體采樣，并及時對血樣或組織樣品規(guī)范保存、送檢。采血過程及制樣過程要防止污染并規(guī)范標(biāo)記。抽樣數(shù)量抽樣要求和數(shù)量參照附錄A中表A.1和表A.2進(jìn)行。置信度95%，預(yù)期流行率5%。根據(jù)野毒抗體陽性率高低，確定具體凈化方案。凈化方案的確定血清樣品PRV-gE抗體陽性率不超過10%，實行檢測淘汰-監(jiān)測與認(rèn)證維持的凈化方案。血清樣品PRV-gE抗體陽性率在10%～20%，實行強(qiáng)化免疫-檢測淘汰-補充陰性后備豬-監(jiān)測與認(rèn)證維持的分步凈化方案。血清樣品PRV-gE抗體陽性率大于20%，該豬群不具備凈化條件。強(qiáng)化免疫階段疫苗PRV-gE基因缺失活疫苗，免疫原性好。有配套的PRV野毒感染鑒別診斷試劑。免疫程序根據(jù)疫苗免疫后抗體跟蹤檢測情況確定合理的免疫程序。種豬，種母豬和公豬每年普免2次～3次，避免在分娩前7d內(nèi)接種。后備豬群，后備豬配種前8W1次活疫苗免疫；以后按生產(chǎn)種豬的免疫程序進(jìn)行免疫。仔豬，1d～2d日齡滴鼻免疫。45d活疫苗加強(qiáng)免疫。檢測評估免疫后3W檢測gB抗體和gE抗體。當(dāng)gE抗體陰性時，如果90%的樣品gB抗體陽性，即可認(rèn)為群體免疫合格。臨床評估通過強(qiáng)化免疫后，豬群應(yīng)無豬偽狂犬病的臨床癥狀。檢測與淘汰階段隔離淘汰每半年進(jìn)行一次血清學(xué)檢查，全群采樣。陰、陽性豬分群飼養(yǎng)。逐步淘汰和縮小陽性豬群。加強(qiáng)陰性群的隔離與監(jiān)測，最后建立完全健康的gE陰性豬群。種豬群的檢測與淘汰當(dāng)種豬群樣品的偽狂犬病野毒感染抗體（gE抗體）陽性率在10%以下時，如gE抗體陽性，應(yīng)直接淘汰；對可疑樣品再次檢測，也可在10d～14d后再抽樣復(fù)核，如仍為可疑，應(yīng)直接淘汰。后備種豬的檢測與淘汰對擬選留的后備種豬，可分別在5月齡（或進(jìn)入后備舍）和配種前1個月檢測gE抗體，如為陰性，即可作為種豬使用；gE抗體陽性或兩次可疑，應(yīng)淘汰處理。強(qiáng)制凈化階段對全群豬只進(jìn)行檢測，剔除全部陽性豬只。在最后1頭陽性豬淘汰1個月后，對種公豬按100%比例、母豬按10%比例采血，再次進(jìn)行PRV-gE特異性抗體檢測。如抽檢種豬群PRV-gE抗體全部陰性且群體90%的樣品為gB抗體陽性可視為假定豬偽狂陰性群。假定健康階段在最后1頭陽性豬淘汰后1年內(nèi)，種豬群PRV-gE抗體陰性；生產(chǎn)成績正常穩(wěn)定。豬群則進(jìn)入假定健康階段。凈化場的評估階段評估時間在進(jìn)入“假定健康階段”后，按照免疫無疫標(biāo)準(zhǔn)、凈化標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行凈化場評估。免疫無疫標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)母豬和后備種豬抽檢,豬偽狂犬病病毒gB抗體陽性率不低于90%。種公豬、生產(chǎn)母豬和后備種豬抽檢，豬偽狂犬病病毒gE抗體檢測均為陰性。連續(xù)兩年以上無臨床病例。凈化標(biāo)準(zhǔn)種公豬、生產(chǎn)母豬和后備種豬抽檢，豬偽狂犬病病毒gE抗體檢測均為陰性。停止免疫兩年以上,無臨床病例。評估抽樣評估專家小組負(fù)責(zé)設(shè)計抽樣方案并監(jiān)督抽樣。樣本方案和檢測方法參照附錄A、附錄B。置信度95%，預(yù)期流行率3%。凈化場的維持階段免疫種豬場要制定并實施合理的免疫程序，選用合格的豬偽狂犬病gE基因缺失疫苗，按照免疫程序進(jìn)行免疫接種。監(jiān)測種豬群檢測每年對陰性種豬群，監(jiān)測PRV-gE抗體。抽樣比例參考表A.1。置信度95%，預(yù)期流行率3%。保證基礎(chǔ)群、后備群維持陰性狀態(tài)。后備豬的檢測在后備豬選留時進(jìn)行PRV-gE特異性抗體和PRV-gB免疫抗體檢測，確保轉(zhuǎn)入種豬群的豬只PRV-gE抗體為陰性，PRV-gB免疫抗體水平應(yīng)符合合格標(biāo)準(zhǔn)。后備豬入群必須逐頭檢測。引種檢疫嚴(yán)格檢疫引進(jìn)豬只。按照農(nóng)牧發(fā)〔2019〕2號《跨省調(diào)運乳用種用動物產(chǎn)地檢疫規(guī)程》規(guī)定引進(jìn)豬只。在種豬啟運前對擬引進(jìn)豬只逐頭進(jìn)行檢測，確保PRV-gE特異性抗體陰性或豬偽狂犬病病毒核酸檢測陰性，且PRV-gB抗體合格后方可啟運引進(jìn)。建立專門隔離飼養(yǎng)舍，引進(jìn)后隔離飼養(yǎng)45d以上經(jīng)檢測合格后才可混群飼養(yǎng)。使用外來種公豬的精液時，必須在購買前對供精種公豬進(jìn)行嚴(yán)格檢疫，保證供精種公豬PRV-gE特異性抗體陰性或豬偽狂犬病病毒核酸檢測陰性且PRV-gB免疫抗體合格。對精液進(jìn)行病原核酸檢測確保檢測結(jié)果陰性。生產(chǎn)記錄不佳的種豬檢測要及時收集病死豬及母豬所生產(chǎn)的弱仔豬、死胎、流產(chǎn)胎兒，進(jìn)行豬偽狂犬病病毒核酸檢測，檢測方法按照GB/T18641或GB/T35911執(zhí)行。如果豬偽狂犬病病毒核酸檢測陽性，則檢測對應(yīng)的親本母豬PRV-gE野毒抗體，陽性者淘汰。綜合生物安全措施合理的豬場選址按NY/T1568規(guī)定執(zhí)行，避免病毒經(jīng)空氣傳入。生產(chǎn)模式參照GB/T17823執(zhí)行。執(zhí)行自繁自養(yǎng)、全進(jìn)全出、提前斷奶及“兩點式”或“三點式”的生產(chǎn)模式，阻斷豬場間、豬群間、批間、引種、轉(zhuǎn)場疫病傳播。飼養(yǎng)管理按GB/T17824.2的規(guī)定執(zhí)行，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，減少應(yīng)激。做好通風(fēng)、保溫、適宜的飼養(yǎng)密度。種豬場的凈道與污道要分開。分胎次飼養(yǎng)、分類別飼養(yǎng)、分類管理，隔離、阻斷疫病傳播。科學(xué)規(guī)范用藥，種豬禁用皮質(zhì)類固醇類藥物。消毒措施按DB37/T2384的規(guī)定執(zhí)行。嚴(yán)格做好人員、物品、用具、車輛、豬舍內(nèi)外環(huán)境以及糞便排泄物和污水的消毒。無害化處理措施病死豬及母豬所生產(chǎn)的弱仔豬、死胎、流產(chǎn)胎兒按農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2017〕25號《病死及病害動物無害化處理技術(shù)規(guī)范》的規(guī)定處理。糞便處理按NY/T1168的規(guī)定。有害生物防治措施禁止在豬場內(nèi)飼養(yǎng)犬、貓等其它易感動物。每6個月至少開展1次全方位徹底滅鼠。定期殺蟲、防蠅。其它生物安全措施保障獨立、隔離的公豬站的生物安全，加強(qiáng)人工授精檢測與管理，防止精液傳播。加強(qiáng)生產(chǎn)流程管理。重點在容易轉(zhuǎn)陽的階段，全部清空1～2批，徹底消毒，空欄。保持凈化工作的連續(xù)性。檔案管理做好生產(chǎn)記錄、飼料和飼料添加劑購進(jìn)和使用記錄、獸藥購進(jìn)和使用記錄、免疫記錄、消毒記錄、病死豬無害化處理記錄、防疫監(jiān)測記錄、疾病診療記錄、運輸車輛記錄、糞便及污物無害化處理記錄和銷售記錄等。記錄保存不少于2年。

（資料性附錄）

豬偽狂犬病免疫無疫評估實驗室檢測方法及抽樣要求豬偽狂犬病免疫無疫評估實驗室檢測方法及抽樣要求檢測項目檢測方法抽樣種群抽樣數(shù)量樣本類型抗體檢測gE-ELISA