消毒滅菌技術(shù)及效果監(jiān)測

關(guān)于消毒滅菌技術(shù)及效果監(jiān)測第1頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五2滅菌－殺滅或除去所有微生物的繁殖體和芽胞。消毒－殺滅或除去病原微生物。防腐－抑制微生物的生長與繁殖。抑菌劑或防腐劑。無菌—不含有任何的活菌一消毒與滅菌技術(shù)

基本概念第2頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五3二消毒與滅菌方法

1物理滅菌法熱力滅菌法（干熱滅菌、濕熱滅菌）輻射滅菌法（紫外線、電離幅射、微波）濾過除菌法（除菌濾器、適用物品）其他超聲波（機(jī)制：裂解細(xì)菌，主要用于粉碎細(xì)胞、提取抗原）干燥與低溫抑菌第3頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五4熱力滅菌法原理使微生物蛋白質(zhì)，酶變性凝固；膜結(jié)構(gòu)破壞微生物體內(nèi)的DNA斷裂，核蛋白解體。方法

干熱滅菌法濕熱滅菌法熱力滅菌法第4頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五5

焚燒----最徹底的滅菌方法燒灼----直接用火焰滅菌方法如接種環(huán)、試管口、三角瓶口干烤----加熱160-170℃2h

玻璃器皿、陶瓷1、干熱滅菌法滅菌效果：可殺死營養(yǎng)體和芽胞如尸體等第5頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五62.濕熱滅菌法高壓蒸汽滅菌法（熱壓滅菌法）最有效的濕熱滅菌法121℃15-20mim（殺芽胞)煮沸消毒法水煮100℃5mim(殺繁殖體)-2h(殺芽胞)流通蒸汽消毒法巴氏消毒法間歇蒸汽滅菌法水蒸汽100℃15-30mim(殺繁殖體)反復(fù)多次流動蒸汽間歇加熱滅菌(殺芽胞）較低的溫度61℃30mim/71℃30s（殺致病菌）效果比干熱好第6頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五7利用化學(xué)藥物（消毒防腐劑）破壞微生物的化學(xué)組成、物理結(jié)構(gòu)和生理活動，達(dá)到防腐滅菌目的。消毒與滅菌方法

2化學(xué)消毒法第7頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五

三、醫(yī)院消毒效果監(jiān)測范圍

日常監(jiān)測重點(diǎn)科室（手術(shù)室、層流潔凈病房、ICU、產(chǎn)房、新生兒科、母嬰同室病房、透析室、血液病房、燒傷病房、供應(yīng)室、內(nèi)鏡室、治療室、換藥室發(fā)生醫(yī)院內(nèi)感染時應(yīng)在發(fā)生感染的科室及相關(guān)科室采樣監(jiān)測

第8頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五四、醫(yī)院消毒效果監(jiān)測分類

消毒滅菌效果監(jiān)測：使用中消毒液或無菌器械保存液滅菌設(shè)備（壓力蒸汽滅菌器、環(huán)氧乙烷滅菌器）紫外線燈滅菌物品環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測：空氣物表醫(yī)務(wù)人員手

第9頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五1、空氣消毒效果監(jiān)測

1、采樣時間：消毒處理后、操作前進(jìn)行采樣。

2、布點(diǎn)及采樣方法：（1）Ⅰ類環(huán)境布點(diǎn)、采樣方法：依據(jù)《醫(yī)院潔凈手術(shù)部建筑技術(shù)規(guī)范》(GB50333-2002)10.3.13、手術(shù)區(qū)：需要特別保護(hù)的手術(shù)臺及其周圍區(qū)域。

Ⅰ級手術(shù)室的手術(shù)區(qū)是指手術(shù)臺兩側(cè)邊至少各外推0.9m、兩端至少各外推0.4m后（包括手術(shù)臺）的區(qū)域；

Ⅱ級手術(shù)室的手術(shù)區(qū)是指手術(shù)臺兩側(cè)邊至少各外推0.6m、兩端至少各外推0.4m后(包括手術(shù)臺)的區(qū)域；

Ⅲ級手術(shù)室的手術(shù)區(qū)是指手術(shù)臺四邊至少各外推0.4m后（包括手術(shù)臺）的區(qū)域。

Ⅳ級手術(shù)室不分手術(shù)區(qū)和周邊區(qū)。周邊區(qū)：潔凈手術(shù)室內(nèi)除去手術(shù)區(qū)以外的其他區(qū)域。第10頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五

Ⅰ類環(huán)境采樣方法

將普通營養(yǎng)瓊脂平皿（直徑為9cm）放在室內(nèi)手術(shù)區(qū)和周邊區(qū)各采樣點(diǎn)處，采樣高度離地面≤0.8米，采樣時將平皿蓋打開，扣放于平皿旁，暴露30分鐘，蓋好，于37℃培養(yǎng)24小時，分別計(jì)數(shù)手術(shù)區(qū)和周邊區(qū)的平均菌落數(shù)。第11頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五Ⅱ、Ⅲ類環(huán)境布點(diǎn)、采樣方法

依據(jù)《消毒技術(shù)規(guī)范》(衛(wèi)生部2002年版)3.17.8。室內(nèi)面積≤30M2，設(shè)內(nèi)、中、外對角線3點(diǎn)，內(nèi)、外點(diǎn)布點(diǎn)部位距墻壁1M處；室內(nèi)面積>30M2，設(shè)4角及中央5點(diǎn)（雙對角線），4角的布點(diǎn)部位距墻壁1M處。將普通營養(yǎng)瓊脂平皿(直徑為9cm)放在室內(nèi)各采樣點(diǎn)處，采樣高度距地面1.5米（GB15982-1995：0.8～1.5米），采樣時將平皿蓋打開，扣放于平皿旁，暴露5分鐘，蓋好立即送檢，于37℃培養(yǎng)48小時，計(jì)數(shù)平板菌落數(shù)，并計(jì)算出空氣細(xì)菌菌落總數(shù)。

第12頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五空氣采樣時的注意事項(xiàng)

1、（消毒前）前提將放置平皿的采樣臺準(zhǔn)備好。

2、開門方式：自動門,推拉式彈簧門,有把手的門。

3、行走路線（盡可能少在室內(nèi)走動）動作要輕。先布皿后開蓋。

4、動態(tài)環(huán)境

5、同一房間空氣、物表采樣，先采空氣，后采物表；最好由同一人操作。

54321第13頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五2、物體表面消毒效果監(jiān)測

1、采樣時間：消毒處理后進(jìn)行采樣。

2、采樣方法：用5cm×5cm的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，用浸有含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉(zhuǎn)棉拭子，連續(xù)采樣4個，剪去手接觸部位后，投入10ml含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，進(jìn)行細(xì)菌菌落總數(shù)和致病菌檢測。門把手等不規(guī)則物體表面用棉拭子直接涂擦采樣第14頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五物體表面消毒效果監(jiān)測

3、檢測方法：（1）細(xì)菌總數(shù)檢測：檢測方法按《消毒技術(shù)規(guī)范》3.17.6.3（1）執(zhí)行。小型物體表面的結(jié)果計(jì)算，用cfu/件。（2）致病菌檢測：檢測方法按《消毒技術(shù)規(guī)范》3.17.15原則執(zhí)行。

4、結(jié)果判定

Ⅰ、Ⅱ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤5cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。

Ⅲ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤10cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。

Ⅳ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤15cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。第15頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五采樣注意事項(xiàng)

1、空氣、物表采樣由同一人操作。

2、物表采樣應(yīng)由近及遠(yuǎn)，兼顧上下中左右

3、母嬰同室、血透室屬Ⅱ類環(huán)境

4、樣品標(biāo)識一定要清楚，能朔源、追蹤，以便整改。

5、致病菌包括金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、溶血性鏈球菌（產(chǎn)房、新生兒科、母嬰同室加測沙門氏菌）

6、采樣棉簽在現(xiàn)場要做空白對照。

第16頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五3、手消毒效果監(jiān)測

1、采樣時間：消毒后立即采樣。

2、采樣方法：被檢人五指并攏，用浸有含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦2次(一只手涂擦面積約30cm2)，并隨之轉(zhuǎn)動采樣的棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投入10ml含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，進(jìn)行細(xì)菌菌落總數(shù)和致病菌檢測。第17頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五手消毒效果監(jiān)測檢測方法

（1）細(xì)菌總數(shù)檢測：將采樣管在混勻器上振蕩20秒或用力振打80次，用無菌吸管吸取1.0ml待檢樣品接種于滅菌平皿，每一樣本接種2個平皿，內(nèi)加入已溶化的45℃～48℃的營養(yǎng)瓊脂15ml～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置36℃±1℃溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。采樣結(jié)果計(jì)算方法：細(xì)菌總數(shù)（cfu/cm2）=

（2）致病菌檢測：按《消毒技術(shù)規(guī)范》3.17.15原則執(zhí)行。

平板上菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)

采樣面積（cm2）第18頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五結(jié)果判定

Ⅰ、Ⅱ類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)≤5cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌為消毒合格。

Ⅲ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤10cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。

Ⅳ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤15cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。母嬰同室、嬰兒室、新生兒科及兒科病房的工作人員手上，不得檢出沙門氏菌、大腸桿菌、溶血性鏈球菌、黃色葡萄球菌。第19頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五

注意事項(xiàng)

1、分清普通衛(wèi)生洗手和外科洗手衛(wèi)生手消毒。外科洗手標(biāo)準(zhǔn)值?Ⅱ類環(huán)境：金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌(產(chǎn)房、母嬰同室、新生兒科加測沙門氏菌、溶血性鏈球菌)Ⅲ類環(huán)境：金黃色葡萄球菌、大腸桿菌第20頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五4、使用中消毒液或無菌器械保存液監(jiān)測

1、使用中消毒液有效成分的測定

2、使用中消毒液或無菌器械保存液染菌量的測定（1）涂抹法：（2）傾注法：用無菌吸管吸取消毒液1.0ml，加入到9ml含相應(yīng)中和劑的無菌生理鹽水采樣管中混勻，分別取0.5ml放入2只滅菌平皿內(nèi)，加入已溶化的45℃～48℃的營養(yǎng)瓊脂15ml～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，一平板置20℃培養(yǎng)7天，觀察霉菌生長情況；另一個平板置36℃±1℃溫箱培養(yǎng)72h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。同時按3.17.15檢測致病菌。使用中消毒液或無菌器械保存液染菌量（cfu/ml）=每個平板上的菌落數(shù)×20

結(jié)果判定：消毒液染菌量≤100cfu/ml，并未檢出致病菌為合格。第21頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五注意事項(xiàng)：1、必須是使用中消毒液或無菌器械保存液。

2、要求采樣后1h內(nèi)檢測，實(shí)際工作中由于各種原因做不到，采5ml樣品放在滅菌試管中（試管中不放中和劑）帶回實(shí)驗(yàn)室。

3、樣品名稱一定要標(biāo)識清楚，不僅要注明采樣地點(diǎn)，而且要注明消毒液的名稱、有效濃度等，例：勁康消毒劑、0.1%健之素消毒液、80%漂白粉溶液、0.5%洗必泰等標(biāo)識都是不正確的。

4、消毒液細(xì)菌菌落總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)值≤100cfu/ml，無菌器械保存液細(xì)菌菌落總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)值是不得檢出。

5、致病菌檢測包括金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、沙門氏菌、溶血性鏈球菌。第22頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五5、滅菌物品消毒效果監(jiān)測

1、采樣時間：在滅菌處理后，存放有效期內(nèi)采樣。

2、采樣方法：按《消毒技術(shù)規(guī)范》3.17.5.2原則執(zhí)行

3、結(jié)果判定：陽性對照在24小時內(nèi)應(yīng)有菌生長，陰性對照在培養(yǎng)期間應(yīng)無菌生長,如需-厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管內(nèi)均為澄清或雖顯渾濁但經(jīng)證明并非有菌生長，判為滅菌合格；如需-厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管中任何1管顯渾濁并證實(shí)有菌生長，應(yīng)重新取樣，分別同法復(fù)試2次，除陽性對照外，其他各管均不得有菌生長，否則判為滅菌不合格。第23頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五滅菌物品消毒效果監(jiān)測注意事項(xiàng)1、無菌檢驗(yàn)應(yīng)在潔凈度為100級單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，最好把滅菌包帶回在百級實(shí)驗(yàn)室打開。應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，避免微生物污染。

2、應(yīng)采有效期內(nèi)的樣品（高壓滅菌：一般是兩周；還氧乙烷：兩年）第24頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五6、滅菌器滅菌效果監(jiān)測1、監(jiān)測方法：工藝監(jiān)測化學(xué)監(jiān)測（化學(xué)指示卡、指示膠帶）生物監(jiān)測2、常用滅菌器種類壓力蒸汽滅菌器環(huán)氧乙烷滅菌器3、生物指示物嗜熱脂肪桿菌芽胞（ATCC7953）,壓力蒸汽滅菌器枯草桿菌黑色變種芽胞（ATCC9372）環(huán)氧乙烷滅菌器第25頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五7、壓力蒸汽滅菌器滅菌效果監(jiān)測

檢測方法

生物指示菌片布放方法（《消毒技術(shù)規(guī)范》）（1）將兩個嗜熱脂肪桿菌芽胞菌片分別裝入滅菌小紙袋內(nèi)，置于標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包中心部位。（2）下排氣壓力蒸汽滅菌器滅菌柜室內(nèi)，排氣口上方放置一個標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包預(yù)真空和脈動真空壓力蒸汽滅菌器滅菌柜室內(nèi)，排氣口上方放置一個標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包手提壓力蒸汽滅菌器：通用貯物盒代替標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包，貯物盒內(nèi)盛滿中試管，指示菌片放于中心部位的兩支滅菌試管內(nèi)，貯物盒放于手提壓力蒸汽滅菌器底部。第26頁，共30頁，2022年，5月20日，6點(diǎn)27分，星期五8