網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)課件

網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)

及臨床應(yīng)用

任燕歌概念網(wǎng)織紅細(xì)胞（reticulocyte,Ret或Reti）界于晚幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞之間的過渡階段細(xì)胞。因其胞質(zhì)中殘存的核糖核酸經(jīng)堿性染料活體染色后，呈現(xiàn)點(diǎn)狀或線網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，故名網(wǎng)織紅細(xì)胞。單能干細(xì)胞原始紅細(xì)胞早幼紅細(xì)胞中幼紅細(xì)胞晚幼紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟紅細(xì)胞多能干細(xì)胞紅細(xì)胞發(fā)育過程圖網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)方法

活體染色手工鏡檢

血液自動(dòng)分析儀法

流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)法

手工鏡檢法原理活體染料的堿性著色基團(tuán)（帶正電荷）可與網(wǎng)織紅細(xì)胞RNA的磷酸基（帶負(fù)電荷）結(jié)合，使RNA膠體間的負(fù)電荷減少而發(fā)生凝縮，形成有色的點(diǎn)狀、線狀甚至連綴成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，而血紅蛋白著色相對(duì)較淡。借此在光鏡下與成熟紅細(xì)胞相區(qū)別。操作方法①取干凈試管一只，加入10g/L煌焦油藍(lán)溶液2~3滴，然后加入等量的血液混勻后放置15~20min，使紅細(xì)胞充分染色；②取少許染色好的血液，在潔凈載玻片上推成薄而均勻的血膜，干燥后用瑞氏染液復(fù)染(也可不復(fù)染）；③在顯微鏡低倍鏡下選擇細(xì)胞分布均勻著色清晰的部位，用油鏡在血片上計(jì)數(shù)至少1000個(gè)紅細(xì)胞分布區(qū)域內(nèi)的網(wǎng)織紅細(xì)胞再除以1000計(jì)算出網(wǎng)織紅細(xì)胞的百分率。同時(shí)進(jìn)行紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，可計(jì)算網(wǎng)織紅細(xì)胞的絕對(duì)值。活體染色圖檢測(cè)儀器檢測(cè)技術(shù)流式細(xì)胞術(shù)（flowcytometry）原理RNA經(jīng)堿性熒光染料處理后，根據(jù)熒光強(qiáng)度反映細(xì)胞內(nèi)RNA含量，可將Reti分為高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（HFR）、中等熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（MFR）和低熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（LFR）三部分。利用上述三個(gè)指標(biāo)可計(jì)算網(wǎng)織紅細(xì)胞的成熟指數(shù)（reticulocytematerationindex,RMI）。RMI對(duì)評(píng)價(jià)骨髓移植后造血功能恢復(fù)情況和EPO的療效，以及監(jiān)護(hù)放、化療對(duì)骨髓的抑制作用具有更高的敏感性。檢測(cè)圖示網(wǎng)織紅細(xì)胞平面散射圖方法學(xué)評(píng)價(jià)手工鏡檢法的優(yōu)點(diǎn)是便捷、成本低。目前仍為臨床實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)檢驗(yàn)方法。但致命的缺點(diǎn)是影響因素多、重復(fù)性差，CV≥20%，以低Reti的標(biāo)本尤為明顯。即使進(jìn)行絕對(duì)值計(jì)算，也因Reti計(jì)數(shù)不準(zhǔn)確、某些貧血網(wǎng)織紅細(xì)胞提前釋放而失去其可靠性。這些不足嚴(yán)重影響了該指標(biāo)的臨床應(yīng)用。須加強(qiáng)質(zhì)量控制，必要時(shí)對(duì)計(jì)數(shù)結(jié)果加以校正。方法學(xué)評(píng)價(jià)自動(dòng)化儀器在許多方面具有標(biāo)準(zhǔn)化程序，試劑穩(wěn)定、反應(yīng)時(shí)間一致，計(jì)數(shù)細(xì)胞量大、具有質(zhì)控和校準(zhǔn)能力，因此在精密度和準(zhǔn)確度上明顯優(yōu)于顯微鏡計(jì)數(shù)法。但儀器價(jià)格比較偏高，試劑成本和質(zhì)控成本大，影響到基層醫(yī)院、小型實(shí)驗(yàn)室的使用期望及推廣。

臨床應(yīng)用部分臨床意義網(wǎng)織紅細(xì)胞不僅僅是個(gè)計(jì)數(shù)參數(shù)問題，更有許多新的參數(shù)被引入臨床應(yīng)用、科研和基礎(chǔ)研究。網(wǎng)織紅細(xì)胞的增加或減少直接反映了骨髓紅細(xì)胞的生成能力，主要用于對(duì)紅細(xì)胞減少性疾病、溶血性貧血、治療監(jiān)測(cè)或骨髓移植后骨髓造血功能的恢復(fù)、監(jiān)測(cè)放療和化療對(duì)骨髓造血功能的影響評(píng)估等方面。網(wǎng)織紅細(xì)胞增高提示骨髓造血功能旺盛見于各種增生性貧血如缺鐵性貧血、巨幼細(xì)胞性(缺乏葉酸、維生素B12)貧血、失血性貧血,尤以溶血性貧血時(shí)增加最為顯著,常>10%。缺鐵性貧血及巨幼細(xì)胞性貧血在給予鐵劑、維生素B12、葉酸治療之后,可見網(wǎng)織紅細(xì)胞明顯增加。

缺鐵性貧血正細(xì)胞貧血

網(wǎng)織紅細(xì)胞增高正常或減低急性出血溶血綜合征骨髓衰減慢性貧血圖2骨髓浸潤(rùn)性貧血

圖1再障性貧血大細(xì)胞貧血網(wǎng)織紅細(xì)胞降低增高葉酸、VitB12缺乏未經(jīng)治療的葉酸、VitB12缺乏葉酸或VitB12缺乏的急性失血網(wǎng)織紅細(xì)胞反應(yīng)缺鐵性貧血或巨幼細(xì)胞貧血分別給予鐵劑、維生素B12或葉酸治療2-3d后，網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)值開始上升，7-10d達(dá)到最高(10%左右)；兩周以后逐漸降至正常水平，紅細(xì)胞、血紅蛋白開始升高。該過程表示貧血得到糾正。若網(wǎng)織紅細(xì)胞居高不下，提示尚未達(dá)到治療效果。網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)（RMI）計(jì)算參數(shù)計(jì)算公式：RMI=（MFR+HFR）/LFR×100%※RMI對(duì)評(píng)價(jià)骨髓移植后造血功能恢復(fù)情況和EPO的療效，以及監(jiān)護(hù)放、化療對(duì)骨髓的抑制作用具有更高的敏感性。臨床價(jià)值血液病的診斷和治療網(wǎng)織紅細(xì)胞是尚未完全成熟的紅細(xì)胞，在周圍血液中的數(shù)值可反映骨髓紅細(xì)胞的生成功能，因而對(duì)血液病的診斷和治療反應(yīng)的觀察均有其重要意義。放、化療監(jiān)測(cè)

機(jī)體接受放、化療后，如出現(xiàn)骨髓抑制，早期HFR和MFR降低，然后才檢測(cè)到網(wǎng)織紅細(xì)胞的降低。而停止放、化療，骨髓功能恢復(fù)后，又見上