實(shí)驗(yàn)三 鞭毛染色法及活細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性的觀察課件

實(shí)驗(yàn)三鞭毛染色法及活細(xì)菌

運(yùn)動(dòng)性的觀察

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.學(xué)習(xí)細(xì)菌的鞭毛染色法,觀察細(xì)菌鞭毛的形態(tài)特征;2.學(xué)習(xí)用懸滴法觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性.二、實(shí)驗(yàn)原理：細(xì)菌的鞭毛極細(xì)，直徑一般為10—20nm，只有用電子顯微鏡才能觀察到。但是，如采用特殊的染色法，則在普通光學(xué)顯微鏡下也能看到它。鞭毛染色方法很多，但其基本原理相同，即在染色前先用媒染劑處理，讓它沉積在鞭毛上，使鞭毛直徑加粗，然后再進(jìn)行染色。常用的媒染劑由丹寧酸和氯化高鐵或鉀明礬等配制而成。三、實(shí)驗(yàn)器材1.菌種：培養(yǎng)12-16h小時(shí)的普通變形桿菌。2.標(biāo)本片：周鞭毛（傷寒桿菌）3.試劑：硝酸銀鞭毛染色液、生理鹽水、蒸餾水、香柏油、二甲苯。4.器材：凹載玻片、蓋玻片、鑷子、擦鏡紙、吸水紙、接種環(huán)，顯微鏡等。四、實(shí)驗(yàn)方法（一）鞭毛染色

硝酸銀染色法：1.清洗玻片：選擇光滑無裂痕的玻片，最好選用新的。然后將玻片置洗衣粉過濾液中（洗衣粉煮沸后用濾紙過濾，以除去粗顆粒），煮沸20min。取出稍冷后用自來水沖洗、晾干，再放入濃洗液中浸泡5—6天，使用前取出玻片，用自來水沖去殘酸，再用蒸餾水洗。將水瀝干后，放入95%乙醇中脫水。新的載片雖沒有油污、劃痕，但含游離堿較多，所以要用2％鹽酸浸泡幾小時(shí)，用自來水沖洗干凈，然后再用蒸餾水洗凈，瀝干后再用效果較好。

2.菌液的制備：菌齡較老的細(xì)菌容易失落鞭毛，所以在染色前應(yīng)將待染細(xì)菌在新配制的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面上連續(xù)移接3-5代，以增強(qiáng)細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)力。最后一代菌種放恒溫箱中培養(yǎng)12—16h。①取菌要取菌落邊緣的幼齡菌體。②取菌后的接種環(huán)在載片上的蒸餾水中輕輕沾幾下即可，不要用力太猛，更不能用接種環(huán)大幅度涂開；否則鞭毛易脫落，造成染色失敗。③鞭毛染色的玻片只能自然干燥，不能用熱風(fēng)吹干，不能熱固定，這是由于加熱后菌體易變形，鞭毛易脫落，影響觀察。④A、B染液染完后用蒸餾水（自來水效果差）沖洗時(shí)一定要充分，背景很臟，鞭毛不易被觀察到，影響實(shí)驗(yàn)效果。⑤加B染液后，將玻片稍加熱（但不能太熱，更不能沸騰或蒸干）使其微冒蒸汽，染色效果較不加熱為好。染色用玻片干凈無油污是鞭毛染色成功的先決條件。注意事項(xiàng)（二）細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性觀察懸滴法：1.制備菌液：在幼齡菌斜面上，滴加3-4滴生理鹽水，制成輕度混濁的菌懸液。2.滴加菌液：加1滴菌液于蓋玻片的中央，也可用接種環(huán)挑取一環(huán)菌液于玻片中央，并用記號(hào)筆在菌液的邊緣做一記號(hào)，以便在顯微鏡觀察時(shí)，易于尋找菌液的位置。4.鏡檢：

先用低倍鏡找到標(biāo)記，再稍微移動(dòng)凹玻片即可找到菌滴的邊緣，然后將菌液移到視野中央換高倍鏡觀察。由于菌體是透明的，鏡檢時(shí)可適當(dāng)縮小光圈增大反差，便于觀察。鏡檢時(shí)要仔細(xì)辨別是細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)還是分子運(yùn)動(dòng)（即布朗運(yùn)動(dòng)），前者在視野下可見細(xì)菌自一處游動(dòng)至他處，而后者僅在原處左右擺動(dòng)。細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)速度依菌種不同而異，應(yīng)仔細(xì)觀察。注意事項(xiàng)1、檢查細(xì)菌運(yùn)動(dòng)的載玻片和蓋玻片都要潔凈無油，否則將影響細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)。2、制水封片時(shí)菌液不可加得太多，過多的菌液會(huì)在蓋玻片下流動(dòng)，因而在視野內(nèi)只見大量的細(xì)菌朝一個(gè)方向運(yùn)動(dòng)，從而影響了對細(xì)菌正常運(yùn)動(dòng)的觀察。3、若使用油鏡觀察，應(yīng)在蓋玻片上加香柏油一滴。五、實(shí)驗(yàn)作業(yè)：1.繪出鞭毛菌（自制片子或傷寒桿菌）的形態(tài)圖.2.用鞭毛染色法準(zhǔn)確鑒定一株細(xì)菌是否具有鞭毛，要注意哪些環(huán)節(jié)？3.懸滴法中，為什么加的菌液不能大多？如果發(fā)現(xiàn)顯微鏡視野內(nèi)大量細(xì)菌向一個(gè)方向流動(dòng)，你認(rèn)為是什么原因造成的？