結(jié)核分枝桿菌實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法實(shí)用版課件

分枝桿菌屬一類細(xì)長(zhǎng)略帶彎曲，有時(shí)呈分枝狀的桿菌，本屬細(xì)菌多具有抗酸性，又稱抗酸桿菌（acid-fastbacillus），細(xì)菌體內(nèi)含有分枝菌酸，細(xì)胞壁含有大量脂類，這與分枝桿菌的染色性、抵抗力和致病性等密切相關(guān)。本屬細(xì)菌已經(jīng)被鑒定的有70多種，可分為三大類：結(jié)核分枝桿菌、非典型分枝桿菌、麻風(fēng)分枝桿菌；按生長(zhǎng)速度可分為三類，即緩慢生長(zhǎng)菌、迅速生長(zhǎng)菌和不能培養(yǎng)菌三種類型分枝桿菌屬一類細(xì)長(zhǎng)略帶彎曲，有時(shí)呈分枝狀的桿菌，本屬細(xì)菌多具1結(jié)核分枝桿菌群結(jié)核分枝桿菌，是人和動(dòng)物結(jié)核病的病原體，包括人結(jié)核分枝桿菌（Mycobacteriumtuberculosis）、牛分支桿菌（M.bovis）、非洲分支桿菌（M.africanum）和田鼠分枝桿菌（M.microti），前三種對(duì)人類治病，其中人型結(jié)核分枝桿菌感染發(fā)病率最高。結(jié)核分枝桿菌屬于緩慢生長(zhǎng)分支桿菌結(jié)核分枝桿菌群結(jié)核分枝桿菌，是人和動(dòng)物結(jié)核病的病原體，包括人2非典型分枝桿菌偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜/膿腫、胞內(nèi)分枝桿菌、鳥分枝桿菌、戈登分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、偶然分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌、淺黃分枝桿菌、土分枝桿菌、草分枝桿菌、不產(chǎn)色分枝桿菌、海-潰瘍分枝桿菌、金色分枝桿菌、蘇爾加分枝桿菌、蟾蜍分枝桿菌等偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜亞種、龜分枝桿菌膿腫亞種屬于迅速生長(zhǎng)型，雞蛋培養(yǎng)基上3-5天可見菌落其他非典型分枝桿菌多為緩慢生長(zhǎng)型非典型分枝桿菌偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜/膿腫、胞內(nèi)分枝桿菌3麻風(fēng)分枝桿菌麻風(fēng)分枝桿菌（M.leprae）是麻風(fēng)病的病原體，也是抗酸桿菌，但較結(jié)核分枝桿菌短而粗，兩端尖細(xì)，抗酸染色著色均勻，呈束狀或團(tuán)狀排列，結(jié)核分枝桿菌多散在，偶有聚集。為典型的胞內(nèi)寄生菌，有麻風(fēng)桿菌存在的細(xì)胞胞漿呈泡沫狀，稱麻風(fēng)細(xì)胞。體外不能培養(yǎng)。麻風(fēng)分枝桿菌麻風(fēng)分枝桿菌（M.leprae）是麻風(fēng)病的病原體4全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結(jié)核分枝桿菌，有2000萬(wàn)活動(dòng)性肺結(jié)核患者，每年新發(fā)病例900萬(wàn)人，每秒鐘有1人感染結(jié)核，每年有300萬(wàn)人死于結(jié)核病。隨著抗結(jié)核藥物的不斷發(fā)展和衛(wèi)生生活狀況的改善，結(jié)核的發(fā)病率和死亡率曾一度大幅下降20世紀(jì)80年代后，由于艾滋病和結(jié)核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應(yīng)用、吸毒、貧困及人口流動(dòng)等因素，全球范圍內(nèi)結(jié)核病的疫情驟然惡化結(jié)核分枝桿菌5全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結(jié)核分枝桿菌，有2000萬(wàn)活動(dòng)性生物學(xué)形狀結(jié)核分枝桿菌為細(xì)長(zhǎng)略帶彎曲的桿菌，有時(shí)可見分枝狀，無(wú)芽孢和鞭毛，因衰老或抗結(jié)核藥物的作用可出現(xiàn)多形態(tài)，如球狀、串珠狀或絲狀，大小為1～4X0.4μm。細(xì)胞壁中含有大量脂質(zhì)而不易著色，特別是有大量分枝菌酸包圍在肽聚糖層的外面，一般用抗酸染色。萋尼染色呈紅色，背景為藍(lán)色；熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色生物學(xué)形狀結(jié)核分枝桿菌為細(xì)長(zhǎng)略帶彎曲的桿菌，有時(shí)可見細(xì)胞壁中6培養(yǎng)特性培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)要求高，必須在含血清，卵黃，馬鈴薯，甘油及無(wú)機(jī)鹽類的特殊培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，常用的有羅氏固體培養(yǎng)基培養(yǎng)條件專性需氧，3%-5%CO2能促進(jìn)其生長(zhǎng)最適溫度為35-37℃，最適pH為6.5-6.8菌落特點(diǎn)菌落粗糙型，表面干燥成顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，菜花樣7培養(yǎng)特性培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)要求高，必須在含血清，卵黃，馬鈴薯，甘油及細(xì)胞壁中含有大量脂質(zhì)而不易著色，特別是有實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2012年10月第19卷第10期.結(jié)核分枝桿菌屬于緩慢生長(zhǎng)分支桿菌BD公司推出的BACTEC—MGIT960全自動(dòng)分枝桿菌培養(yǎng)，鑒定／藥敏系統(tǒng)，操作簡(jiǎn)便，陽(yáng)性標(biāo)本檢出時(shí)間平均為9d：鑒定、藥敏試驗(yàn)時(shí)間平均為4d：陽(yáng)性標(biāo)本檢出率比傳統(tǒng)固體培養(yǎng)提高10％左右速度：8周（藥敏）6小時(shí)分枝狀，無(wú)芽孢和鞭毛，因衰老或抗結(jié)核藥物的20世紀(jì)80年代后，由于艾滋病和結(jié)核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應(yīng)用、吸毒、貧困及人口流動(dòng)等因素，全球范圍內(nèi)結(jié)核病的疫情驟然惡化接種過(guò)卡介苗的人也會(huì)產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)快速：4周（菌培）3小時(shí)實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2012年10月第19卷第10期.接種過(guò)卡介苗的人也會(huì)產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結(jié)核分枝桿菌，有2000萬(wàn)活動(dòng)性肺結(jié)核患者，每年新發(fā)病例900萬(wàn)人，每秒鐘有1人感染結(jié)核，每年有300萬(wàn)人死于結(jié)核病。實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2012年10月第19卷第10期.偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜/膿腫、胞內(nèi)分枝桿菌、鳥分枝桿菌、戈登分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、偶然分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌、淺黃分枝桿菌、土分枝桿菌、草分枝桿菌、不產(chǎn)色分枝桿菌、海-潰瘍分枝桿菌、金色分枝桿菌、蘇爾加分枝桿菌、蟾蜍分枝桿菌等涂片簡(jiǎn)單快速但陽(yáng)性率較低、難以區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌菌落粗糙型，表面干燥成顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，菜花樣凡感染過(guò)結(jié)核桿菌的機(jī)體，會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的致敏淋巴細(xì)胞，具有對(duì)結(jié)核桿菌的識(shí)別能力，當(dāng)再次遇到通過(guò)皮膚注入的少量的結(jié)核菌素時(shí)，致敏Ｔ淋巴細(xì)胞受相同抗原再次刺激會(huì)在48-72小時(shí)內(nèi)，產(chǎn)生局部炎癥反應(yīng)，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽(yáng)性反應(yīng)。結(jié)核分枝桿菌屬于緩慢生長(zhǎng)分支桿菌聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法

萋尼染色+熒光染色

羅氏培養(yǎng)+分枝桿菌快速培養(yǎng)

抗原抗體檢測(cè)

細(xì)胞因子檢測(cè)

熒光定量PCR

芯片雜交

病原學(xué)

免疫學(xué)

分子生物學(xué)細(xì)胞壁中含有大量脂質(zhì)而不易著色，特別是有實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法萋尼8涂片鏡檢--抗酸染色抗酸染色是目前為止最快的結(jié)核檢出方法，可用來(lái)檢測(cè)病情進(jìn)展，為感染控制提供參考依據(jù)，可確證培養(yǎng)物為陽(yáng)性萋尼染色法—紅色—普通顯微鏡（高倍）熒光染色—黃或橘色—熒光顯微鏡（低倍）聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！涂片鏡檢--抗酸染色抗酸染色是目前為止最快的結(jié)核檢出方法，可9抗酸染色局限性抗酸染色對(duì)分枝桿菌非特異，其他如Nocardia（奴卡）、Rhodococcus（紅球菌屬）、Legionellamicdadei（軍團(tuán)菌）、cryptosporidium（隱孢子蟲）、Isospora（等孢球蟲）等有抗酸菌特點(diǎn)不能區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌不能區(qū)分活菌和死菌敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000條菌時(shí)可檢出，而培養(yǎng)可檢出>10-100條菌.抗酸染色局限性抗酸染色對(duì)分枝桿菌非特異，其他如Nocardi10營(yíng)養(yǎng)要求高，必須在含血清，卵黃，馬鈴薯，甘油及無(wú)機(jī)鹽類的特殊培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，常用的有羅氏固體培養(yǎng)基2、分枝桿菌快速液體培養(yǎng)技術(shù)分枝桿菌分子診斷系統(tǒng)（協(xié)和醫(yī)院）研究、應(yīng)用報(bào)道較多的結(jié)核病基因診斷技術(shù)主要包括聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、核酸探針雜交、DNA序列測(cè)定、基因芯片、基因分型等。大量分枝菌酸包圍在肽聚糖層的外面，一般結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測(cè)熒光顯微鏡成本高、易損壞、耗電量大、光源壽命短、顯微鏡價(jià)格昂貴且需要在暗室內(nèi)工作等，熒光染色法一直沒有在結(jié)核病痰涂片診斷中得到廣泛的應(yīng)用。不能區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌接種過(guò)卡介苗的人也會(huì)產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2012年10月第19卷第10期.大量分枝菌酸包圍在肽聚糖層的外面，一般抗酸染色是目前為止最快的結(jié)核檢出方法，可用來(lái)檢測(cè)病情進(jìn)展，為感染控制提供參考依據(jù)，可確證培養(yǎng)物為陽(yáng)性敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000條菌時(shí)可檢出，而培養(yǎng)可檢出>10-100條菌.結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測(cè)試劑盒液體培養(yǎng)：菌體與培養(yǎng)基充分接觸，生長(zhǎng)迅速，但易受到污染不能區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌高效：同時(shí)檢測(cè)17種分枝桿菌（包括TB）聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色高效：同時(shí)檢測(cè)17種分枝桿菌（包括TB）要確定是否為結(jié)核菌．需結(jié)合分枝桿菌菌種鑒定和藥物敏感性試驗(yàn)。實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2012年10月第19卷第10期.發(fā)光二極管熒光顯微鏡（LED）熒光顯微鏡成本高、易損壞、耗電量大、光源壽命短、顯微鏡價(jià)格昂貴且需要在暗室內(nèi)工作等，熒光染色法一直沒有在結(jié)核病痰涂片診斷中得到廣泛的應(yīng)用。只需將二極管替換普通光學(xué)顯微鏡的目鏡就相當(dāng)于一臺(tái)熒光顯微鏡，組裝的“熒光顯微鏡”結(jié)合金胺O染色在結(jié)核病痰涂片檢查中有一定的應(yīng)用價(jià)值。田斌等，發(fā)光二極管熒光顯微鏡在基層實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)核分枝桿菌的應(yīng)用評(píng)價(jià).實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2012年10月第19卷第10期.營(yíng)養(yǎng)要求高，必須在含血清，卵黃，馬鈴薯，甘油及無(wú)機(jī)鹽類的特殊11分枝桿菌培養(yǎng)技術(shù)結(jié)核菌培養(yǎng)仍是目前診斷的金標(biāo)準(zhǔn)．尤其是藥敏試驗(yàn)結(jié)果在指導(dǎo)臨床用藥及耐藥性檢測(cè)等方面具有重要作用,是鑒定是否為活菌的可靠方法．1、傳統(tǒng)的固態(tài)培養(yǎng)法

需要4～6周才能檢測(cè)到結(jié)核菌的生長(zhǎng)．而且陽(yáng)性率也只有30％-40％；特異性差．各種分枝桿菌均可生長(zhǎng)。要確定是否為結(jié)核菌．需結(jié)合分枝桿菌菌種鑒定和藥物敏感性試驗(yàn)。分枝桿菌培養(yǎng)技術(shù)結(jié)核菌培養(yǎng)仍是目前診斷的金標(biāo)準(zhǔn)．尤其是藥敏試122、分枝桿菌快速液體培養(yǎng)技術(shù)BD公司推出的BACTEC—MGIT960全自動(dòng)分枝桿菌培養(yǎng)，鑒定／藥敏系統(tǒng)，操作簡(jiǎn)便，陽(yáng)性標(biāo)本檢出時(shí)間平均為9d：鑒定、藥敏試驗(yàn)時(shí)間平均為4d：陽(yáng)性標(biāo)本檢出率比傳統(tǒng)固體培養(yǎng)提高10％左右2、分枝桿菌快速液體培養(yǎng)技術(shù)13固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)優(yōu)缺點(diǎn)固體培養(yǎng)：污染少，易于進(jìn)行菌落形態(tài)觀察，但是培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)液體培養(yǎng)：菌體與培養(yǎng)基充分接觸，生長(zhǎng)迅速，但易受到污染固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)優(yōu)缺點(diǎn)14血清學(xué)試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)15免疫學(xué)檢測(cè)方法1、結(jié)核菌素試驗(yàn)凡感染過(guò)結(jié)核桿菌的機(jī)體，會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的致敏淋巴細(xì)胞，具有對(duì)結(jié)核桿菌的識(shí)別能力，當(dāng)再次遇到通過(guò)皮膚注入的少量的結(jié)核菌素時(shí)，致敏Ｔ淋巴細(xì)胞受相同抗原再次刺激會(huì)在48-72小時(shí)內(nèi)，產(chǎn)生局部炎癥反應(yīng)，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽(yáng)性反應(yīng)。對(duì)活動(dòng)性結(jié)核的診斷靈敏度高達(dá)77％，免疫學(xué)檢測(cè)方法1、結(jié)核菌素試驗(yàn)16局限性：假陰性：小兒結(jié)核、老年人結(jié)核、免疫缺陷或免疫功能低下患者（如合并HIV感染、接受免疫抑制劑治療的患者)假陽(yáng)性：接種過(guò)卡介苗的人也會(huì)產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)局限性：假陰性：17γ干擾素釋放試驗(yàn)被認(rèn)為是近十年來(lái)結(jié)核診斷史上取得的最重要成就，該檢測(cè)方法的原理是：結(jié)核感染后體內(nèi)長(zhǎng)期存在抗原特異性的記憶性Ｔ細(xì)胞，當(dāng)再次遇到抗原刺激時(shí)，能迅速活化增值，釋放γ干擾素。目前市售兩種，QFT-G和T-SPOT.TB，比較兩種方法，T-SPOT.TB更靈敏但QFT-G更特異，但均優(yōu)于結(jié)核菌素試驗(yàn)，同時(shí)也被推薦用于潛伏結(jié)核診斷。γ干擾素釋放試驗(yàn)被認(rèn)為是近十年來(lái)結(jié)核診斷史上取得的最重要成就18分子生物學(xué)檢測(cè)方法近年來(lái)核酸擴(kuò)增技術(shù)和雜交分析技術(shù)的發(fā)展，為分枝桿菌的檢測(cè)、鑒定和藥敏實(shí)驗(yàn)提供了極大的方便，可將診斷時(shí)間從幾周降低到幾天。研究、應(yīng)用報(bào)道較多的結(jié)核病基因診斷技術(shù)主要包括聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、核酸探針雜交、DNA序列測(cè)定、基因芯片、基因分型等。分子生物學(xué)檢測(cè)方法近年來(lái)核酸擴(kuò)增技術(shù)和雜交分析技術(shù)的發(fā)展，為19分枝桿菌核酸檢測(cè)分枝桿菌菌種鑒定結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測(cè)MDR早期診斷分枝桿菌分子診斷系統(tǒng)（協(xié)和醫(yī)院）

菌種鑒定篩查、鑒別診斷實(shí)時(shí)熒光PCR基因芯片快速檢測(cè)平臺(tái)MDR早期診斷分枝桿菌分子診斷系統(tǒng)（協(xié)和醫(yī)院）

菌種鑒定篩查20高效：一個(gè)樣本可同時(shí)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌和NTM快速：4周（菌培）3小時(shí)靈敏：10個(gè)菌/反應(yīng)（TB）；102

個(gè)菌/反應(yīng)（NTM）21分枝桿菌核酸檢測(cè)功能：TB快速篩查；TB/NTM鑒別診斷高效：一個(gè)樣本可同時(shí)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌和NTM21分枝涂片簡(jiǎn)單快速但陽(yáng)性率較低、難以區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌接種過(guò)卡介苗的人也會(huì)產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)涂片簡(jiǎn)單快速但陽(yáng)性率較低、難以區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌凡感染過(guò)結(jié)核桿菌的機(jī)體，會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的致敏淋巴細(xì)胞，具有對(duì)結(jié)核桿菌的識(shí)別能力，當(dāng)再次遇到通過(guò)皮膚注入的少量的結(jié)核菌素時(shí)，致敏Ｔ淋巴細(xì)胞受相同抗原再次刺激會(huì)在48-72小時(shí)內(nèi)，產(chǎn)生局部炎癥反應(yīng)，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽(yáng)性反應(yīng)。接種過(guò)卡介苗的人也會(huì)產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測(cè)TB更靈敏但QFT-G更特異，但均優(yōu)于結(jié)核菌素試驗(yàn)，同時(shí)也被推薦用于潛伏結(jié)核診斷。熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色細(xì)胞壁中含有大量脂質(zhì)而不易著色，特別是有熒光染色—黃或橘色—熒光顯微鏡（低倍）抗酸染色對(duì)分枝桿菌非特異，其他如Nocardia（奴卡）、Rhodococcus（紅球菌屬）、Legionellamicdadei（軍團(tuán)菌）、cryptosporidium（隱孢子蟲）、Isospora（等孢球蟲）等有抗酸菌特點(diǎn)萋尼染色法—紅色—普通顯微鏡（高倍）靈敏：103個(gè)菌/反應(yīng)不能區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測(cè)熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！高效：一個(gè)樣本可同時(shí)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌和NTM凡感染過(guò)結(jié)核桿菌的機(jī)體，會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的致敏淋巴細(xì)胞，具有對(duì)結(jié)核桿菌的識(shí)別能力，當(dāng)再次遇到通過(guò)皮膚注入的少量的結(jié)核菌素時(shí)，致敏Ｔ淋巴細(xì)胞受相同抗原再次刺激會(huì)在48-72小時(shí)內(nèi)，產(chǎn)生局部炎癥反應(yīng)，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽(yáng)性反應(yīng)。五種結(jié)核檢測(cè)方法效果評(píng)價(jià)其他非典型分枝桿菌多為緩慢生長(zhǎng)型高效：同時(shí)檢測(cè)17種分枝桿菌（包括TB）快速：＞4周（菌種鑒定）6小時(shí)靈敏：

103

個(gè)菌/反應(yīng)檢測(cè)范圍：結(jié)核、胞內(nèi)、鳥、戈登、堪薩斯、偶然、瘰疬、淺黃、土、龜-膿腫、草、不產(chǎn)色、海-潰瘍、金色、蘇爾加、蟾蜍、恥垢。22分枝桿菌菌種鑒定（DNA微陣列芯片法）

涂片簡(jiǎn)單快速但陽(yáng)性率較低、難以區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌高通量：兩個(gè)一線抗結(jié)核藥（MDR）速度：8周（藥敏）6小時(shí)靈敏度：103

個(gè)菌/反應(yīng)基于rpoB（利福平）和katG/inhA（異煙肼）的基因突變，對(duì)耐多藥結(jié)核病做出快速診斷。23結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測(cè)試劑盒通量：兩個(gè)一線抗結(jié)核藥（MDR）基于rpoB（利福平五種結(jié)核檢測(cè)方法效果評(píng)價(jià)結(jié)核組：1260例非結(jié)核組：100例改良羅氏培養(yǎng)熒光PCR涂片法MGIT960快速培養(yǎng)結(jié)果比較斑點(diǎn)層析法五種結(jié)核檢測(cè)方法效果評(píng)價(jià)結(jié)核組：1260例非結(jié)核組：100例24敏感性、特異性比較敏感性、特異性比較25羅氏培養(yǎng)和快速培養(yǎng)羅氏培養(yǎng)和快速培養(yǎng)26快速培養(yǎng)和熒光PCR快速培養(yǎng)和熒光PCR27總結(jié)：涂片簡(jiǎn)單快速但陽(yáng)性率較低、難以區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)為金標(biāo)準(zhǔn)，但需時(shí)較長(zhǎng)血清學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)核抗原或抗體不太理想γ干擾素釋放試驗(yàn)?zāi)茌^好地為臨床服務(wù)熒光PCR檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌具有較好的敏感性和特異性，可結(jié)合傳統(tǒng)方法綜合分析總結(jié)：涂片簡(jiǎn)單快速但陽(yáng)性率較低、難以區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌28ThankYou!ThankYou!29全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結(jié)核分枝桿菌，有2000萬(wàn)活動(dòng)性肺結(jié)核患者，每年新發(fā)病例900萬(wàn)人，每秒鐘有1人感染結(jié)核，每年有300萬(wàn)人死于結(jié)核病。隨著抗結(jié)核藥物的不斷發(fā)展和衛(wèi)生生活狀況的改善，結(jié)核的發(fā)病率和死亡率曾一度大幅下降20世紀(jì)80年代后，由于艾滋病和結(jié)核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應(yīng)用、吸毒、貧困及人口流動(dòng)等因素，全球范圍內(nèi)結(jié)核病的疫情驟然惡化結(jié)核分枝桿菌30全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結(jié)核分枝桿菌，有2000萬(wàn)活動(dòng)性涂片鏡檢--抗酸染色抗酸染色是目前為止最快的結(jié)核檢出方法，可用來(lái)檢測(cè)病情進(jìn)展，為感染控制提供參考依據(jù)，可確證培養(yǎng)物為陽(yáng)性萋尼染色法—紅色—普通顯微鏡（高倍）熒光染色—黃或橘色—熒光顯微鏡（低倍）聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！涂片鏡檢--抗酸染色抗酸染色是目前為止最快的結(jié)核檢出方法，可31抗酸染色局限性抗酸染色對(duì)分枝桿菌非特異，其他如Nocardia（奴卡）、Rhodococcus（紅球菌屬）、Legionellamicdadei（軍團(tuán)菌）、cryptosporidium（隱孢子蟲）、Isospora（等孢球蟲）等有抗酸菌特點(diǎn)不能區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌不能區(qū)分活菌和死菌敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000條菌時(shí)可檢出，而培養(yǎng)可檢出>10-100條菌.抗酸染色局限性抗酸染色對(duì)分枝桿菌非特異，其他如Nocardi32發(fā)光二極管熒光顯微鏡（LED）熒光顯微鏡成本高、易損壞、耗電量大、光源壽命短、顯微鏡價(jià)格昂貴且需要在暗室內(nèi)工作等，熒光染色法一直沒有在結(jié)核病痰涂片診斷中得到廣泛的應(yīng)用。只需將二極管替換普通光學(xué)顯微鏡的目鏡就相當(dāng)于一臺(tái)熒光顯微鏡，組裝的“熒光顯微鏡”結(jié)合金胺O染色在結(jié)核病痰涂片檢查中有一定的應(yīng)用價(jià)值。田斌等，發(fā)光二極管熒光顯微鏡在基層實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)核分枝桿菌的應(yīng)用評(píng)價(jià).實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2012年10月第19卷第10期.發(fā)光二極管熒光顯微鏡（LED）熒光顯微鏡成本高、易損壞、耗電33靈敏度：103個(gè)菌/反應(yīng)聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！檢測(cè)范圍：結(jié)核、胞內(nèi)、鳥、戈登、堪薩斯、偶然、瘰疬、淺黃、土、龜-膿腫、草、不產(chǎn)色、海-潰瘍、金色、蘇爾加、蟾蜍、恥垢。高效：同時(shí)檢測(cè)17種分枝桿菌（包括TB）菌落粗糙型，表面干燥成顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，菜花樣細(xì)胞壁中含有大量脂質(zhì)而不易著色，特別是有按生長(zhǎng)速度可分為三類，即緩慢生長(zhǎng)菌、迅速生長(zhǎng)菌和不能培養(yǎng)菌三種類型隨著抗結(jié)核藥物的不斷發(fā)展和衛(wèi)生生活狀況的改善，結(jié)核的發(fā)病率和死亡率曾一度大幅下降結(jié)核分枝桿菌屬于緩慢生長(zhǎng)分支桿菌bovis）、非洲分支桿菌（M.全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結(jié)核分枝桿菌，有2000萬(wàn)活動(dòng)性肺結(jié)核患者，每年新發(fā)病例900萬(wàn)人，每秒鐘有1人感染結(jié)核，每年有300萬(wàn)人死于結(jié)核病。熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色2、分枝桿菌快速液體培養(yǎng)技術(shù)不能區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌其他非典型分枝桿菌多為緩慢生長(zhǎng)型分枝狀，無(wú)芽孢和鞭毛，因衰老或抗結(jié)核藥物的羅氏培養(yǎng)+分枝桿菌快速培養(yǎng)分枝狀，無(wú)芽孢和鞭毛，因衰老或抗結(jié)核藥物的結(jié)核分枝桿菌屬于緩慢生長(zhǎng)分支桿菌快速：＞4周（菌種鑒定）6小時(shí)實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2012年10月第19卷第10期.涂片簡(jiǎn)單快速但陽(yáng)性率較低、難以區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌免疫學(xué)檢測(cè)方法1、結(jié)核菌素試驗(yàn)凡感染過(guò)結(jié)核桿菌的機(jī)體，會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的致敏淋巴細(xì)胞，具有對(duì)結(jié)核桿菌的識(shí)別能力，當(dāng)再次遇到通過(guò)皮膚注入的少量的結(jié)核菌素時(shí)，致敏Ｔ淋巴細(xì)胞受相同抗原再次刺激會(huì)在48-72小時(shí)內(nèi)，產(chǎn)生局部炎癥反應(yīng)，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽(yáng)性反應(yīng)。對(duì)活動(dòng)性結(jié)核的診斷靈敏度高達(dá)77％，靈敏度：103個(gè)菌/反應(yīng)免疫學(xué)檢測(cè)方法1、結(jié)核菌素試驗(yàn)34全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結(jié)核分枝桿菌，有2000萬(wàn)活動(dòng)性肺結(jié)核患者，每年新發(fā)病例900萬(wàn)人，每秒鐘有1人感染結(jié)核，每年有300萬(wàn)人死于結(jié)核病。實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2012年10月第19卷第10期.結(jié)核分枝桿菌屬于緩慢生長(zhǎng)分支桿菌偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜亞種、龜分枝桿菌膿腫亞種屬于迅速生長(zhǎng)型，雞蛋培養(yǎng)基上3-5天可見菌落高效：一個(gè)樣本可同時(shí)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌和NTM高效：同時(shí)檢測(cè)17種分枝桿菌（包括TB）快速：＞4周（菌種鑒定）6小時(shí)聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！要確定是否為結(jié)核菌．需結(jié)合分枝桿菌菌種鑒定和藥物敏感性試驗(yàn)?？焖伲海?周（菌種鑒定）6小時(shí)分枝狀，無(wú)芽孢和鞭毛，因衰老或抗結(jié)核藥物的需要4～6周才能檢測(cè)到結(jié)核菌的生長(zhǎng)．而且陽(yáng)性率也只有30％-40％；熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色熒光染色—黃或橘色—熒光顯微鏡（低倍）熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色20世紀(jì)80年代后，由于艾滋病和結(jié)核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應(yīng)用、吸毒、貧困及人口流動(dòng)等因素，全球范圍內(nèi)結(jié)核病的疫情驟然惡化速度：8周（藥敏）6小時(shí)靈敏：103個(gè)菌/反應(yīng)對(duì)活動(dòng)性結(jié)核的診斷靈敏度高達(dá)77％，凡感染過(guò)結(jié)核桿菌的機(jī)體，會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的致敏淋巴細(xì)胞，具有對(duì)結(jié)核桿菌的識(shí)別能力，當(dāng)再次遇到通過(guò)皮膚注入的少量的結(jié)核菌素時(shí)，致敏Ｔ淋巴細(xì)胞受相同抗原再次刺激會(huì)在48-72小時(shí)內(nèi)，產(chǎn)生局部炎癥反應(yīng)，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽(yáng)性反應(yīng)。接種過(guò)卡介苗的人也會(huì)產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測(cè)凡感染過(guò)結(jié)核桿菌的機(jī)體，會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的致敏淋巴細(xì)胞，具有對(duì)結(jié)核桿菌的識(shí)別能力，當(dāng)再次遇到通過(guò)皮膚注入的少量的結(jié)核菌素時(shí)，致敏Ｔ淋巴細(xì)胞受相同抗原再次刺激會(huì)在48-72小時(shí)內(nèi)，產(chǎn)生局部炎癥反應(yīng)，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽(yáng)性反應(yīng)。對(duì)活動(dòng)性結(jié)核的診斷靈敏度高達(dá)77％，實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2012年10月第19卷第10期.20世紀(jì)80年代后，由于艾滋病和結(jié)核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應(yīng)用、吸毒、貧困及人口流動(dòng)等因素，全球范圍內(nèi)結(jié)核病的疫情驟然惡化敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000條菌時(shí)可檢出，而培養(yǎng)可檢出>10-100條菌.20世紀(jì)80年代后，由于艾滋病和結(jié)核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應(yīng)用、吸毒、貧困及人口流動(dòng)等因素，全球范圍內(nèi)結(jié)核病的疫情驟然惡化專性需氧，3%-5%CO2能促進(jìn)其生長(zhǎng)最適溫度為35-37℃，最適pH為6.大量分枝菌酸包圍在肽聚糖層的外面，一般血清學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)核抗原或抗體不太理想液體培養(yǎng)：菌體與培養(yǎng)基充分接觸，生長(zhǎng)迅速，但易受到污染抗酸染色是目前為止最快的結(jié)核檢出方法，可用來(lái)檢測(cè)病情進(jìn)展，為感染控制提供參考依據(jù)，可確證培養(yǎng)物為陽(yáng)性結(jié)核分枝桿菌為細(xì)長(zhǎng)略帶彎曲的桿菌，有時(shí)可見靈敏：103個(gè)菌/反應(yīng)leprae）是麻風(fēng)病的病原體，也是抗酸桿菌，但較結(jié)核分枝桿菌短而粗，兩端尖細(xì)，抗酸染色著色均勻，呈束狀或團(tuán)狀排列，結(jié)核分枝桿菌多散在，偶有聚集。結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測(cè)分枝狀，無(wú)芽孢和鞭毛，因衰老或抗結(jié)核藥物的實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2012年10月第19卷第10期.不能區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌結(jié)核分枝桿菌為細(xì)長(zhǎng)略帶彎曲的桿菌，有時(shí)可見小兒結(jié)核、老年人結(jié)核、免疫缺陷或免疫功能低下患者（如合并HIV感染、接受免疫抑制劑治療的患者)萋尼染色呈紅色，背景為藍(lán)色；目前市售兩種，QFT-G和T-SPOT.大量分枝菌酸包圍在肽聚糖層的外面，一般目前市售兩種，QFT-G和T-SPOT.熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色接種過(guò)卡介苗的人也會(huì)產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)高效：一個(gè)樣本可同時(shí)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌和NTM偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜/膿腫、胞內(nèi)分枝桿菌、鳥分枝桿菌、戈登分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、偶然分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌、淺黃分枝桿菌、土分枝桿菌、草分枝桿菌、不產(chǎn)色分枝桿菌、海-潰瘍分枝桿菌、金色分枝桿菌、蘇爾加分枝桿菌、蟾蜍分枝桿菌等熒光顯微鏡成本高、易損壞、耗電量大、光源壽命短、顯微鏡價(jià)格昂貴且需要在暗室內(nèi)工作等，熒光染色法一直沒有在結(jié)核病痰涂片診斷中得到廣泛的應(yīng)用。20世紀(jì)80年代后，由于艾滋病和結(jié)核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應(yīng)用、吸毒、貧困及人口流動(dòng)等因素，全球范圍內(nèi)結(jié)核病的疫情驟然惡化液體培養(yǎng)：菌體與培養(yǎng)基充分接觸，生長(zhǎng)迅速，但易受到污染快速：＞4周（菌種鑒定）6小時(shí)凡感染過(guò)結(jié)核桿菌的機(jī)體，會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的致敏淋巴細(xì)胞，具有對(duì)結(jié)核桿菌的識(shí)別能力，當(dāng)再次遇到通過(guò)皮膚注入的少量的結(jié)核菌素時(shí)，致敏Ｔ淋巴細(xì)胞受相同抗原再次刺激會(huì)在48-72小時(shí)內(nèi)，產(chǎn)生局部炎癥反應(yīng)，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽(yáng)性反應(yīng)。偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜/膿腫、胞內(nèi)分枝桿菌、鳥分枝桿菌、戈登分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、偶然分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌、淺黃分枝桿菌、土分枝桿菌、草分枝桿菌、不產(chǎn)色分枝桿菌、海-潰瘍分枝桿菌、金色分枝桿菌、蘇爾加分枝桿菌、蟾蜍分枝桿菌等2、分枝桿菌快速液體培養(yǎng)技術(shù)分枝狀，無(wú)芽孢和鞭毛，因衰老或抗結(jié)核藥物的20世紀(jì)80年代后，由于艾滋病和結(jié)核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應(yīng)用、吸毒、貧困及人口流動(dòng)等因素，全球范圍內(nèi)結(jié)核病的疫情驟然惡化實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2012年10月第19卷第10期.全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結(jié)核分枝桿菌，有2000萬(wàn)活動(dòng)性肺結(jié)核患者，每年新發(fā)病例900萬(wàn)人，每秒鐘有1人感染結(jié)核，每年有300萬(wàn)人死于結(jié)核病?？顾崛旧悄壳盀橹棺羁斓慕Y(jié)核檢出方法，可用來(lái)檢測(cè)病情進(jìn)展，為感染控制提供參考依據(jù)，可確證培養(yǎng)物為陽(yáng)性TB更靈敏但QFT-G更特異，但均優(yōu)于結(jié)核菌素試驗(yàn)，同時(shí)也被推薦用于潛伏結(jié)核診斷。凡感染過(guò)結(jié)核桿菌的機(jī)體，會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的致敏淋巴細(xì)胞，具有對(duì)結(jié)核桿菌的識(shí)別能力，當(dāng)再次遇到通過(guò)皮膚注入的少量的結(jié)核菌素時(shí)，致敏Ｔ淋巴細(xì)胞受相同抗原再次刺激會(huì)在48-72小時(shí)內(nèi)，產(chǎn)生局部炎癥反應(yīng)，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽(yáng)性反應(yīng)。速度：8周（藥敏）6小時(shí)靈敏：103個(gè)菌/反應(yīng)接種過(guò)卡介苗的人也會(huì)產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000條菌時(shí)可檢出，而培養(yǎng)可檢出>10-100條菌.聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！發(fā)光二極管熒光顯微鏡（LED）快速：＞4周（菌種鑒定）6小時(shí)接種過(guò)卡介苗的人也會(huì)產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)對(duì)活動(dòng)性結(jié)核的診斷靈敏度高達(dá)77％，研究、應(yīng)用報(bào)道較多的結(jié)核病基因診斷技術(shù)主要包括聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、核酸探針雜交、DNA序列測(cè)定、基因芯片、基因分型等。聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜亞種、龜分枝桿菌膿腫亞種屬于迅速生長(zhǎng)型，雞蛋培養(yǎng)基上3-5天可見菌落偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜亞種、龜分枝桿菌膿腫亞種屬于迅速生長(zhǎng)型，雞蛋培養(yǎng)基上3-5天可見菌落作用可出現(xiàn)多形態(tài)，如球狀、串珠狀或絲狀，結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測(cè)分枝狀，無(wú)芽孢和鞭毛，因衰老或抗結(jié)核藥物的MGIT960快速培養(yǎng)敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000條菌時(shí)可檢出，而培養(yǎng)可檢出>10-100條菌.萋尼染色呈紅色，背景為藍(lán)色；20世紀(jì)80年代后，由于艾滋病和結(jié)核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應(yīng)用、吸毒、貧困及人口流動(dòng)等因素，全球范圍內(nèi)結(jié)核病的疫情驟然惡化小兒結(jié)核、老年人結(jié)核、免疫缺陷或免疫功能低下患者（如合并HIV感染、接受免疫抑制劑治療的患者)熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色結(jié)核菌培養(yǎng)仍是目前診斷的金標(biāo)準(zhǔn)．尤其是藥敏試驗(yàn)結(jié)果在指導(dǎo)臨床用藥及耐藥性檢測(cè)等方面具有重要作用,是鑒定是否為活菌的可靠方法．熒光染色—黃或橘色—熒光顯微鏡（低倍）快速：4周（菌培）3小時(shí)leprae）是麻風(fēng)病的病原體，也是抗酸桿菌，但較結(jié)核分枝桿菌短而粗，兩端尖細(xì)，抗酸染色著色均勻，呈束狀或團(tuán)狀排列，結(jié)核分枝桿菌多散在，偶有聚集。聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！結(jié)核分枝桿菌為細(xì)長(zhǎng)略帶彎曲的桿菌，有時(shí)可見20世紀(jì)80年代后，由于艾滋病和結(jié)核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應(yīng)用、吸毒、貧困及人口流動(dòng)等因素，全球范圍內(nèi)結(jié)核病的疫情驟然惡化速度：8周（藥敏）6小時(shí)快速：＞4周（菌種鑒定）6小時(shí)分枝桿菌分子診斷系統(tǒng)（協(xié)和醫(yī)院）結(jié)核分枝桿菌屬于緩慢生長(zhǎng)分支桿菌對(duì)活動(dòng)性結(jié)核的診斷靈敏度高達(dá)77％，分枝狀，無(wú)芽孢和鞭毛，因衰老或抗結(jié)核藥物的凡感染過(guò)結(jié)核桿菌的機(jī)體，會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的致敏淋巴細(xì)胞，具有對(duì)結(jié)核桿菌的識(shí)別能力，當(dāng)再次遇到通過(guò)皮膚注入的少量的結(jié)核菌素時(shí)，致敏Ｔ淋巴細(xì)胞受相同抗原再次刺激會(huì)在48-72小時(shí)內(nèi)，產(chǎn)生局部炎癥反應(yīng)，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽(yáng)性反應(yīng)。營(yíng)養(yǎng)要求高，必須在含血清，卵黃，馬鈴薯，甘油及無(wú)機(jī)鹽類的特殊培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，常用的有羅氏固體培養(yǎng)基接種過(guò)卡介苗的人也會(huì)產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜/膿腫、胞內(nèi)分枝桿菌、鳥分枝桿菌、戈登分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、偶然分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌、淺黃分枝桿菌、土分枝桿菌、草分枝桿菌、不產(chǎn)色分枝桿菌、海-潰瘍分枝桿菌、金色分枝桿菌、蘇爾加分枝桿菌、蟾蜍分枝桿菌等分枝狀，無(wú)芽孢和鞭毛，因衰老或抗結(jié)核藥物的2、分枝桿菌快速液體培養(yǎng)技術(shù)基于rpoB（利福平）和katG/inhA（異煙肼）的基因突變，對(duì)耐多藥結(jié)核病做出快速診斷。熒光染色—黃或橘色—熒光顯微鏡（低倍）分枝狀，無(wú)芽孢和鞭毛，因衰老或抗結(jié)核藥物的20世紀(jì)80年代后，由于艾滋病和結(jié)核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應(yīng)用、吸毒、貧困及人口流動(dòng)等因素，全球范圍內(nèi)結(jié)核病的疫情驟然惡化africanum）和田鼠分枝桿菌（M.快速培養(yǎng)和熒光PCR全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結(jié)核分枝桿菌，有2000萬(wàn)活動(dòng)性35分枝桿菌屬一類細(xì)長(zhǎng)略帶彎曲，有時(shí)呈分枝狀的桿菌，本屬細(xì)菌多具有抗酸性，又稱抗酸桿菌（acid-fastbacillus），細(xì)菌體內(nèi)含有分枝菌酸，細(xì)胞壁含有大量脂類，這與分枝桿菌的染色性、抵抗力和致病性等密切相關(guān)。本屬細(xì)菌已經(jīng)被鑒定的有70多種，可分為三大類：結(jié)核分枝桿菌、非典型分枝桿菌、麻風(fēng)分枝桿菌；按生長(zhǎng)速度可分為三類，即緩慢生長(zhǎng)菌、迅速生長(zhǎng)菌和不能培養(yǎng)菌三種類型分枝桿菌屬一類細(xì)長(zhǎng)略帶彎曲，有時(shí)呈分枝狀的桿菌，本屬細(xì)菌多具36結(jié)核分枝桿菌群結(jié)核分枝桿菌，是人和動(dòng)物結(jié)核病的病原體，包括人結(jié)核分枝桿菌（Mycobacteriumtuberculosis）、牛分支桿菌（M.bovis）、非洲分支桿菌（M.africanum）和田鼠分枝桿菌（M.microti），前三種對(duì)人類治病，其中人型結(jié)核分枝桿菌感染發(fā)病率最高。結(jié)核分枝桿菌屬于緩慢生長(zhǎng)分支桿菌結(jié)核分枝桿菌群結(jié)核分枝桿菌，是人和動(dòng)物結(jié)核病的病原體，包括人37非典型分枝桿菌偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜/膿腫、胞內(nèi)分枝桿菌、鳥分枝桿菌、戈登分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、偶然分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌、淺黃分枝桿菌、土分枝桿菌、草分枝桿菌、不產(chǎn)色分枝桿菌、海-潰瘍分枝桿菌、金色分枝桿菌、蘇爾加分枝桿菌、蟾蜍分枝桿菌等偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜亞種、龜分枝桿菌膿腫亞種屬于迅速生長(zhǎng)型，雞蛋培養(yǎng)基上3-5天可見菌落其他非典型分枝桿菌多為緩慢生長(zhǎng)型非典型分枝桿菌偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜/膿腫、胞內(nèi)分枝桿菌38麻風(fēng)分枝桿菌麻風(fēng)分枝桿菌（M.leprae）是麻風(fēng)病的病原體，也是抗酸桿菌，但較結(jié)核分枝桿菌短而粗，兩端尖細(xì)，抗酸染色著色均勻，呈束狀或團(tuán)狀排列，結(jié)核分枝桿菌多散在，偶有聚集。為典型的胞內(nèi)寄生菌，有麻風(fēng)桿菌存在的細(xì)胞胞漿呈泡沫狀，稱麻風(fēng)細(xì)胞。體外不能培養(yǎng)。麻風(fēng)分枝桿菌麻風(fēng)分枝桿菌（M.leprae）是麻風(fēng)病的病原體39全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結(jié)核分枝桿菌，有2000萬(wàn)活動(dòng)性肺結(jié)核患者，每年新發(fā)病例900萬(wàn)人，每秒鐘有1人感染結(jié)核，每年有300萬(wàn)人死于結(jié)核病。隨著抗結(jié)核藥物的不斷發(fā)展和衛(wèi)生生活狀況的改善，結(jié)核的發(fā)病率和死亡率曾一度大幅下降20世紀(jì)80年代后，由于艾滋病和結(jié)核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應(yīng)用、吸毒、貧困及人口流動(dòng)等因素，全球范圍內(nèi)結(jié)核病的疫情驟然惡化結(jié)核分枝桿菌40全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結(jié)核分枝桿菌，有2000萬(wàn)活動(dòng)性生物學(xué)形狀結(jié)核分枝桿菌為細(xì)長(zhǎng)略帶彎曲的桿菌，有時(shí)可見分枝狀，無(wú)芽孢和鞭毛，因衰老或抗結(jié)核藥物的作用可出現(xiàn)多形態(tài)，如球狀、串珠狀或絲狀，大小為1～4X0.4μm。細(xì)胞壁中含有大量脂質(zhì)而不易著色，特別是有大量分枝菌酸包圍在肽聚糖層的外面，一般用抗酸染色。萋尼染色呈紅色，背景為藍(lán)色；熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色生物學(xué)形狀結(jié)核分枝桿菌為細(xì)長(zhǎng)略帶彎曲的桿菌，有時(shí)可見細(xì)胞壁中41培養(yǎng)特性培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)要求高，必須在含血清，卵黃，馬鈴薯，甘油及無(wú)機(jī)鹽類的特殊培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，常用的有羅氏固體培養(yǎng)基培養(yǎng)條件專性需氧，3%-5%CO2能促進(jìn)其生長(zhǎng)最適溫度為35-37℃，最適pH為6.5-6.8菌落特點(diǎn)菌落粗糙型，表面干燥成顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，菜花樣42培養(yǎng)特性培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)要求高，必須在含血清，卵黃，馬鈴薯，甘油及細(xì)胞壁中含有大量脂質(zhì)而不易著色，特別是有實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2012年10月第19卷第10期.結(jié)核分枝桿菌屬于緩慢生長(zhǎng)分支桿菌BD公司推出的BACTEC—MGIT960全自動(dòng)分枝桿菌培養(yǎng)，鑒定／藥敏系統(tǒng)，操作簡(jiǎn)便，陽(yáng)性標(biāo)本檢出時(shí)間平均為9d：鑒定、藥敏試驗(yàn)時(shí)間平均為4d：陽(yáng)性標(biāo)本檢出率比傳統(tǒng)固體培養(yǎng)提高10％左右速度：8周（藥敏）6小時(shí)分枝狀，無(wú)芽孢和鞭毛，因衰老或抗結(jié)核藥物的20世紀(jì)80年代后，由于艾滋病和結(jié)核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應(yīng)用、吸毒、貧困及人口流動(dòng)等因素，全球范圍內(nèi)結(jié)核病的疫情驟然惡化接種過(guò)卡介苗的人也會(huì)產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)快速：4周（菌培）3小時(shí)實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2012年10月第19卷第10期.接種過(guò)卡介苗的人也會(huì)產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結(jié)核分枝桿菌，有2000萬(wàn)活動(dòng)性肺結(jié)核患者，每年新發(fā)病例900萬(wàn)人，每秒鐘有1人感染結(jié)核，每年有300萬(wàn)人死于結(jié)核病。實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2012年10月第19卷第10期.偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜/膿腫、胞內(nèi)分枝桿菌、鳥分枝桿菌、戈登分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、偶然分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌、淺黃分枝桿菌、土分枝桿菌、草分枝桿菌、不產(chǎn)色分枝桿菌、海-潰瘍分枝桿菌、金色分枝桿菌、蘇爾加分枝桿菌、蟾蜍分枝桿菌等涂片簡(jiǎn)單快速但陽(yáng)性率較低、難以區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌菌落粗糙型，表面干燥成顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，菜花樣凡感染過(guò)結(jié)核桿菌的機(jī)體，會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的致敏淋巴細(xì)胞，具有對(duì)結(jié)核桿菌的識(shí)別能力，當(dāng)再次遇到通過(guò)皮膚注入的少量的結(jié)核菌素時(shí)，致敏Ｔ淋巴細(xì)胞受相同抗原再次刺激會(huì)在48-72小時(shí)內(nèi)，產(chǎn)生局部炎癥反應(yīng)，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽(yáng)性反應(yīng)。結(jié)核分枝桿菌屬于緩慢生長(zhǎng)分支桿菌聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法

萋尼染色+熒光染色

羅氏培養(yǎng)+分枝桿菌快速培養(yǎng)

抗原抗體檢測(cè)

細(xì)胞因子檢測(cè)

熒光定量PCR

芯片雜交

病原學(xué)

免疫學(xué)

分子生物學(xué)細(xì)胞壁中含有大量脂質(zhì)而不易著色，特別是有實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法萋尼43涂片鏡檢--抗酸染色抗酸染色是目前為止最快的結(jié)核檢出方法，可用來(lái)檢測(cè)病情進(jìn)展，為感染控制提供參考依據(jù)，可確證培養(yǎng)物為陽(yáng)性萋尼染色法—紅色—普通顯微鏡（高倍）熒光染色—黃或橘色—熒光顯微鏡（低倍）聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！涂片鏡檢--抗酸染色抗酸染色是目前為止最快的結(jié)核檢出方法，可44抗酸染色局限性抗酸染色對(duì)分枝桿菌非特異，其他如Nocardia（奴卡）、Rhodococcus（紅球菌屬）、Legionellamicdadei（軍團(tuán)菌）、cryptosporidium（隱孢子蟲）、Isospora（等孢球蟲）等有抗酸菌特點(diǎn)不能區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌不能區(qū)分活菌和死菌敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000條菌時(shí)可檢出，而培養(yǎng)可檢出>10-100條菌.抗酸染色局限性抗酸染色對(duì)分枝桿菌非特異，其他如Nocardi45營(yíng)養(yǎng)要求高，必須在含血清，卵黃，馬鈴薯，甘油及無(wú)機(jī)鹽類的特殊培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，常用的有羅氏固體培養(yǎng)基2、分枝桿菌快速液體培養(yǎng)技術(shù)分枝桿菌分子診斷系統(tǒng)（協(xié)和醫(yī)院）研究、應(yīng)用報(bào)道較多的結(jié)核病基因診斷技術(shù)主要包括聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、核酸探針雜交、DNA序列測(cè)定、基因芯片、基因分型等。大量分枝菌酸包圍在肽聚糖層的外面，一般結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測(cè)熒光顯微鏡成本高、易損壞、耗電量大、光源壽命短、顯微鏡價(jià)格昂貴且需要在暗室內(nèi)工作等，熒光染色法一直沒有在結(jié)核病痰涂片診斷中得到廣泛的應(yīng)用。不能區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌接種過(guò)卡介苗的人也會(huì)產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2012年10月第19卷第10期.大量分枝菌酸包圍在肽聚糖層的外面，一般抗酸染色是目前為止最快的結(jié)核檢出方法，可用來(lái)檢測(cè)病情進(jìn)展，為感染控制提供參考依據(jù)，可確證培養(yǎng)物為陽(yáng)性敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000條菌時(shí)可檢出，而培養(yǎng)可檢出>10-100條菌.結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測(cè)試劑盒液體培養(yǎng)：菌體與培養(yǎng)基充分接觸，生長(zhǎng)迅速，但易受到污染不能區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌高效：同時(shí)檢測(cè)17種分枝桿菌（包括TB）聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色高效：同時(shí)檢測(cè)17種分枝桿菌（包括TB）要確定是否為結(jié)核菌．需結(jié)合分枝桿菌菌種鑒定和藥物敏感性試驗(yàn)。實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2012年10月第19卷第10期.發(fā)光二極管熒光顯微鏡（LED）熒光顯微鏡成本高、易損壞、耗電量大、光源壽命短、顯微鏡價(jià)格昂貴且需要在暗室內(nèi)工作等，熒光染色法一直沒有在結(jié)核病痰涂片診斷中得到廣泛的應(yīng)用。只需將二極管替換普通光學(xué)顯微鏡的目鏡就相當(dāng)于一臺(tái)熒光顯微鏡，組裝的“熒光顯微鏡”結(jié)合金胺O染色在結(jié)核病痰涂片檢查中有一定的應(yīng)用價(jià)值。田斌等，發(fā)光二極管熒光顯微鏡在基層實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)核分枝桿菌的應(yīng)用評(píng)價(jià).實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2012年10月第19卷第10期.營(yíng)養(yǎng)要求高，必須在含血清，卵黃，馬鈴薯，甘油及無(wú)機(jī)鹽類的特殊46分枝桿菌培養(yǎng)技術(shù)結(jié)核菌培養(yǎng)仍是目前診斷的金標(biāo)準(zhǔn)．尤其是藥敏試驗(yàn)結(jié)果在指導(dǎo)臨床用藥及耐藥性檢測(cè)等方面具有重要作用,是鑒定是否為活菌的可靠方法．1、傳統(tǒng)的固態(tài)培養(yǎng)法

需要4～6周才能檢測(cè)到結(jié)核菌的生長(zhǎng)．而且陽(yáng)性率也只有30％-40％；特異性差．各種分枝桿菌均可生長(zhǎng)。要確定是否為結(jié)核菌．需結(jié)合分枝桿菌菌種鑒定和藥物敏感性試驗(yàn)。分枝桿菌培養(yǎng)技術(shù)結(jié)核菌培養(yǎng)仍是目前診斷的金標(biāo)準(zhǔn)．尤其是藥敏試472、分枝桿菌快速液體培養(yǎng)技術(shù)BD公司推出的BACTEC—MGIT960全自動(dòng)分枝桿菌培養(yǎng)，鑒定／藥敏系統(tǒng)，操作簡(jiǎn)便，陽(yáng)性標(biāo)本檢出時(shí)間平均為9d：鑒定、藥敏試驗(yàn)時(shí)間平均為4d：陽(yáng)性標(biāo)本檢出率比傳統(tǒng)固體培養(yǎng)提高10％左右2、分枝桿菌快速液體培養(yǎng)技術(shù)48固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)優(yōu)缺點(diǎn)固體培養(yǎng)：污染少，易于進(jìn)行菌落形態(tài)觀察，但是培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)液體培養(yǎng)：菌體與培養(yǎng)基充分接觸，生長(zhǎng)迅速，但易受到污染固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)優(yōu)缺點(diǎn)49血清學(xué)試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)50免疫學(xué)檢測(cè)方法1、結(jié)核菌素試驗(yàn)凡感染過(guò)結(jié)核桿菌的機(jī)體，會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的致敏淋巴細(xì)胞，具有對(duì)結(jié)核桿菌的識(shí)別能力，當(dāng)再次遇到通過(guò)皮膚注入的少量的結(jié)核菌素時(shí)，致敏Ｔ淋巴細(xì)胞受相同抗原再次刺激會(huì)在48-72小時(shí)內(nèi)，產(chǎn)生局部炎癥反應(yīng)，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽(yáng)性反應(yīng)。對(duì)活動(dòng)性結(jié)核的診斷靈敏度高達(dá)77％，免疫學(xué)檢測(cè)方法1、結(jié)核菌素試驗(yàn)51局限性：假陰性：小兒結(jié)核、老年人結(jié)核、免疫缺陷或免疫功能低下患者（如合并HIV感染、接受免疫抑制劑治療的患者)假陽(yáng)性：接種過(guò)卡介苗的人也會(huì)產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)局限性：假陰性：52γ干擾素釋放試驗(yàn)被認(rèn)為是近十年來(lái)結(jié)核診斷史上取得的最重要成就，該檢測(cè)方法的原理是：結(jié)核感染后體內(nèi)長(zhǎng)期存在抗原特異性的記憶性Ｔ細(xì)胞，當(dāng)再次遇到抗原刺激時(shí)，能迅速活化增值，釋放γ干擾素。目前市售兩種，QFT-G和T-SPOT.TB，比較兩種方法，T-SPOT.TB更靈敏但QFT-G更特異，但均優(yōu)于結(jié)核菌素試驗(yàn)，同時(shí)也被推薦用于潛伏結(jié)核診斷。γ干擾素釋放試驗(yàn)被認(rèn)為是近十年來(lái)結(jié)核診斷史上取得的最重要成就53分子生物學(xué)檢測(cè)方法近年來(lái)核酸擴(kuò)增技術(shù)和雜交分析技術(shù)的發(fā)展，為分枝桿菌的檢測(cè)、鑒定和藥敏實(shí)驗(yàn)提供了極大的方便，可將診斷時(shí)間從幾周降低到幾天。研究、應(yīng)用報(bào)道較多的結(jié)核病基因診斷技術(shù)主要包括聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、核酸探針雜交、DNA序列測(cè)定、基因芯片、基因分型等。分子生物學(xué)檢測(cè)方法近年來(lái)核酸擴(kuò)增技術(shù)和雜交分析技術(shù)的發(fā)展，為54分枝桿菌核酸檢測(cè)分枝桿菌菌種鑒定結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測(cè)MDR早期診斷分枝桿菌分子診斷系統(tǒng)（協(xié)和醫(yī)院）

菌種鑒定篩查、鑒別診斷實(shí)時(shí)熒光PCR基因芯片快速檢測(cè)平臺(tái)MDR早期診斷分枝桿菌分子診斷系統(tǒng)（協(xié)和醫(yī)院）

菌種鑒定篩查55高效：一個(gè)樣本可同時(shí)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌和NTM快速：4周（菌培）3小時(shí)靈敏：10個(gè)菌/反應(yīng)（TB）；102

個(gè)菌/反應(yīng)（NTM）56分枝桿菌核酸檢測(cè)功能：TB快速篩查；TB/NTM鑒別診斷高效：一個(gè)樣本可同時(shí)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌和NTM21分枝涂片簡(jiǎn)單快速但陽(yáng)性率較低、難以區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌接種過(guò)卡介苗的人也會(huì)產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)涂片簡(jiǎn)單快速但陽(yáng)性率較低、難以區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌凡感染過(guò)結(jié)核桿菌的機(jī)體，會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的致敏淋巴細(xì)胞，具有對(duì)結(jié)核桿菌的識(shí)別能力，當(dāng)再次遇到通過(guò)皮膚注入的少量的結(jié)核菌素時(shí)，致敏Ｔ淋巴細(xì)胞受相同抗原再次刺激會(huì)在48-72小時(shí)內(nèi)，產(chǎn)生局部炎癥反應(yīng)，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽(yáng)性反應(yīng)。接種過(guò)卡介苗的人也會(huì)產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測(cè)TB更靈敏但QFT-G更特異，但均優(yōu)于結(jié)核菌素試驗(yàn)，同時(shí)也被推薦用于潛伏結(jié)核診斷。熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色細(xì)胞壁中含有大量脂質(zhì)而不易著色，特別是有熒光染色—黃或橘色—熒光顯微鏡（低倍）抗酸染色對(duì)分枝桿菌非特異，其他如Nocardia（奴卡）、Rhodococcus（紅球菌屬）、Legionellamicdadei（軍團(tuán)菌）、cryptosporidium（隱孢子蟲）、Isospora（等孢球蟲）等有抗酸菌特點(diǎn)萋尼染色法—紅色—普通顯微鏡（高倍）靈敏：103個(gè)菌/反應(yīng)不能區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測(cè)熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！高效：一個(gè)樣本可同時(shí)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌和NTM凡感染過(guò)結(jié)核桿菌的機(jī)體，會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的致敏淋巴細(xì)胞，具有對(duì)結(jié)核桿菌的識(shí)別能力，當(dāng)再次遇到通過(guò)皮膚注入的少量的結(jié)核菌素時(shí)，致敏Ｔ淋巴細(xì)胞受相同抗原再次刺激會(huì)在48-72小時(shí)內(nèi)，產(chǎn)生局部炎癥反應(yīng)，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽(yáng)性反應(yīng)。五種結(jié)核檢測(cè)方法效果評(píng)價(jià)其他非典型分枝桿菌多為緩慢生長(zhǎng)型高效：同時(shí)檢測(cè)17種分枝桿菌（包括TB）快速：＞4周（菌種鑒定）6小時(shí)靈敏：

103

個(gè)菌/反應(yīng)檢測(cè)范圍：結(jié)核、胞內(nèi)、鳥、戈登、堪薩斯、偶然、瘰疬、淺黃、土、龜-膿腫、草、不產(chǎn)色、海-潰瘍、金色、蘇爾加、蟾蜍、恥垢。57分枝桿菌菌種鑒定（DNA微陣列芯片法）

涂片簡(jiǎn)單快速但陽(yáng)性率較低、難以區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌高通量：兩個(gè)一線抗結(jié)核藥（MDR）速度：8周（藥敏）6小時(shí)靈敏度：103

個(gè)菌/反應(yīng)基于rpoB（利福平）和katG/inhA（異煙肼）的基因突變，對(duì)耐多藥結(jié)核病做出快速診斷。58結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測(cè)試劑盒通量：兩個(gè)一線抗結(jié)核藥（MDR）基于rpoB（利福平五種結(jié)核檢測(cè)方法效果評(píng)價(jià)結(jié)核組：1260例非結(jié)核組：100例改良羅氏培養(yǎng)熒光PCR涂片法MGIT960快速培養(yǎng)結(jié)果比較斑點(diǎn)層析法五種結(jié)核檢測(cè)方法效果評(píng)價(jià)結(jié)核組：1260例非結(jié)核組：100例59敏感性、特異性比較敏感性、特異性比較60羅氏培養(yǎng)和快速培養(yǎng)羅氏培養(yǎng)和快速培養(yǎng)61快速培養(yǎng)和熒光PCR快速培養(yǎng)和熒光PCR62總結(jié)：涂片簡(jiǎn)單快速但陽(yáng)性率較低、難以區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)為金標(biāo)準(zhǔn)，但需時(shí)較長(zhǎng)血清學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)核抗原或抗體不太理想γ干擾素釋放試驗(yàn)?zāi)茌^好地為臨床服務(wù)熒光PCR檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌具有較好的敏感性和特異性，可結(jié)合傳統(tǒng)方法綜合分析總結(jié)：涂片簡(jiǎn)單快速但陽(yáng)性率較低、難以區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌63ThankYou!ThankYou!64全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結(jié)核分枝桿菌，有2000萬(wàn)活動(dòng)性肺結(jié)核患者，每年新發(fā)病例900萬(wàn)人，每秒鐘有1人感染結(jié)核，每年有300萬(wàn)人死于結(jié)核病。隨著抗結(jié)核藥物的不斷發(fā)展和衛(wèi)生生活狀況的改善，結(jié)核的發(fā)病率和死亡率曾一度大幅下降20世紀(jì)80年代后，由于艾滋病和結(jié)核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應(yīng)用、吸毒、貧困及人口流動(dòng)等因素，全球范圍內(nèi)結(jié)核病的疫情驟然惡化結(jié)核分枝桿菌65全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結(jié)核分枝桿菌，有2000萬(wàn)活動(dòng)性涂片鏡檢--抗酸染色抗酸染色是目前為止最快的結(jié)核檢出方法，可用來(lái)檢測(cè)病情進(jìn)展，為感染控制提供參考依據(jù)，可確證培養(yǎng)物為陽(yáng)性萋尼染色法—紅色—普通顯微鏡（高倍）熒光染色—黃或橘色—熒光顯微鏡（低倍）聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！涂片鏡檢--抗酸染色抗酸染色是目前為止最快的結(jié)核檢出方法，可66抗酸染色局限性抗酸染色對(duì)分枝桿菌非特異，其他如Nocardia（奴卡）、Rhodococcus（紅球菌屬）、Legionellamicdadei（軍團(tuán)菌）、cryptosporidium（隱孢子蟲）、Isospora（等孢球蟲）等有抗酸菌特點(diǎn)不能區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌不能區(qū)分活菌和死菌敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000條菌時(shí)可檢出，而培養(yǎng)可檢出>10-100條菌.抗酸染色局限性抗酸染色對(duì)分枝桿菌非特異，其他如Nocardi67發(fā)光二極管熒光顯微鏡（LED）熒光顯微鏡成本高、易損壞、耗電量大、光源壽命短、顯微鏡價(jià)格昂貴且需要在暗室內(nèi)工作等，熒光染色法一直沒有在結(jié)核病痰涂片診斷中得到廣泛的應(yīng)用。只需將二極管替換普通光學(xué)顯微鏡的目鏡就相當(dāng)于一臺(tái)熒光顯微鏡，組裝的“熒光顯微鏡”結(jié)合金胺O染色在結(jié)核病痰涂片檢查中有一定的應(yīng)用價(jià)值。田斌等，發(fā)光二極管熒光顯微鏡在基層實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)核分枝桿菌的應(yīng)用評(píng)價(jià).實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2012年10月第19卷第10期.發(fā)光二極管熒光顯微鏡（LED）熒光顯微鏡成本高、易損壞、耗電68靈敏度：103個(gè)菌/反應(yīng)聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！檢測(cè)范圍：結(jié)核、胞內(nèi)、鳥、戈登、堪薩斯、偶然、瘰疬、淺黃、土、龜-膿腫、草、不產(chǎn)色、海-潰瘍、金色、蘇爾加、蟾蜍、恥垢。高效：同時(shí)檢測(cè)17種分枝桿菌（包括TB）菌落粗糙型，表面干燥成顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，菜花樣細(xì)胞壁中含有大量脂質(zhì)而不易著色，特別是有按生長(zhǎng)速度可分為三類，即緩慢生長(zhǎng)菌、迅速生長(zhǎng)菌和不能培養(yǎng)菌三種類型隨著抗結(jié)核藥物的不斷發(fā)展和衛(wèi)生生活狀況的改善，結(jié)核的發(fā)病率和死亡率曾一度大幅下降結(jié)核分枝桿菌屬于緩慢生長(zhǎng)分支桿菌bovis）、非洲分支桿菌（M.全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結(jié)核分枝桿菌，有2000萬(wàn)活動(dòng)性肺結(jié)核患者，每年新發(fā)病例900萬(wàn)人，每秒鐘有1人感染結(jié)核，每年有300萬(wàn)人死于結(jié)核病。熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色2、分枝桿菌快速液體培養(yǎng)技術(shù)不能區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌其他非典型分枝桿菌多為緩慢生長(zhǎng)型分枝狀，無(wú)芽孢和鞭毛，因衰老或抗結(jié)核藥物的羅氏培養(yǎng)+分枝桿菌快速培養(yǎng)分枝狀，無(wú)芽孢和鞭毛，因衰老或抗結(jié)核藥物的結(jié)核分枝桿菌屬于緩慢生長(zhǎng)分支桿菌快速：＞4周（菌種鑒定）6小時(shí)實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2012年10月第19卷第10期.涂片簡(jiǎn)單快速但陽(yáng)性率較低、難以區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌免疫學(xué)檢測(cè)方法1、結(jié)核菌素試驗(yàn)凡感染過(guò)結(jié)核桿菌的機(jī)體，會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的致敏淋巴細(xì)胞，具有對(duì)結(jié)核桿菌的識(shí)別能力，當(dāng)再次遇到通過(guò)皮膚注入的少量的結(jié)核菌素時(shí)，致敏Ｔ淋巴細(xì)胞受相同抗原再次刺激會(huì)在48-72小時(shí)內(nèi)，產(chǎn)生局部炎癥反應(yīng)，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽(yáng)性反應(yīng)。對(duì)活動(dòng)性結(jié)核的診斷靈敏度高達(dá)77％，靈敏度：103個(gè)菌/反應(yīng)免疫學(xué)檢測(cè)方法1、結(jié)核菌素試驗(yàn)69全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結(jié)核分枝桿菌，有2000萬(wàn)活動(dòng)性肺結(jié)核患者，每年新發(fā)病例900萬(wàn)人，每秒鐘有1人感染結(jié)核，每年有300萬(wàn)人死于結(jié)核病。實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2012年10月第19卷第10期.結(jié)核分枝桿菌屬于緩慢生長(zhǎng)分支桿菌偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜亞種、龜分枝桿菌膿腫亞種屬于迅速生長(zhǎng)型，雞蛋培養(yǎng)基上3-5天可見菌落高效：一個(gè)樣本可同時(shí)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌和NTM高效：同時(shí)檢測(cè)17種分枝桿菌（包括TB）快速：＞4周（菌種鑒定）6小時(shí)聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！要確定是否為結(jié)核菌．需結(jié)合分枝桿菌菌種鑒定和藥物敏感性試驗(yàn)?？焖伲海?周（菌種鑒定）6小時(shí)分枝狀，無(wú)芽孢和鞭毛，因衰老或抗結(jié)核藥物的需要4～6周才能檢測(cè)到結(jié)核菌的生長(zhǎng)．而且陽(yáng)性率也只有30％-40％；熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色熒光染色—黃或橘色—熒光顯微鏡（低倍）熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色20世紀(jì)80年代后，由于艾滋病和結(jié)核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應(yīng)用、吸毒、貧困及人口流動(dòng)等因素，全球范圍內(nèi)結(jié)核病的疫情驟然惡化速度：8周（藥敏）6小時(shí)靈敏：103個(gè)菌/反應(yīng)對(duì)活動(dòng)性結(jié)核的診斷靈敏度高達(dá)77％，凡感染過(guò)結(jié)核桿菌的機(jī)體，會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的致敏淋巴細(xì)胞，具有對(duì)結(jié)核桿菌的識(shí)別能力，當(dāng)再次遇到通過(guò)皮膚注入的少量的結(jié)核菌素時(shí)，致敏Ｔ淋巴細(xì)胞受相同抗原再次刺激會(huì)在48-72小時(shí)內(nèi)，產(chǎn)生局部炎癥反應(yīng)，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽(yáng)性反應(yīng)。接種過(guò)卡介苗的人也會(huì)產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測(cè)凡感染過(guò)結(jié)核桿菌的機(jī)體，會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的致敏淋巴細(xì)胞，具有對(duì)結(jié)核桿菌的識(shí)別能力，當(dāng)再次遇到通過(guò)皮膚注入的少量的結(jié)核菌素時(shí)，致敏Ｔ淋巴細(xì)胞受相同抗原再次刺激會(huì)在48-72小時(shí)內(nèi)，產(chǎn)生局部炎癥反應(yīng)，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽(yáng)性反應(yīng)。對(duì)活動(dòng)性結(jié)核的診斷靈敏度高達(dá)77％，實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2012年10月第19卷第10期.20世紀(jì)80年代后，由于艾滋病和結(jié)核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應(yīng)用、吸毒、貧困及人口流動(dòng)等因素，全球范圍內(nèi)結(jié)核病的疫情驟然惡化敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000條菌時(shí)可檢出，而培養(yǎng)可檢出>10-100條菌.20世紀(jì)80年代后，由于艾滋病和結(jié)核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應(yīng)用、吸毒、貧困及人口流動(dòng)等因素，全球范圍內(nèi)結(jié)核病的疫情驟然惡化專性需氧，3%-5%CO2能促進(jìn)其生長(zhǎng)最適溫度為35-37℃，最適pH為6.大量分枝菌酸包圍在肽聚糖層的外面，一般血清學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)核抗原或抗體不太理想液體培養(yǎng)：菌體與培養(yǎng)基充分接觸，生長(zhǎng)迅速，但易受到污染抗酸染色是目前為止最快的結(jié)核檢出方法，可用來(lái)檢測(cè)病情進(jìn)展，為感染控制提供參考依據(jù)，可確證培養(yǎng)物為陽(yáng)性結(jié)核分枝桿菌為細(xì)長(zhǎng)略帶彎曲的桿菌，有時(shí)可見靈敏：103個(gè)菌/反應(yīng)leprae）是麻風(fēng)病的病原體，也是抗酸桿菌，但較結(jié)核分枝桿菌短而粗，兩端尖細(xì)，抗酸染色著色均勻，呈束狀或團(tuán)狀排列，結(jié)核分枝桿菌多散在，偶有聚集。結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測(cè)分枝狀，無(wú)芽孢和鞭毛，因衰老或抗結(jié)核藥物的實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)2012年10月第19卷第10期.不能區(qū)分結(jié)核和非結(jié)核分枝桿菌結(jié)核分枝桿菌為細(xì)長(zhǎng)略帶彎曲的桿菌，有時(shí)可見小兒結(jié)核、老年人結(jié)核、免疫缺陷或免疫功能低下患者（如合并HIV感染、接受免疫抑制劑治療的患者)萋尼染色呈紅色，背景為藍(lán)色；目前市售兩種，QFT-G和T-SPOT.大量分枝菌酸包圍在肽聚糖層的外面，一般目前市售兩種，QFT-G和T-SPOT.熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色接種過(guò)卡介苗的人也會(huì)產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)高效：一個(gè)樣本可同時(shí)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌和NTM偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜/膿腫、胞內(nèi)分枝桿菌、鳥分枝桿菌、戈登分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、偶然分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌、淺黃分枝桿菌、土分枝桿菌、草分枝桿菌、不產(chǎn)色分枝桿菌、海-