結核分枝桿菌實驗室檢測方法實用版課件

分枝桿菌屬一類細長略帶彎曲，有時呈分枝狀的桿菌，本屬細菌多具有抗酸性，又稱抗酸桿菌（acid-fastbacillus），細菌體內含有分枝菌酸，細胞壁含有大量脂類，這與分枝桿菌的染色性、抵抗力和致病性等密切相關。本屬細菌已經(jīng)被鑒定的有70多種，可分為三大類：結核分枝桿菌、非典型分枝桿菌、麻風分枝桿菌；按生長速度可分為三類，即緩慢生長菌、迅速生長菌和不能培養(yǎng)菌三種類型分枝桿菌屬一類細長略帶彎曲，有時呈分枝狀的桿菌，本屬細菌多具1結核分枝桿菌群結核分枝桿菌，是人和動物結核病的病原體，包括人結核分枝桿菌（Mycobacteriumtuberculosis）、牛分支桿菌（M.bovis）、非洲分支桿菌（M.africanum）和田鼠分枝桿菌（M.microti），前三種對人類治病，其中人型結核分枝桿菌感染發(fā)病率最高。結核分枝桿菌屬于緩慢生長分支桿菌結核分枝桿菌群結核分枝桿菌，是人和動物結核病的病原體，包括人2非典型分枝桿菌偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜/膿腫、胞內分枝桿菌、鳥分枝桿菌、戈登分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、偶然分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌、淺黃分枝桿菌、土分枝桿菌、草分枝桿菌、不產(chǎn)色分枝桿菌、海-潰瘍分枝桿菌、金色分枝桿菌、蘇爾加分枝桿菌、蟾蜍分枝桿菌等偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜亞種、龜分枝桿菌膿腫亞種屬于迅速生長型，雞蛋培養(yǎng)基上3-5天可見菌落其他非典型分枝桿菌多為緩慢生長型非典型分枝桿菌偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜/膿腫、胞內分枝桿菌3麻風分枝桿菌麻風分枝桿菌（M.leprae）是麻風病的病原體，也是抗酸桿菌，但較結核分枝桿菌短而粗，兩端尖細，抗酸染色著色均勻，呈束狀或團狀排列，結核分枝桿菌多散在，偶有聚集。為典型的胞內寄生菌，有麻風桿菌存在的細胞胞漿呈泡沫狀，稱麻風細胞。體外不能培養(yǎng)。麻風分枝桿菌麻風分枝桿菌（M.leprae）是麻風病的病原體4全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結核分枝桿菌，有2000萬活動性肺結核患者，每年新發(fā)病例900萬人，每秒鐘有1人感染結核，每年有300萬人死于結核病。隨著抗結核藥物的不斷發(fā)展和衛(wèi)生生活狀況的改善，結核的發(fā)病率和死亡率曾一度大幅下降20世紀80年代后，由于艾滋病和結核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應用、吸毒、貧困及人口流動等因素，全球范圍內結核病的疫情驟然惡化結核分枝桿菌5全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結核分枝桿菌，有2000萬活動性生物學形狀結核分枝桿菌為細長略帶彎曲的桿菌，有時可見分枝狀，無芽孢和鞭毛，因衰老或抗結核藥物的作用可出現(xiàn)多形態(tài)，如球狀、串珠狀或絲狀，大小為1～4X0.4μm。細胞壁中含有大量脂質而不易著色，特別是有大量分枝菌酸包圍在肽聚糖層的外面，一般用抗酸染色。萋尼染色呈紅色，背景為藍色；熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色生物學形狀結核分枝桿菌為細長略帶彎曲的桿菌，有時可見細胞壁中6培養(yǎng)特性培養(yǎng)基營養(yǎng)要求高，必須在含血清，卵黃，馬鈴薯，甘油及無機鹽類的特殊培養(yǎng)基上生長，常用的有羅氏固體培養(yǎng)基培養(yǎng)條件專性需氧，3%-5%CO2能促進其生長最適溫度為35-37℃，最適pH為6.5-6.8菌落特點菌落粗糙型，表面干燥成顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，菜花樣7培養(yǎng)特性培養(yǎng)基營養(yǎng)要求高，必須在含血清，卵黃，馬鈴薯，甘油及細胞壁中含有大量脂質而不易著色，特別是有實用預防醫(yī)學2012年10月第19卷第10期.結核分枝桿菌屬于緩慢生長分支桿菌BD公司推出的BACTEC—MGIT960全自動分枝桿菌培養(yǎng)，鑒定／藥敏系統(tǒng)，操作簡便，陽性標本檢出時間平均為9d：鑒定、藥敏試驗時間平均為4d：陽性標本檢出率比傳統(tǒng)固體培養(yǎng)提高10％左右速度：8周（藥敏）6小時分枝狀，無芽孢和鞭毛，因衰老或抗結核藥物的20世紀80年代后，由于艾滋病和結核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應用、吸毒、貧困及人口流動等因素，全球范圍內結核病的疫情驟然惡化接種過卡介苗的人也會產(chǎn)生陽性反應快速：4周（菌培）3小時實用預防醫(yī)學2012年10月第19卷第10期.接種過卡介苗的人也會產(chǎn)生陽性反應全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結核分枝桿菌，有2000萬活動性肺結核患者，每年新發(fā)病例900萬人，每秒鐘有1人感染結核，每年有300萬人死于結核病。實用預防醫(yī)學2012年10月第19卷第10期.偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜/膿腫、胞內分枝桿菌、鳥分枝桿菌、戈登分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、偶然分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌、淺黃分枝桿菌、土分枝桿菌、草分枝桿菌、不產(chǎn)色分枝桿菌、海-潰瘍分枝桿菌、金色分枝桿菌、蘇爾加分枝桿菌、蟾蜍分枝桿菌等涂片簡單快速但陽性率較低、難以區(qū)分結核和非結核分枝桿菌菌落粗糙型，表面干燥成顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，菜花樣凡感染過結核桿菌的機體，會產(chǎn)生相應的致敏淋巴細胞，具有對結核桿菌的識別能力，當再次遇到通過皮膚注入的少量的結核菌素時，致敏Ｔ淋巴細胞受相同抗原再次刺激會在48-72小時內，產(chǎn)生局部炎癥反應，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽性反應。結核分枝桿菌屬于緩慢生長分支桿菌聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！實驗室檢測方法

萋尼染色+熒光染色

羅氏培養(yǎng)+分枝桿菌快速培養(yǎng)

抗原抗體檢測

細胞因子檢測

熒光定量PCR

芯片雜交

病原學

免疫學

分子生物學細胞壁中含有大量脂質而不易著色，特別是有實驗室檢測方法萋尼8涂片鏡檢--抗酸染色抗酸染色是目前為止最快的結核檢出方法，可用來檢測病情進展，為感染控制提供參考依據(jù)，可確證培養(yǎng)物為陽性萋尼染色法—紅色—普通顯微鏡（高倍）熒光染色—黃或橘色—熒光顯微鏡（低倍）聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！涂片鏡檢--抗酸染色抗酸染色是目前為止最快的結核檢出方法，可9抗酸染色局限性抗酸染色對分枝桿菌非特異，其他如Nocardia（奴卡）、Rhodococcus（紅球菌屬）、Legionellamicdadei（軍團菌）、cryptosporidium（隱孢子蟲）、Isospora（等孢球蟲）等有抗酸菌特點不能區(qū)分結核和非結核分枝桿菌不能區(qū)分活菌和死菌敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000條菌時可檢出，而培養(yǎng)可檢出>10-100條菌.抗酸染色局限性抗酸染色對分枝桿菌非特異，其他如Nocardi10營養(yǎng)要求高，必須在含血清，卵黃，馬鈴薯，甘油及無機鹽類的特殊培養(yǎng)基上生長，常用的有羅氏固體培養(yǎng)基2、分枝桿菌快速液體培養(yǎng)技術分枝桿菌分子診斷系統(tǒng)（協(xié)和醫(yī)院）研究、應用報道較多的結核病基因診斷技術主要包括聚合酶鏈反應(PCR)、核酸探針雜交、DNA序列測定、基因芯片、基因分型等。大量分枝菌酸包圍在肽聚糖層的外面，一般結核分枝桿菌耐藥基因檢測熒光顯微鏡成本高、易損壞、耗電量大、光源壽命短、顯微鏡價格昂貴且需要在暗室內工作等，熒光染色法一直沒有在結核病痰涂片診斷中得到廣泛的應用。不能區(qū)分結核和非結核分枝桿菌接種過卡介苗的人也會產(chǎn)生陽性反應實用預防醫(yī)學2012年10月第19卷第10期.大量分枝菌酸包圍在肽聚糖層的外面，一般抗酸染色是目前為止最快的結核檢出方法，可用來檢測病情進展，為感染控制提供參考依據(jù)，可確證培養(yǎng)物為陽性敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000條菌時可檢出，而培養(yǎng)可檢出>10-100條菌.結核分枝桿菌耐藥基因檢測試劑盒液體培養(yǎng)：菌體與培養(yǎng)基充分接觸，生長迅速，但易受到污染不能區(qū)分結核和非結核分枝桿菌高效：同時檢測17種分枝桿菌（包括TB）聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色高效：同時檢測17種分枝桿菌（包括TB）要確定是否為結核菌．需結合分枝桿菌菌種鑒定和藥物敏感性試驗。實用預防醫(yī)學2012年10月第19卷第10期.發(fā)光二極管熒光顯微鏡（LED）熒光顯微鏡成本高、易損壞、耗電量大、光源壽命短、顯微鏡價格昂貴且需要在暗室內工作等，熒光染色法一直沒有在結核病痰涂片診斷中得到廣泛的應用。只需將二極管替換普通光學顯微鏡的目鏡就相當于一臺熒光顯微鏡，組裝的“熒光顯微鏡”結合金胺O染色在結核病痰涂片檢查中有一定的應用價值。田斌等，發(fā)光二極管熒光顯微鏡在基層實驗室診斷結核分枝桿菌的應用評價.實用預防醫(yī)學2012年10月第19卷第10期.營養(yǎng)要求高，必須在含血清，卵黃，馬鈴薯，甘油及無機鹽類的特殊11分枝桿菌培養(yǎng)技術結核菌培養(yǎng)仍是目前診斷的金標準．尤其是藥敏試驗結果在指導臨床用藥及耐藥性檢測等方面具有重要作用,是鑒定是否為活菌的可靠方法．1、傳統(tǒng)的固態(tài)培養(yǎng)法

需要4～6周才能檢測到結核菌的生長．而且陽性率也只有30％-40％；特異性差．各種分枝桿菌均可生長。要確定是否為結核菌．需結合分枝桿菌菌種鑒定和藥物敏感性試驗。分枝桿菌培養(yǎng)技術結核菌培養(yǎng)仍是目前診斷的金標準．尤其是藥敏試122、分枝桿菌快速液體培養(yǎng)技術BD公司推出的BACTEC—MGIT960全自動分枝桿菌培養(yǎng)，鑒定／藥敏系統(tǒng)，操作簡便，陽性標本檢出時間平均為9d：鑒定、藥敏試驗時間平均為4d：陽性標本檢出率比傳統(tǒng)固體培養(yǎng)提高10％左右2、分枝桿菌快速液體培養(yǎng)技術13固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)優(yōu)缺點固體培養(yǎng)：污染少，易于進行菌落形態(tài)觀察，但是培養(yǎng)時間長液體培養(yǎng)：菌體與培養(yǎng)基充分接觸，生長迅速，但易受到污染固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)優(yōu)缺點14血清學試驗血清學試驗15免疫學檢測方法1、結核菌素試驗凡感染過結核桿菌的機體，會產(chǎn)生相應的致敏淋巴細胞，具有對結核桿菌的識別能力，當再次遇到通過皮膚注入的少量的結核菌素時，致敏Ｔ淋巴細胞受相同抗原再次刺激會在48-72小時內，產(chǎn)生局部炎癥反應，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽性反應。對活動性結核的診斷靈敏度高達77％，免疫學檢測方法1、結核菌素試驗16局限性：假陰性：小兒結核、老年人結核、免疫缺陷或免疫功能低下患者（如合并HIV感染、接受免疫抑制劑治療的患者)假陽性：接種過卡介苗的人也會產(chǎn)生陽性反應局限性：假陰性：17γ干擾素釋放試驗被認為是近十年來結核診斷史上取得的最重要成就，該檢測方法的原理是：結核感染后體內長期存在抗原特異性的記憶性Ｔ細胞，當再次遇到抗原刺激時，能迅速活化增值，釋放γ干擾素。目前市售兩種，QFT-G和T-SPOT.TB，比較兩種方法，T-SPOT.TB更靈敏但QFT-G更特異，但均優(yōu)于結核菌素試驗，同時也被推薦用于潛伏結核診斷。γ干擾素釋放試驗被認為是近十年來結核診斷史上取得的最重要成就18分子生物學檢測方法近年來核酸擴增技術和雜交分析技術的發(fā)展，為分枝桿菌的檢測、鑒定和藥敏實驗提供了極大的方便，可將診斷時間從幾周降低到幾天。研究、應用報道較多的結核病基因診斷技術主要包括聚合酶鏈反應(PCR)、核酸探針雜交、DNA序列測定、基因芯片、基因分型等。分子生物學檢測方法近年來核酸擴增技術和雜交分析技術的發(fā)展，為19分枝桿菌核酸檢測分枝桿菌菌種鑒定結核分枝桿菌耐藥基因檢測MDR早期診斷分枝桿菌分子診斷系統(tǒng)（協(xié)和醫(yī)院）

菌種鑒定篩查、鑒別診斷實時熒光PCR基因芯片快速檢測平臺MDR早期診斷分枝桿菌分子診斷系統(tǒng)（協(xié)和醫(yī)院）

菌種鑒定篩查20高效：一個樣本可同時檢測結核分枝桿菌和NTM快速：4周（菌培）3小時靈敏：10個菌/反應（TB）；102

個菌/反應（NTM）21分枝桿菌核酸檢測功能：TB快速篩查；TB/NTM鑒別診斷高效：一個樣本可同時檢測結核分枝桿菌和NTM21分枝涂片簡單快速但陽性率較低、難以區(qū)分結核和非結核分枝桿菌接種過卡介苗的人也會產(chǎn)生陽性反應涂片簡單快速但陽性率較低、難以區(qū)分結核和非結核分枝桿菌凡感染過結核桿菌的機體，會產(chǎn)生相應的致敏淋巴細胞，具有對結核桿菌的識別能力，當再次遇到通過皮膚注入的少量的結核菌素時，致敏Ｔ淋巴細胞受相同抗原再次刺激會在48-72小時內，產(chǎn)生局部炎癥反應，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽性反應。接種過卡介苗的人也會產(chǎn)生陽性反應聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！結核分枝桿菌耐藥基因檢測TB更靈敏但QFT-G更特異，但均優(yōu)于結核菌素試驗，同時也被推薦用于潛伏結核診斷。熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色細胞壁中含有大量脂質而不易著色，特別是有熒光染色—黃或橘色—熒光顯微鏡（低倍）抗酸染色對分枝桿菌非特異，其他如Nocardia（奴卡）、Rhodococcus（紅球菌屬）、Legionellamicdadei（軍團菌）、cryptosporidium（隱孢子蟲）、Isospora（等孢球蟲）等有抗酸菌特點萋尼染色法—紅色—普通顯微鏡（高倍）靈敏：103個菌/反應不能區(qū)分結核和非結核分枝桿菌結核分枝桿菌耐藥基因檢測熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！高效：一個樣本可同時檢測結核分枝桿菌和NTM凡感染過結核桿菌的機體，會產(chǎn)生相應的致敏淋巴細胞，具有對結核桿菌的識別能力，當再次遇到通過皮膚注入的少量的結核菌素時，致敏Ｔ淋巴細胞受相同抗原再次刺激會在48-72小時內，產(chǎn)生局部炎癥反應，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽性反應。五種結核檢測方法效果評價其他非典型分枝桿菌多為緩慢生長型高效：同時檢測17種分枝桿菌（包括TB）快速：＞4周（菌種鑒定）6小時靈敏：

103

個菌/反應檢測范圍：結核、胞內、鳥、戈登、堪薩斯、偶然、瘰疬、淺黃、土、龜-膿腫、草、不產(chǎn)色、海-潰瘍、金色、蘇爾加、蟾蜍、恥垢。22分枝桿菌菌種鑒定（DNA微陣列芯片法）

涂片簡單快速但陽性率較低、難以區(qū)分結核和非結核分枝桿菌高通量：兩個一線抗結核藥（MDR）速度：8周（藥敏）6小時靈敏度：103

個菌/反應基于rpoB（利福平）和katG/inhA（異煙肼）的基因突變，對耐多藥結核病做出快速診斷。23結核分枝桿菌耐藥基因檢測試劑盒通量：兩個一線抗結核藥（MDR）基于rpoB（利福平五種結核檢測方法效果評價結核組：1260例非結核組：100例改良羅氏培養(yǎng)熒光PCR涂片法MGIT960快速培養(yǎng)結果比較斑點層析法五種結核檢測方法效果評價結核組：1260例非結核組：100例24敏感性、特異性比較敏感性、特異性比較25羅氏培養(yǎng)和快速培養(yǎng)羅氏培養(yǎng)和快速培養(yǎng)26快速培養(yǎng)和熒光PCR快速培養(yǎng)和熒光PCR27總結：涂片簡單快速但陽性率較低、難以區(qū)分結核和非結核分枝桿菌培養(yǎng)為金標準，但需時較長血清學試驗檢測結核抗原或抗體不太理想γ干擾素釋放試驗能較好地為臨床服務熒光PCR檢測結核分枝桿菌具有較好的敏感性和特異性，可結合傳統(tǒng)方法綜合分析總結：涂片簡單快速但陽性率較低、難以區(qū)分結核和非結核分枝桿菌28ThankYou!ThankYou!29全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結核分枝桿菌，有2000萬活動性肺結核患者，每年新發(fā)病例900萬人，每秒鐘有1人感染結核，每年有300萬人死于結核病。隨著抗結核藥物的不斷發(fā)展和衛(wèi)生生活狀況的改善，結核的發(fā)病率和死亡率曾一度大幅下降20世紀80年代后，由于艾滋病和結核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應用、吸毒、貧困及人口流動等因素，全球范圍內結核病的疫情驟然惡化結核分枝桿菌30全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結核分枝桿菌，有2000萬活動性涂片鏡檢--抗酸染色抗酸染色是目前為止最快的結核檢出方法，可用來檢測病情進展，為感染控制提供參考依據(jù)，可確證培養(yǎng)物為陽性萋尼染色法—紅色—普通顯微鏡（高倍）熒光染色—黃或橘色—熒光顯微鏡（低倍）聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！涂片鏡檢--抗酸染色抗酸染色是目前為止最快的結核檢出方法，可31抗酸染色局限性抗酸染色對分枝桿菌非特異，其他如Nocardia（奴卡）、Rhodococcus（紅球菌屬）、Legionellamicdadei（軍團菌）、cryptosporidium（隱孢子蟲）、Isospora（等孢球蟲）等有抗酸菌特點不能區(qū)分結核和非結核分枝桿菌不能區(qū)分活菌和死菌敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000條菌時可檢出，而培養(yǎng)可檢出>10-100條菌.抗酸染色局限性抗酸染色對分枝桿菌非特異，其他如Nocardi32發(fā)光二極管熒光顯微鏡（LED）熒光顯微鏡成本高、易損壞、耗電量大、光源壽命短、顯微鏡價格昂貴且需要在暗室內工作等，熒光染色法一直沒有在結核病痰涂片診斷中得到廣泛的應用。只需將二極管替換普通光學顯微鏡的目鏡就相當于一臺熒光顯微鏡，組裝的“熒光顯微鏡”結合金胺O染色在結核病痰涂片檢查中有一定的應用價值。田斌等，發(fā)光二極管熒光顯微鏡在基層實驗室診斷結核分枝桿菌的應用評價.實用預防醫(yī)學2012年10月第19卷第10期.發(fā)光二極管熒光顯微鏡（LED）熒光顯微鏡成本高、易損壞、耗電33靈敏度：103個菌/反應聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！檢測范圍：結核、胞內、鳥、戈登、堪薩斯、偶然、瘰疬、淺黃、土、龜-膿腫、草、不產(chǎn)色、海-潰瘍、金色、蘇爾加、蟾蜍、恥垢。高效：同時檢測17種分枝桿菌（包括TB）菌落粗糙型，表面干燥成顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，菜花樣細胞壁中含有大量脂質而不易著色，特別是有按生長速度可分為三類，即緩慢生長菌、迅速生長菌和不能培養(yǎng)菌三種類型隨著抗結核藥物的不斷發(fā)展和衛(wèi)生生活狀況的改善，結核的發(fā)病率和死亡率曾一度大幅下降結核分枝桿菌屬于緩慢生長分支桿菌bovis）、非洲分支桿菌（M.全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結核分枝桿菌，有2000萬活動性肺結核患者，每年新發(fā)病例900萬人，每秒鐘有1人感染結核，每年有300萬人死于結核病。熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色2、分枝桿菌快速液體培養(yǎng)技術不能區(qū)分結核和非結核分枝桿菌其他非典型分枝桿菌多為緩慢生長型分枝狀，無芽孢和鞭毛，因衰老或抗結核藥物的羅氏培養(yǎng)+分枝桿菌快速培養(yǎng)分枝狀，無芽孢和鞭毛，因衰老或抗結核藥物的結核分枝桿菌屬于緩慢生長分支桿菌快速：＞4周（菌種鑒定）6小時實用預防醫(yī)學2012年10月第19卷第10期.涂片簡單快速但陽性率較低、難以區(qū)分結核和非結核分枝桿菌免疫學檢測方法1、結核菌素試驗凡感染過結核桿菌的機體，會產(chǎn)生相應的致敏淋巴細胞，具有對結核桿菌的識別能力，當再次遇到通過皮膚注入的少量的結核菌素時，致敏Ｔ淋巴細胞受相同抗原再次刺激會在48-72小時內，產(chǎn)生局部炎癥反應，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽性反應。對活動性結核的診斷靈敏度高達77％，靈敏度：103個菌/反應免疫學檢測方法1、結核菌素試驗34全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結核分枝桿菌，有2000萬活動性肺結核患者，每年新發(fā)病例900萬人，每秒鐘有1人感染結核，每年有300萬人死于結核病。實用預防醫(yī)學2012年10月第19卷第10期.結核分枝桿菌屬于緩慢生長分支桿菌偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜亞種、龜分枝桿菌膿腫亞種屬于迅速生長型，雞蛋培養(yǎng)基上3-5天可見菌落高效：一個樣本可同時檢測結核分枝桿菌和NTM高效：同時檢測17種分枝桿菌（包括TB）快速：＞4周（菌種鑒定）6小時聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！要確定是否為結核菌．需結合分枝桿菌菌種鑒定和藥物敏感性試驗?？焖伲海?周（菌種鑒定）6小時分枝狀，無芽孢和鞭毛，因衰老或抗結核藥物的需要4～6周才能檢測到結核菌的生長．而且陽性率也只有30％-40％；熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色熒光染色—黃或橘色—熒光顯微鏡（低倍）熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色20世紀80年代后，由于艾滋病和結核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應用、吸毒、貧困及人口流動等因素，全球范圍內結核病的疫情驟然惡化速度：8周（藥敏）6小時靈敏：103個菌/反應對活動性結核的診斷靈敏度高達77％，凡感染過結核桿菌的機體，會產(chǎn)生相應的致敏淋巴細胞，具有對結核桿菌的識別能力，當再次遇到通過皮膚注入的少量的結核菌素時，致敏Ｔ淋巴細胞受相同抗原再次刺激會在48-72小時內，產(chǎn)生局部炎癥反應，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽性反應。接種過卡介苗的人也會產(chǎn)生陽性反應結核分枝桿菌耐藥基因檢測凡感染過結核桿菌的機體，會產(chǎn)生相應的致敏淋巴細胞，具有對結核桿菌的識別能力，當再次遇到通過皮膚注入的少量的結核菌素時，致敏Ｔ淋巴細胞受相同抗原再次刺激會在48-72小時內，產(chǎn)生局部炎癥反應，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽性反應。對活動性結核的診斷靈敏度高達77％，實用預防醫(yī)學2012年10月第19卷第10期.20世紀80年代后，由于艾滋病和結核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應用、吸毒、貧困及人口流動等因素，全球范圍內結核病的疫情驟然惡化敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000條菌時可檢出，而培養(yǎng)可檢出>10-100條菌.20世紀80年代后，由于艾滋病和結核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應用、吸毒、貧困及人口流動等因素，全球范圍內結核病的疫情驟然惡化專性需氧，3%-5%CO2能促進其生長最適溫度為35-37℃，最適pH為6.大量分枝菌酸包圍在肽聚糖層的外面，一般血清學試驗檢測結核抗原或抗體不太理想液體培養(yǎng)：菌體與培養(yǎng)基充分接觸，生長迅速，但易受到污染抗酸染色是目前為止最快的結核檢出方法，可用來檢測病情進展，為感染控制提供參考依據(jù)，可確證培養(yǎng)物為陽性結核分枝桿菌為細長略帶彎曲的桿菌，有時可見靈敏：103個菌/反應leprae）是麻風病的病原體，也是抗酸桿菌，但較結核分枝桿菌短而粗，兩端尖細，抗酸染色著色均勻，呈束狀或團狀排列，結核分枝桿菌多散在，偶有聚集。結核分枝桿菌耐藥基因檢測分枝狀，無芽孢和鞭毛，因衰老或抗結核藥物的實用預防醫(yī)學2012年10月第19卷第10期.不能區(qū)分結核和非結核分枝桿菌結核分枝桿菌為細長略帶彎曲的桿菌，有時可見小兒結核、老年人結核、免疫缺陷或免疫功能低下患者（如合并HIV感染、接受免疫抑制劑治療的患者)萋尼染色呈紅色，背景為藍色；目前市售兩種，QFT-G和T-SPOT.大量分枝菌酸包圍在肽聚糖層的外面，一般目前市售兩種，QFT-G和T-SPOT.熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色接種過卡介苗的人也會產(chǎn)生陽性反應高效：一個樣本可同時檢測結核分枝桿菌和NTM偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜/膿腫、胞內分枝桿菌、鳥分枝桿菌、戈登分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、偶然分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌、淺黃分枝桿菌、土分枝桿菌、草分枝桿菌、不產(chǎn)色分枝桿菌、海-潰瘍分枝桿菌、金色分枝桿菌、蘇爾加分枝桿菌、蟾蜍分枝桿菌等熒光顯微鏡成本高、易損壞、耗電量大、光源壽命短、顯微鏡價格昂貴且需要在暗室內工作等，熒光染色法一直沒有在結核病痰涂片診斷中得到廣泛的應用。20世紀80年代后，由于艾滋病和結核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應用、吸毒、貧困及人口流動等因素，全球范圍內結核病的疫情驟然惡化液體培養(yǎng)：菌體與培養(yǎng)基充分接觸，生長迅速，但易受到污染快速：＞4周（菌種鑒定）6小時凡感染過結核桿菌的機體，會產(chǎn)生相應的致敏淋巴細胞，具有對結核桿菌的識別能力，當再次遇到通過皮膚注入的少量的結核菌素時，致敏Ｔ淋巴細胞受相同抗原再次刺激會在48-72小時內，產(chǎn)生局部炎癥反應，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽性反應。偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜/膿腫、胞內分枝桿菌、鳥分枝桿菌、戈登分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、偶然分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌、淺黃分枝桿菌、土分枝桿菌、草分枝桿菌、不產(chǎn)色分枝桿菌、海-潰瘍分枝桿菌、金色分枝桿菌、蘇爾加分枝桿菌、蟾蜍分枝桿菌等2、分枝桿菌快速液體培養(yǎng)技術分枝狀，無芽孢和鞭毛，因衰老或抗結核藥物的20世紀80年代后，由于艾滋病和結核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應用、吸毒、貧困及人口流動等因素，全球范圍內結核病的疫情驟然惡化實用預防醫(yī)學2012年10月第19卷第10期.全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結核分枝桿菌，有2000萬活動性肺結核患者，每年新發(fā)病例900萬人，每秒鐘有1人感染結核，每年有300萬人死于結核病?？顾崛旧悄壳盀橹棺羁斓慕Y核檢出方法，可用來檢測病情進展，為感染控制提供參考依據(jù)，可確證培養(yǎng)物為陽性TB更靈敏但QFT-G更特異，但均優(yōu)于結核菌素試驗，同時也被推薦用于潛伏結核診斷。凡感染過結核桿菌的機體，會產(chǎn)生相應的致敏淋巴細胞，具有對結核桿菌的識別能力，當再次遇到通過皮膚注入的少量的結核菌素時，致敏Ｔ淋巴細胞受相同抗原再次刺激會在48-72小時內，產(chǎn)生局部炎癥反應，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽性反應。速度：8周（藥敏）6小時靈敏：103個菌/反應接種過卡介苗的人也會產(chǎn)生陽性反應敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000條菌時可檢出，而培養(yǎng)可檢出>10-100條菌.聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！發(fā)光二極管熒光顯微鏡（LED）快速：＞4周（菌種鑒定）6小時接種過卡介苗的人也會產(chǎn)生陽性反應對活動性結核的診斷靈敏度高達77％，研究、應用報道較多的結核病基因診斷技術主要包括聚合酶鏈反應(PCR)、核酸探針雜交、DNA序列測定、基因芯片、基因分型等。聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜亞種、龜分枝桿菌膿腫亞種屬于迅速生長型，雞蛋培養(yǎng)基上3-5天可見菌落偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜亞種、龜分枝桿菌膿腫亞種屬于迅速生長型，雞蛋培養(yǎng)基上3-5天可見菌落作用可出現(xiàn)多形態(tài)，如球狀、串珠狀或絲狀，結核分枝桿菌耐藥基因檢測分枝狀，無芽孢和鞭毛，因衰老或抗結核藥物的MGIT960快速培養(yǎng)敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000條菌時可檢出，而培養(yǎng)可檢出>10-100條菌.萋尼染色呈紅色，背景為藍色；20世紀80年代后，由于艾滋病和結核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應用、吸毒、貧困及人口流動等因素，全球范圍內結核病的疫情驟然惡化小兒結核、老年人結核、免疫缺陷或免疫功能低下患者（如合并HIV感染、接受免疫抑制劑治療的患者)熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色結核菌培養(yǎng)仍是目前診斷的金標準．尤其是藥敏試驗結果在指導臨床用藥及耐藥性檢測等方面具有重要作用,是鑒定是否為活菌的可靠方法．熒光染色—黃或橘色—熒光顯微鏡（低倍）快速：4周（菌培）3小時leprae）是麻風病的病原體，也是抗酸桿菌，但較結核分枝桿菌短而粗，兩端尖細，抗酸染色著色均勻，呈束狀或團狀排列，結核分枝桿菌多散在，偶有聚集。聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！結核分枝桿菌為細長略帶彎曲的桿菌，有時可見20世紀80年代后，由于艾滋病和結核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應用、吸毒、貧困及人口流動等因素，全球范圍內結核病的疫情驟然惡化速度：8周（藥敏）6小時快速：＞4周（菌種鑒定）6小時分枝桿菌分子診斷系統(tǒng)（協(xié)和醫(yī)院）結核分枝桿菌屬于緩慢生長分支桿菌對活動性結核的診斷靈敏度高達77％，分枝狀，無芽孢和鞭毛，因衰老或抗結核藥物的凡感染過結核桿菌的機體，會產(chǎn)生相應的致敏淋巴細胞，具有對結核桿菌的識別能力，當再次遇到通過皮膚注入的少量的結核菌素時，致敏Ｔ淋巴細胞受相同抗原再次刺激會在48-72小時內，產(chǎn)生局部炎癥反應，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽性反應。營養(yǎng)要求高，必須在含血清，卵黃，馬鈴薯，甘油及無機鹽類的特殊培養(yǎng)基上生長，常用的有羅氏固體培養(yǎng)基接種過卡介苗的人也會產(chǎn)生陽性反應偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜/膿腫、胞內分枝桿菌、鳥分枝桿菌、戈登分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、偶然分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌、淺黃分枝桿菌、土分枝桿菌、草分枝桿菌、不產(chǎn)色分枝桿菌、海-潰瘍分枝桿菌、金色分枝桿菌、蘇爾加分枝桿菌、蟾蜍分枝桿菌等分枝狀，無芽孢和鞭毛，因衰老或抗結核藥物的2、分枝桿菌快速液體培養(yǎng)技術基于rpoB（利福平）和katG/inhA（異煙肼）的基因突變，對耐多藥結核病做出快速診斷。熒光染色—黃或橘色—熒光顯微鏡（低倍）分枝狀，無芽孢和鞭毛，因衰老或抗結核藥物的20世紀80年代后，由于艾滋病和結核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應用、吸毒、貧困及人口流動等因素，全球范圍內結核病的疫情驟然惡化africanum）和田鼠分枝桿菌（M.快速培養(yǎng)和熒光PCR全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結核分枝桿菌，有2000萬活動性35分枝桿菌屬一類細長略帶彎曲，有時呈分枝狀的桿菌，本屬細菌多具有抗酸性，又稱抗酸桿菌（acid-fastbacillus），細菌體內含有分枝菌酸，細胞壁含有大量脂類，這與分枝桿菌的染色性、抵抗力和致病性等密切相關。本屬細菌已經(jīng)被鑒定的有70多種，可分為三大類：結核分枝桿菌、非典型分枝桿菌、麻風分枝桿菌；按生長速度可分為三類，即緩慢生長菌、迅速生長菌和不能培養(yǎng)菌三種類型分枝桿菌屬一類細長略帶彎曲，有時呈分枝狀的桿菌，本屬細菌多具36結核分枝桿菌群結核分枝桿菌，是人和動物結核病的病原體，包括人結核分枝桿菌（Mycobacteriumtuberculosis）、牛分支桿菌（M.bovis）、非洲分支桿菌（M.africanum）和田鼠分枝桿菌（M.microti），前三種對人類治病，其中人型結核分枝桿菌感染發(fā)病率最高。結核分枝桿菌屬于緩慢生長分支桿菌結核分枝桿菌群結核分枝桿菌，是人和動物結核病的病原體，包括人37非典型分枝桿菌偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜/膿腫、胞內分枝桿菌、鳥分枝桿菌、戈登分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、偶然分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌、淺黃分枝桿菌、土分枝桿菌、草分枝桿菌、不產(chǎn)色分枝桿菌、海-潰瘍分枝桿菌、金色分枝桿菌、蘇爾加分枝桿菌、蟾蜍分枝桿菌等偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜亞種、龜分枝桿菌膿腫亞種屬于迅速生長型，雞蛋培養(yǎng)基上3-5天可見菌落其他非典型分枝桿菌多為緩慢生長型非典型分枝桿菌偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜/膿腫、胞內分枝桿菌38麻風分枝桿菌麻風分枝桿菌（M.leprae）是麻風病的病原體，也是抗酸桿菌，但較結核分枝桿菌短而粗，兩端尖細，抗酸染色著色均勻，呈束狀或團狀排列，結核分枝桿菌多散在，偶有聚集。為典型的胞內寄生菌，有麻風桿菌存在的細胞胞漿呈泡沫狀，稱麻風細胞。體外不能培養(yǎng)。麻風分枝桿菌麻風分枝桿菌（M.leprae）是麻風病的病原體39全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結核分枝桿菌，有2000萬活動性肺結核患者，每年新發(fā)病例900萬人，每秒鐘有1人感染結核，每年有300萬人死于結核病。隨著抗結核藥物的不斷發(fā)展和衛(wèi)生生活狀況的改善，結核的發(fā)病率和死亡率曾一度大幅下降20世紀80年代后，由于艾滋病和結核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應用、吸毒、貧困及人口流動等因素，全球范圍內結核病的疫情驟然惡化結核分枝桿菌40全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結核分枝桿菌，有2000萬活動性生物學形狀結核分枝桿菌為細長略帶彎曲的桿菌，有時可見分枝狀，無芽孢和鞭毛，因衰老或抗結核藥物的作用可出現(xiàn)多形態(tài)，如球狀、串珠狀或絲狀，大小為1～4X0.4μm。細胞壁中含有大量脂質而不易著色，特別是有大量分枝菌酸包圍在肽聚糖層的外面，一般用抗酸染色。萋尼染色呈紅色，背景為藍色；熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色生物學形狀結核分枝桿菌為細長略帶彎曲的桿菌，有時可見細胞壁中41培養(yǎng)特性培養(yǎng)基營養(yǎng)要求高，必須在含血清，卵黃，馬鈴薯，甘油及無機鹽類的特殊培養(yǎng)基上生長，常用的有羅氏固體培養(yǎng)基培養(yǎng)條件專性需氧，3%-5%CO2能促進其生長最適溫度為35-37℃，最適pH為6.5-6.8菌落特點菌落粗糙型，表面干燥成顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，菜花樣42培養(yǎng)特性培養(yǎng)基營養(yǎng)要求高，必須在含血清，卵黃，馬鈴薯，甘油及細胞壁中含有大量脂質而不易著色，特別是有實用預防醫(yī)學2012年10月第19卷第10期.結核分枝桿菌屬于緩慢生長分支桿菌BD公司推出的BACTEC—MGIT960全自動分枝桿菌培養(yǎng)，鑒定／藥敏系統(tǒng)，操作簡便，陽性標本檢出時間平均為9d：鑒定、藥敏試驗時間平均為4d：陽性標本檢出率比傳統(tǒng)固體培養(yǎng)提高10％左右速度：8周（藥敏）6小時分枝狀，無芽孢和鞭毛，因衰老或抗結核藥物的20世紀80年代后，由于艾滋病和結核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應用、吸毒、貧困及人口流動等因素，全球范圍內結核病的疫情驟然惡化接種過卡介苗的人也會產(chǎn)生陽性反應快速：4周（菌培）3小時實用預防醫(yī)學2012年10月第19卷第10期.接種過卡介苗的人也會產(chǎn)生陽性反應全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結核分枝桿菌，有2000萬活動性肺結核患者，每年新發(fā)病例900萬人，每秒鐘有1人感染結核，每年有300萬人死于結核病。實用預防醫(yī)學2012年10月第19卷第10期.偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜/膿腫、胞內分枝桿菌、鳥分枝桿菌、戈登分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、偶然分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌、淺黃分枝桿菌、土分枝桿菌、草分枝桿菌、不產(chǎn)色分枝桿菌、海-潰瘍分枝桿菌、金色分枝桿菌、蘇爾加分枝桿菌、蟾蜍分枝桿菌等涂片簡單快速但陽性率較低、難以區(qū)分結核和非結核分枝桿菌菌落粗糙型，表面干燥成顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，菜花樣凡感染過結核桿菌的機體，會產(chǎn)生相應的致敏淋巴細胞，具有對結核桿菌的識別能力，當再次遇到通過皮膚注入的少量的結核菌素時，致敏Ｔ淋巴細胞受相同抗原再次刺激會在48-72小時內，產(chǎn)生局部炎癥反應，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽性反應。結核分枝桿菌屬于緩慢生長分支桿菌聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！實驗室檢測方法

萋尼染色+熒光染色

羅氏培養(yǎng)+分枝桿菌快速培養(yǎng)

抗原抗體檢測

細胞因子檢測

熒光定量PCR

芯片雜交

病原學

免疫學

分子生物學細胞壁中含有大量脂質而不易著色，特別是有實驗室檢測方法萋尼43涂片鏡檢--抗酸染色抗酸染色是目前為止最快的結核檢出方法，可用來檢測病情進展，為感染控制提供參考依據(jù)，可確證培養(yǎng)物為陽性萋尼染色法—紅色—普通顯微鏡（高倍）熒光染色—黃或橘色—熒光顯微鏡（低倍）聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！涂片鏡檢--抗酸染色抗酸染色是目前為止最快的結核檢出方法，可44抗酸染色局限性抗酸染色對分枝桿菌非特異，其他如Nocardia（奴卡）、Rhodococcus（紅球菌屬）、Legionellamicdadei（軍團菌）、cryptosporidium（隱孢子蟲）、Isospora（等孢球蟲）等有抗酸菌特點不能區(qū)分結核和非結核分枝桿菌不能區(qū)分活菌和死菌敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000條菌時可檢出，而培養(yǎng)可檢出>10-100條菌.抗酸染色局限性抗酸染色對分枝桿菌非特異，其他如Nocardi45營養(yǎng)要求高，必須在含血清，卵黃，馬鈴薯，甘油及無機鹽類的特殊培養(yǎng)基上生長，常用的有羅氏固體培養(yǎng)基2、分枝桿菌快速液體培養(yǎng)技術分枝桿菌分子診斷系統(tǒng)（協(xié)和醫(yī)院）研究、應用報道較多的結核病基因診斷技術主要包括聚合酶鏈反應(PCR)、核酸探針雜交、DNA序列測定、基因芯片、基因分型等。大量分枝菌酸包圍在肽聚糖層的外面，一般結核分枝桿菌耐藥基因檢測熒光顯微鏡成本高、易損壞、耗電量大、光源壽命短、顯微鏡價格昂貴且需要在暗室內工作等，熒光染色法一直沒有在結核病痰涂片診斷中得到廣泛的應用。不能區(qū)分結核和非結核分枝桿菌接種過卡介苗的人也會產(chǎn)生陽性反應實用預防醫(yī)學2012年10月第19卷第10期.大量分枝菌酸包圍在肽聚糖層的外面，一般抗酸染色是目前為止最快的結核檢出方法，可用來檢測病情進展，為感染控制提供參考依據(jù)，可確證培養(yǎng)物為陽性敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000條菌時可檢出，而培養(yǎng)可檢出>10-100條菌.結核分枝桿菌耐藥基因檢測試劑盒液體培養(yǎng)：菌體與培養(yǎng)基充分接觸，生長迅速，但易受到污染不能區(qū)分結核和非結核分枝桿菌高效：同時檢測17種分枝桿菌（包括TB）聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色高效：同時檢測17種分枝桿菌（包括TB）要確定是否為結核菌．需結合分枝桿菌菌種鑒定和藥物敏感性試驗。實用預防醫(yī)學2012年10月第19卷第10期.發(fā)光二極管熒光顯微鏡（LED）熒光顯微鏡成本高、易損壞、耗電量大、光源壽命短、顯微鏡價格昂貴且需要在暗室內工作等，熒光染色法一直沒有在結核病痰涂片診斷中得到廣泛的應用。只需將二極管替換普通光學顯微鏡的目鏡就相當于一臺熒光顯微鏡，組裝的“熒光顯微鏡”結合金胺O染色在結核病痰涂片檢查中有一定的應用價值。田斌等，發(fā)光二極管熒光顯微鏡在基層實驗室診斷結核分枝桿菌的應用評價.實用預防醫(yī)學2012年10月第19卷第10期.營養(yǎng)要求高，必須在含血清，卵黃，馬鈴薯，甘油及無機鹽類的特殊46分枝桿菌培養(yǎng)技術結核菌培養(yǎng)仍是目前診斷的金標準．尤其是藥敏試驗結果在指導臨床用藥及耐藥性檢測等方面具有重要作用,是鑒定是否為活菌的可靠方法．1、傳統(tǒng)的固態(tài)培養(yǎng)法

需要4～6周才能檢測到結核菌的生長．而且陽性率也只有30％-40％；特異性差．各種分枝桿菌均可生長。要確定是否為結核菌．需結合分枝桿菌菌種鑒定和藥物敏感性試驗。分枝桿菌培養(yǎng)技術結核菌培養(yǎng)仍是目前診斷的金標準．尤其是藥敏試472、分枝桿菌快速液體培養(yǎng)技術BD公司推出的BACTEC—MGIT960全自動分枝桿菌培養(yǎng)，鑒定／藥敏系統(tǒng)，操作簡便，陽性標本檢出時間平均為9d：鑒定、藥敏試驗時間平均為4d：陽性標本檢出率比傳統(tǒng)固體培養(yǎng)提高10％左右2、分枝桿菌快速液體培養(yǎng)技術48固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)優(yōu)缺點固體培養(yǎng)：污染少，易于進行菌落形態(tài)觀察，但是培養(yǎng)時間長液體培養(yǎng)：菌體與培養(yǎng)基充分接觸，生長迅速，但易受到污染固體培養(yǎng)和液體培養(yǎng)優(yōu)缺點49血清學試驗血清學試驗50免疫學檢測方法1、結核菌素試驗凡感染過結核桿菌的機體，會產(chǎn)生相應的致敏淋巴細胞，具有對結核桿菌的識別能力，當再次遇到通過皮膚注入的少量的結核菌素時，致敏Ｔ淋巴細胞受相同抗原再次刺激會在48-72小時內，產(chǎn)生局部炎癥反應，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽性反應。對活動性結核的診斷靈敏度高達77％，免疫學檢測方法1、結核菌素試驗51局限性：假陰性：小兒結核、老年人結核、免疫缺陷或免疫功能低下患者（如合并HIV感染、接受免疫抑制劑治療的患者)假陽性：接種過卡介苗的人也會產(chǎn)生陽性反應局限性：假陰性：52γ干擾素釋放試驗被認為是近十年來結核診斷史上取得的最重要成就，該檢測方法的原理是：結核感染后體內長期存在抗原特異性的記憶性Ｔ細胞，當再次遇到抗原刺激時，能迅速活化增值，釋放γ干擾素。目前市售兩種，QFT-G和T-SPOT.TB，比較兩種方法，T-SPOT.TB更靈敏但QFT-G更特異，但均優(yōu)于結核菌素試驗，同時也被推薦用于潛伏結核診斷。γ干擾素釋放試驗被認為是近十年來結核診斷史上取得的最重要成就53分子生物學檢測方法近年來核酸擴增技術和雜交分析技術的發(fā)展，為分枝桿菌的檢測、鑒定和藥敏實驗提供了極大的方便，可將診斷時間從幾周降低到幾天。研究、應用報道較多的結核病基因診斷技術主要包括聚合酶鏈反應(PCR)、核酸探針雜交、DNA序列測定、基因芯片、基因分型等。分子生物學檢測方法近年來核酸擴增技術和雜交分析技術的發(fā)展，為54分枝桿菌核酸檢測分枝桿菌菌種鑒定結核分枝桿菌耐藥基因檢測MDR早期診斷分枝桿菌分子診斷系統(tǒng)（協(xié)和醫(yī)院）

菌種鑒定篩查、鑒別診斷實時熒光PCR基因芯片快速檢測平臺MDR早期診斷分枝桿菌分子診斷系統(tǒng)（協(xié)和醫(yī)院）

菌種鑒定篩查55高效：一個樣本可同時檢測結核分枝桿菌和NTM快速：4周（菌培）3小時靈敏：10個菌/反應（TB）；102

個菌/反應（NTM）56分枝桿菌核酸檢測功能：TB快速篩查；TB/NTM鑒別診斷高效：一個樣本可同時檢測結核分枝桿菌和NTM21分枝涂片簡單快速但陽性率較低、難以區(qū)分結核和非結核分枝桿菌接種過卡介苗的人也會產(chǎn)生陽性反應涂片簡單快速但陽性率較低、難以區(qū)分結核和非結核分枝桿菌凡感染過結核桿菌的機體，會產(chǎn)生相應的致敏淋巴細胞，具有對結核桿菌的識別能力，當再次遇到通過皮膚注入的少量的結核菌素時，致敏Ｔ淋巴細胞受相同抗原再次刺激會在48-72小時內，產(chǎn)生局部炎癥反應，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽性反應。接種過卡介苗的人也會產(chǎn)生陽性反應聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！結核分枝桿菌耐藥基因檢測TB更靈敏但QFT-G更特異，但均優(yōu)于結核菌素試驗，同時也被推薦用于潛伏結核診斷。熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色細胞壁中含有大量脂質而不易著色，特別是有熒光染色—黃或橘色—熒光顯微鏡（低倍）抗酸染色對分枝桿菌非特異，其他如Nocardia（奴卡）、Rhodococcus（紅球菌屬）、Legionellamicdadei（軍團菌）、cryptosporidium（隱孢子蟲）、Isospora（等孢球蟲）等有抗酸菌特點萋尼染色法—紅色—普通顯微鏡（高倍）靈敏：103個菌/反應不能區(qū)分結核和非結核分枝桿菌結核分枝桿菌耐藥基因檢測熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！高效：一個樣本可同時檢測結核分枝桿菌和NTM凡感染過結核桿菌的機體，會產(chǎn)生相應的致敏淋巴細胞，具有對結核桿菌的識別能力，當再次遇到通過皮膚注入的少量的結核菌素時，致敏Ｔ淋巴細胞受相同抗原再次刺激會在48-72小時內，產(chǎn)生局部炎癥反應，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽性反應。五種結核檢測方法效果評價其他非典型分枝桿菌多為緩慢生長型高效：同時檢測17種分枝桿菌（包括TB）快速：＞4周（菌種鑒定）6小時靈敏：

103

個菌/反應檢測范圍：結核、胞內、鳥、戈登、堪薩斯、偶然、瘰疬、淺黃、土、龜-膿腫、草、不產(chǎn)色、海-潰瘍、金色、蘇爾加、蟾蜍、恥垢。57分枝桿菌菌種鑒定（DNA微陣列芯片法）

涂片簡單快速但陽性率較低、難以區(qū)分結核和非結核分枝桿菌高通量：兩個一線抗結核藥（MDR）速度：8周（藥敏）6小時靈敏度：103

個菌/反應基于rpoB（利福平）和katG/inhA（異煙肼）的基因突變，對耐多藥結核病做出快速診斷。58結核分枝桿菌耐藥基因檢測試劑盒通量：兩個一線抗結核藥（MDR）基于rpoB（利福平五種結核檢測方法效果評價結核組：1260例非結核組：100例改良羅氏培養(yǎng)熒光PCR涂片法MGIT960快速培養(yǎng)結果比較斑點層析法五種結核檢測方法效果評價結核組：1260例非結核組：100例59敏感性、特異性比較敏感性、特異性比較60羅氏培養(yǎng)和快速培養(yǎng)羅氏培養(yǎng)和快速培養(yǎng)61快速培養(yǎng)和熒光PCR快速培養(yǎng)和熒光PCR62總結：涂片簡單快速但陽性率較低、難以區(qū)分結核和非結核分枝桿菌培養(yǎng)為金標準，但需時較長血清學試驗檢測結核抗原或抗體不太理想γ干擾素釋放試驗能較好地為臨床服務熒光PCR檢測結核分枝桿菌具有較好的敏感性和特異性，可結合傳統(tǒng)方法綜合分析總結：涂片簡單快速但陽性率較低、難以區(qū)分結核和非結核分枝桿菌63ThankYou!ThankYou!64全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結核分枝桿菌，有2000萬活動性肺結核患者，每年新發(fā)病例900萬人，每秒鐘有1人感染結核，每年有300萬人死于結核病。隨著抗結核藥物的不斷發(fā)展和衛(wèi)生生活狀況的改善，結核的發(fā)病率和死亡率曾一度大幅下降20世紀80年代后，由于艾滋病和結核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應用、吸毒、貧困及人口流動等因素，全球范圍內結核病的疫情驟然惡化結核分枝桿菌65全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結核分枝桿菌，有2000萬活動性涂片鏡檢--抗酸染色抗酸染色是目前為止最快的結核檢出方法，可用來檢測病情進展，為感染控制提供參考依據(jù)，可確證培養(yǎng)物為陽性萋尼染色法—紅色—普通顯微鏡（高倍）熒光染色—黃或橘色—熒光顯微鏡（低倍）聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！涂片鏡檢--抗酸染色抗酸染色是目前為止最快的結核檢出方法，可66抗酸染色局限性抗酸染色對分枝桿菌非特異，其他如Nocardia（奴卡）、Rhodococcus（紅球菌屬）、Legionellamicdadei（軍團菌）、cryptosporidium（隱孢子蟲）、Isospora（等孢球蟲）等有抗酸菌特點不能區(qū)分結核和非結核分枝桿菌不能區(qū)分活菌和死菌敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000條菌時可檢出，而培養(yǎng)可檢出>10-100條菌.抗酸染色局限性抗酸染色對分枝桿菌非特異，其他如Nocardi67發(fā)光二極管熒光顯微鏡（LED）熒光顯微鏡成本高、易損壞、耗電量大、光源壽命短、顯微鏡價格昂貴且需要在暗室內工作等，熒光染色法一直沒有在結核病痰涂片診斷中得到廣泛的應用。只需將二極管替換普通光學顯微鏡的目鏡就相當于一臺熒光顯微鏡，組裝的“熒光顯微鏡”結合金胺O染色在結核病痰涂片檢查中有一定的應用價值。田斌等，發(fā)光二極管熒光顯微鏡在基層實驗室診斷結核分枝桿菌的應用評價.實用預防醫(yī)學2012年10月第19卷第10期.發(fā)光二極管熒光顯微鏡（LED）熒光顯微鏡成本高、易損壞、耗電68靈敏度：103個菌/反應聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！檢測范圍：結核、胞內、鳥、戈登、堪薩斯、偶然、瘰疬、淺黃、土、龜-膿腫、草、不產(chǎn)色、海-潰瘍、金色、蘇爾加、蟾蜍、恥垢。高效：同時檢測17種分枝桿菌（包括TB）菌落粗糙型，表面干燥成顆粒狀，不透明，乳白色或淡黃色，菜花樣細胞壁中含有大量脂質而不易著色，特別是有按生長速度可分為三類，即緩慢生長菌、迅速生長菌和不能培養(yǎng)菌三種類型隨著抗結核藥物的不斷發(fā)展和衛(wèi)生生活狀況的改善，結核的發(fā)病率和死亡率曾一度大幅下降結核分枝桿菌屬于緩慢生長分支桿菌bovis）、非洲分支桿菌（M.全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結核分枝桿菌，有2000萬活動性肺結核患者，每年新發(fā)病例900萬人，每秒鐘有1人感染結核，每年有300萬人死于結核病。熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色2、分枝桿菌快速液體培養(yǎng)技術不能區(qū)分結核和非結核分枝桿菌其他非典型分枝桿菌多為緩慢生長型分枝狀，無芽孢和鞭毛，因衰老或抗結核藥物的羅氏培養(yǎng)+分枝桿菌快速培養(yǎng)分枝狀，無芽孢和鞭毛，因衰老或抗結核藥物的結核分枝桿菌屬于緩慢生長分支桿菌快速：＞4周（菌種鑒定）6小時實用預防醫(yī)學2012年10月第19卷第10期.涂片簡單快速但陽性率較低、難以區(qū)分結核和非結核分枝桿菌免疫學檢測方法1、結核菌素試驗凡感染過結核桿菌的機體，會產(chǎn)生相應的致敏淋巴細胞，具有對結核桿菌的識別能力，當再次遇到通過皮膚注入的少量的結核菌素時，致敏Ｔ淋巴細胞受相同抗原再次刺激會在48-72小時內，產(chǎn)生局部炎癥反應，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽性反應。對活動性結核的診斷靈敏度高達77％，靈敏度：103個菌/反應免疫學檢測方法1、結核菌素試驗69全球約有1/3的人口已經(jīng)感染結核分枝桿菌，有2000萬活動性肺結核患者，每年新發(fā)病例900萬人，每秒鐘有1人感染結核，每年有300萬人死于結核病。實用預防醫(yī)學2012年10月第19卷第10期.結核分枝桿菌屬于緩慢生長分支桿菌偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜亞種、龜分枝桿菌膿腫亞種屬于迅速生長型，雞蛋培養(yǎng)基上3-5天可見菌落高效：一個樣本可同時檢測結核分枝桿菌和NTM高效：同時檢測17種分枝桿菌（包括TB）快速：＞4周（菌種鑒定）6小時聯(lián)染法：敏感性高，特異性好，速度快！要確定是否為結核菌．需結合分枝桿菌菌種鑒定和藥物敏感性試驗?？焖伲海?周（菌種鑒定）6小時分枝狀，無芽孢和鞭毛，因衰老或抗結核藥物的需要4～6周才能檢測到結核菌的生長．而且陽性率也只有30％-40％；熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色熒光染色—黃或橘色—熒光顯微鏡（低倍）熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色20世紀80年代后，由于艾滋病和結核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應用、吸毒、貧困及人口流動等因素，全球范圍內結核病的疫情驟然惡化速度：8周（藥敏）6小時靈敏：103個菌/反應對活動性結核的診斷靈敏度高達77％，凡感染過結核桿菌的機體，會產(chǎn)生相應的致敏淋巴細胞，具有對結核桿菌的識別能力，當再次遇到通過皮膚注入的少量的結核菌素時，致敏Ｔ淋巴細胞受相同抗原再次刺激會在48-72小時內，產(chǎn)生局部炎癥反應，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽性反應。接種過卡介苗的人也會產(chǎn)生陽性反應結核分枝桿菌耐藥基因檢測凡感染過結核桿菌的機體，會產(chǎn)生相應的致敏淋巴細胞，具有對結核桿菌的識別能力，當再次遇到通過皮膚注入的少量的結核菌素時，致敏Ｔ淋巴細胞受相同抗原再次刺激會在48-72小時內，產(chǎn)生局部炎癥反應，出現(xiàn)紅腫硬節(jié)即為陽性反應。對活動性結核的診斷靈敏度高達77％，實用預防醫(yī)學2012年10月第19卷第10期.20世紀80年代后，由于艾滋病和結核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應用、吸毒、貧困及人口流動等因素，全球范圍內結核病的疫情驟然惡化敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000條菌時可檢出，而培養(yǎng)可檢出>10-100條菌.20世紀80年代后，由于艾滋病和結核分枝桿菌耐藥菌株的出現(xiàn)、免疫抑制劑的應用、吸毒、貧困及人口流動等因素，全球范圍內結核病的疫情驟然惡化專性需氧，3%-5%CO2能促進其生長最適溫度為35-37℃，最適pH為6.大量分枝菌酸包圍在肽聚糖層的外面，一般血清學試驗檢測結核抗原或抗體不太理想液體培養(yǎng)：菌體與培養(yǎng)基充分接觸，生長迅速，但易受到污染抗酸染色是目前為止最快的結核檢出方法，可用來檢測病情進展，為感染控制提供參考依據(jù)，可確證培養(yǎng)物為陽性結核分枝桿菌為細長略帶彎曲的桿菌，有時可見靈敏：103個菌/反應leprae）是麻風病的病原體，也是抗酸桿菌，但較結核分枝桿菌短而粗，兩端尖細，抗酸染色著色均勻，呈束狀或團狀排列，結核分枝桿菌多散在，偶有聚集。結核分枝桿菌耐藥基因檢測分枝狀，無芽孢和鞭毛，因衰老或抗結核藥物的實用預防醫(yī)學2012年10月第19卷第10期.不能區(qū)分結核和非結核分枝桿菌結核分枝桿菌為細長略帶彎曲的桿菌，有時可見小兒結核、老年人結核、免疫缺陷或免疫功能低下患者（如合并HIV感染、接受免疫抑制劑治療的患者)萋尼染色呈紅色，背景為藍色；目前市售兩種，QFT-G和T-SPOT.大量分枝菌酸包圍在肽聚糖層的外面，一般目前市售兩種，QFT-G和T-SPOT.熒光染料金胺“O”染色，熒光顯微鏡下為橘黃色接種過卡介苗的人也會產(chǎn)生陽性反應高效：一個樣本可同時檢測結核分枝桿菌和NTM偶發(fā)分枝桿菌、龜分枝桿菌龜/膿腫、胞內分枝桿菌、鳥分枝桿菌、戈登分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、偶然分枝桿菌、瘰疬分枝桿菌、淺黃分枝桿菌、土分枝桿菌、草分枝桿菌、不產(chǎn)色分枝桿菌、海-