病毒與細胞的相互作用

關(guān)于病毒與細胞的相互作用第1頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第四章病毒與細胞間的相互作用第一節(jié)病毒的細胞培養(yǎng)第二節(jié)病毒與細胞的相互作用第2頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第一節(jié)病毒的細胞培養(yǎng)病毒是嚴格的細胞內(nèi)寄生微生物，培養(yǎng)病毒必須使用細胞。根據(jù)病毒的不同選用敏感動物（動物接種）、雞胚（雞胚接種）或離體細胞進行分離培養(yǎng)（細胞培養(yǎng)）。第3頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五一、動物接種接種后通常以動物發(fā)病、死亡作為感染的指標。按病毒侵襲部位不同選擇適當?shù)慕臃N途徑。嗜神經(jīng)病毒接種在小鼠的腦內(nèi)。痘苗病毒和單純皰疹病毒接種于家兔角膜。第4頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五動物接種的優(yōu)缺點：優(yōu)點：（1）不需要復雜的儀器設(shè)備；（2）技術(shù)簡單；（3）易成功缺點：（1）個體差異大（2）價格昂貴（3）數(shù)量有限（4）需要隔離畜舍第5頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五二、雞胚接種一種比較經(jīng)濟簡便的方法。卵殼殼膜第6頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五接種途徑

絨毛尿囊膜接種9-13日齡

尿囊腔接種9-10日齡卵黃囊接種6-8日齡羊膜腔接種10日齡腦內(nèi)接種10日齡第7頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五

1氣室2卵殼3卵黃囊4卵白5尿囊腔

6絨毛尿囊7胚胎8羊水腔9胚胎外腔第8頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第9頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第10頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五雞胚接種的優(yōu)缺點：優(yōu)點：技術(shù)簡單、來源充沛、價格低廉、數(shù)量可大，不需特殊設(shè)備

缺點：很多病毒不能適應(yīng)，主要是哺乳動物的病毒。第11頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五

細胞培養(yǎng)(cellculture)是指利用機械、酶或化學方法使動物組織或傳代細胞分散成單個乃至2～4個細胞團懸液進行培養(yǎng)。

三、細胞培養(yǎng)第12頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五每個細胞生理特性基本一致，對病毒易感性相等無個體差異，準確性和重復性好可嚴格執(zhí)行無菌操作細胞培養(yǎng)本身就能顯示病毒的生長特征應(yīng)用空斑技術(shù)可進行病毒的克隆化優(yōu)點：第13頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五根據(jù)細胞來源、染色體特征及傳代次數(shù)，可分為三種類型：原代細胞：動物組織經(jīng)胰蛋白酶消化處理，使細胞分散而得到的細胞。二倍體細胞：將長成單層的原代細胞消化分散成單個細胞，繼續(xù)培養(yǎng)傳代，其染色體數(shù)與原代細胞一樣，保持其二倍染色體數(shù)目的細胞，稱為二倍體細胞。傳代細胞：能在體外持續(xù)增殖傳代的細胞，大多數(shù)由癌細胞或二倍體細胞突變而成。（一）細胞的類型第14頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五（二）細胞培養(yǎng)的方法靜置培養(yǎng)：實驗室常用。細胞懸液裝瓶，5%CO2溫箱靜置培養(yǎng)，細胞沉降并貼附在玻面上生長分裂，最后長成單層。旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)：大規(guī)模生產(chǎn)疫苗。細胞在玻瓶內(nèi)生長時，玻瓶不斷緩慢旋轉(zhuǎn)，細胞貼附于玻瓶四周，長成單層。懸浮培養(yǎng)微載體培養(yǎng)：懸浮、微載體第15頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第二節(jié)病毒與細胞的相互作用殺細胞感染非殺細胞感染

引致持續(xù)感染，對細胞代謝無影響。RNA干擾產(chǎn)生干擾素

第16頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五生產(chǎn)性感染（productive）：病毒感染后能產(chǎn)生完整的子代病毒顆粒。宿主細胞感染病毒發(fā)生的變化可能是細胞死亡或細胞轉(zhuǎn)化。非生產(chǎn)性感染（nonproductive）或稱頓挫感染（abortiveinfection）:病毒感染后不形成完整的病毒顆粒。持續(xù)性感染（persistentinfection）:持續(xù)長時間的感染，感染過程中不形成感染性的病毒顆粒。第17頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第18頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五病毒在宿主易感細胞內(nèi)增殖造成細胞損傷與死亡，這種感染稱為殺細胞性變化。

一、病毒引致的殺細胞變化殺細胞變化第19頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五由病毒感染導致的細胞損傷。CPE能在光學顯微鏡下觀察。①細胞圓縮，如痘病毒和呼腸孤病毒等；②細胞聚合，如腺病毒；③細胞融合形成合胞體，如副粘病毒和皰疹病毒；④有些病毒能形成包涵體。（一）細胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)第20頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五CPE觀察第21頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五CPE觀察第22頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五CPE觀察第23頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五正常細胞CPECPE觀察第24頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五正常單層A72細胞接種CCV后出現(xiàn)細胞拉網(wǎng)的的單層A72細胞CPE觀察第25頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五CPE觀察正常單層A72細胞接種犬冠狀病毒（CCV）后形成合胞體的的單層A72細胞第26頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五合胞體（syncytia）是病毒感染后導致感染細胞及相鄰細胞細胞膜融合的產(chǎn)物，表現(xiàn)為若干細胞的相鄰細胞膜消失，成為多核巨細胞?？梢允共《緩母腥镜募毎苯舆M入相鄰的正常細胞，有利于病毒在細胞間的擴散。第27頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五病毒引致的細胞凋亡和壞死細胞死亡（celldeath）:病毒的繁殖、產(chǎn)物等直接引起細胞的死亡。細胞凋亡（cellapoptosis）是病毒感染引起細胞的生理性死亡，即程序性死亡。由于病毒的殺細胞感染導致的死亡，總是發(fā)生在病毒復制完成之后。病毒抗凋亡，以延長細胞生命，直至完成子代病毒的復制周期。細胞總是在子代病毒產(chǎn)出之前自行死亡；是宿主細胞的重要防御機制?？杉霸缜宄腥静《镜募毎泳彶《驹隗w內(nèi)蔓延。第28頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第29頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五病毒感染抗體依賴的增強作用（antibody-dependentenhancementofviralinfection,ADEsyncytia）:在病毒感染過程中，宿主產(chǎn)生的抗體與病毒結(jié)合，非但未能阻斷病毒吸附宿主細胞，反而增強了病毒對細胞的感染，提高了病毒的滴度。第30頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五能夠使半數(shù)組織細胞在一定條件下發(fā)生細胞病變的病毒量。用于判定病毒的毒力。50%組織細胞感染量（TCID50）第31頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五（二）空斑試驗

plaqueassay細胞單層接種病毒后再覆蓋一層含營養(yǎng)液的瓊脂層。這樣病毒自然感染釋放后不能懸浮于液體中，只能感染鄰近與之接觸的細胞，以致感染區(qū)由原始病灶向四周擴大，形成類似細菌的菌落，此即空斑試驗。第32頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第33頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第34頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第35頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第36頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五空斑是由一個感染性病毒粒子復制形成的，類似于細菌的菌落，稱為空斑形成單位（PFU）。病毒懸液中的感染性病毒量以每毫升含有的PFU來表示。

CELLS第37頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五第38頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五空斑試驗的用途：1.測定病毒數(shù)量2.純化病毒

單個空斑作懸液，梯度稀釋后再作空斑，可獲得病毒克隆。3.鑒定病毒

不同病毒的空斑具有不同的特征。第39頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五（三）包涵體（inclusionbody)定義：是某些病毒感染細胞產(chǎn)生的特征性的形態(tài)變化，在普通光學顯微鏡下可見胞漿或胞核內(nèi)出現(xiàn)的呈嗜酸性或嗜堿性染色、大小數(shù)量不等的圓形或不規(guī)則形的團塊狀結(jié)構(gòu)，稱為包涵體，又稱為內(nèi)基氏小體（Negribody）。第40頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五包涵體的性質(zhì)病毒成分的蓄積，如狂犬病毒的Negri氏體大量晶格樣排列的病毒顆粒組成，如腺病毒的包涵體細胞變性的產(chǎn)物，不含病毒，如皰疹病毒的包涵體第41頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五狂犬病毒包涵體（Negribody）第42頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五定義：細胞利用內(nèi)源或外源的小分子雙股RNA片段，特異性地降解同源基因的mRNA，從而導致靶基因轉(zhuǎn)錄后基因沉默（posttranslationalgenesilence,PTGS）的現(xiàn)象。

二、RNA干擾（RNAinterference,RNAi）第43頁，共46頁，2022年，5月20日，12點37分，星期五定義：由病毒或誘生劑刺激機體細胞產(chǎn)生的具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用的糖蛋白。

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