DB37-T 4204-2020 水貂阿留申病診斷與凈化技術

ICS65.020.30B41

DB37山 東 省 地 方 標 準DB37/T4204—2020水貂阿留申病診斷與凈化技術Aleutiandiseasediagnoseandcleaning-uptechnologyforminkfarm20202020111020201210山東省市場監(jiān)督管理局發(fā)布前言本標準按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標準由山東省畜牧獸醫(yī)局提出并組織實施。本標準由山東省畜牧業(yè)標準化技術委員會歸口。本標準主要起草人：王貴升、張鶴曉、馬澤芳、史秋梅、張洪學、趙國清、黃兵、徐啟杰、王蕾、李玉杰、劉長浩、徐鴻、李金波、馬慧玲、藺曉月、崔凱、陳靜、李富金、王士榮。水貂阿留申病診斷與凈化技術范圍本標準規(guī)定了水貂阿留申病臨床診斷技術、病毒抗體檢測技術、熒光PCR檢測、病獸淘汰技術、獸群飼養(yǎng)環(huán)境控制技術和無害化處理的技術要求。本標準適用于水貂阿留申病感染動物的篩選、感染控制與凈化。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和實驗方法GB7959糞便無害化衛(wèi)生標準GB8978污水綜合排放標準SN/T2847水貂阿留申病檢疫技術規(guī)范DB37/T2381DB37/T266060～907～9112～3802～32～31.5mL1mL～2mL0.3mL～0.5mL：2～824。將裝有血液的離心管靜置，待血清析出，經4將裝有血液的離心管靜置，待血清析出，經4000r/min離心3min～5min，取血清置于1.5mL離心管中。4.3對流免疫檢測按照SN/T2847的要求進行檢測。5熒光PCR檢測5.1儀器設備5.1.15.1.25.1.35.1.45.1.5吸頭。5.1.65.1.7熒光PCR檢測儀及配套反應管（板）。（13000r/min。冰箱（2℃～8℃和-20℃兩種）。（0.5μL～10μμL～20μμL～200μμL～1000μ1.5mL）。DNA核酸提取試劑K。SDS。PCR有咽喉拭子樣品和肛拭子樣品：3～51.0mLPBS3～51.0mLPBS1.05.0mLPBS用無菌注射器直接吸取至無菌管中，編號備用。存放2～824。DNA普通提取方法，或者采用經驗證的病毒DNA提取試劑盒，按照試劑盒使用說明書提取。VP2168bp。根據需要配制熒光PCRPCR2000r/min5sec。nPCRPCR1照+1。15μLPCR0.5μLTaqPCR15μL加樣在樣品處理區(qū)進行。分別向上述PCR管中加入樣本核酸提取步驟5.4.1中制備的DNA溶液10μL，500r/min離心30sec。PCRPCRPCRPCR℃/3℃/15℃/60sec共4040℃/2min60ABIFAMCt/CpCt/Cp28陰性：無Ct/Cp值，且無特征性擴增曲線，表明樣品為陰性。陽性：Ct/Cp值≤30.0，且出現典型的擴增曲線，表示樣品為陽性。復驗：Ct/Cp值大于30.0，且出現典型的擴增曲線的樣品建議復驗。復驗仍出現上述結果的，判為陽性，否則判為陰性。熒光PCR檢測方法的實驗室規(guī)范詳見附錄B。PCR（）（場DB37/T2381DB37/T2660對污染的飼料、墊料等廢棄物以及糞便、污水應按照GB7959和GB8978進行無害化處理。病死水貂按照農業(yè)農村部《病死及病害動物無害化處理技術規(guī)范》的規(guī)定進行無害化處理。附錄A（資料性附錄）引物和探針F CAACCCTCCAGGTCAACTCTR CTCTTAACAGGATTCCAGCATGTP FAM-AAGCTTGCCTCTCCAAGTAAAGTAACCA-BHQ1附錄B（資料性附錄）水貂阿留申病毒熒光PCR檢測方法的實驗室規(guī)范B.1實驗室設置要求實驗室設置要求如下：——實驗室分為三個相對獨立的區(qū)域：樣本制備區(qū)、反應混合物配置區(qū)和檢測區(qū)；——工作區(qū)域須有明確標記，避免不同工作區(qū)域內的設備、物品混用；——每一區(qū)域須有專用的儀器設備RNA2504hRNA——實驗室清潔時應該樣本制備區(qū)、擴增反應混合物配置區(qū)至檢測區(qū)的順序進行；——不同的實驗區(qū)域應有其各自的清潔用具以防止交叉污染。B.2工作區(qū)域儀器設備配置——實驗室清潔時應該樣本制備區(qū)、擴增反應混合物配置區(qū)至檢測區(qū)的順序進行；——不同的實驗區(qū)域應有其各自的清潔用具以防止交叉污染。B.2工作區(qū)域儀器設備配置樣本制備區(qū)需配置如下儀器設備：——2℃～8℃冰箱；——-20℃冰箱；（4℃，12000r/min）；——混勻器；（0.1μL～10μL，5μL～20μL，20μL～200μL，200μL～1000μL）；——可移動紫外燈（近工作臺面）。檢測區(qū)檢測區(qū)需配置如下儀器設備：——熒光PCR儀（配計算機）；——移動紫外燈；——打印機。B.3各工作區(qū)域功能及注意事項樣本制備區(qū)的功能及注意事項如下：——樣本的保存，核酸提取、貯存及其加入至擴增反應管在樣本制備區(qū)進行；——對實驗臺適當的紫外照射（