已陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了許多新的紅細(xì)胞血型抗原國(guó)際輸血協(xié)會(huì)課件

紅細(xì)胞血型理論與實(shí)驗(yàn)(shíyàn)技術(shù)長(zhǎng)春博德生物技術(shù)(jìshù)有限責(zé)任公司童軍

第一頁，共六十四頁。主要(zhǔyào)內(nèi)容紅細(xì)胞血型(xuèxíng)相容性檢測(cè)紅細(xì)胞血型(xuèxíng)血清學(xué)檢測(cè)方法紅細(xì)胞血型系統(tǒng)介紹第二頁，共六十四頁。紅細(xì)胞血型抗原為同種異型抗原，是人類遺傳多態(tài)性標(biāo)志之一。自二十世紀(jì)初Landsteiner發(fā)現(xiàn)ABO血型以來，已陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了許多新的紅細(xì)胞血型抗原。國(guó)際(guójì)輸血協(xié)會(huì)（ISBT）2008年報(bào)告中已確認(rèn)了308個(gè)紅細(xì)胞血型抗原。并將其分為血型系統(tǒng)、血型集合和血型系列。輸血關(guān)系最大的是ABO及Rh血型系統(tǒng)。人類(rénlèi)紅細(xì)胞血型第三頁，共六十四頁。研究背景血型(xuèxíng)系統(tǒng)第四頁，共六十四頁。血型(xuèxíng)系統(tǒng)第五頁，共六十四頁。ABO血型發(fā)現(xiàn)(fāxiàn)歷史1901年，Landsteiner把幾份血液標(biāo)本中的紅細(xì)胞分別與他人的血清(xuèqīng)交叉混合后，發(fā)現(xiàn)有的血液之間發(fā)生凝集反應(yīng)，有的則不發(fā)生。將人的紅細(xì)胞血型分為A、B、C(后稱為O)三種類型。1902年他的學(xué)生Decastello及Sturli發(fā)現(xiàn)了第4種血型，即AB型。ABO血型的發(fā)現(xiàn)，開啟了血液免疫學(xué)及免疫遺傳學(xué)的新紀(jì)元。第六頁，共六十四頁。

ABH抗原的生化(shēnɡhuà)結(jié)構(gòu)編碼巖藻糖轉(zhuǎn)移酶添加巖藻糖到血型多聚糖前體的終端半乳糖上特異性H抗原形成編碼A或B轉(zhuǎn)移酶構(gòu)建完成A或B抗原H基因ABO基因第七頁，共六十四頁。第八頁，共六十四頁。第九頁，共六十四頁。

ABO抗原(kàngyuán)的發(fā)育

在胚胎早期A和B抗原就開始產(chǎn)生。但到出生時(shí)，還沒有完全發(fā)育，與抗A和抗B試劑血清反應(yīng)比成人(chéngrén)弱，2～4歲時(shí)才能充分表現(xiàn)出抗原性。

第十頁，共六十四頁。ABO抗體(kàngtǐ)的發(fā)育出生(chūshēng)時(shí)，正常的抗A和抗B還沒產(chǎn)生或較弱，到三個(gè)月時(shí)，反應(yīng)基本上與成年人的一樣。5～10歲時(shí)，抗體的產(chǎn)生達(dá)到高峰，具有較高效價(jià)。第十一頁，共六十四頁。第十二頁，共六十四頁。孟買(mènɡm(xù)ǎi)型與類孟買(mènɡm(xù)ǎi)型孟買型Bombayphenotype紅細(xì)胞上沒有(méiyǒu)A、B、H抗原，血清中存在抗-A、抗-B和抗-H抗體。表型標(biāo)記為：OhO、OhA、OhB、OhAB類孟買型Bombay-likephenotype表型標(biāo)記為:Ah、Bh、ABh第十三頁，共六十四頁。ABO血型(xuèxíng)的亞型ABO亞型（subgroups)，也稱變異型，紅細(xì)胞同屬于一種血型抗原，但在結(jié)構(gòu)上有一定的差異，性能也不完全相同。由于抗原弱，在用已知抗體檢測(cè)抗原和用已知抗原檢測(cè)被檢血清時(shí)不符合血清學(xué)反應(yīng)特征(tèzhēng)。A亞型：A1和A2是血型血清學(xué)方法確定的最重要的A型紅細(xì)胞亞型，一般認(rèn)為有兩種抗原A和A1，A1型人紅細(xì)胞上有這兩種抗原，A2型人紅細(xì)胞只有A抗原。亞洲人中A1型約占27%；A2型人稀少。其它A亞型：A3、Ax、Aend、Am、Ay和Ael。B亞型一般比A亞型更少：B3、Bx、Bm和Bel第十四頁，共六十四頁。幾種(jǐzhǒnɡ)A亞型紅細(xì)胞上的A抗原第十五頁，共六十四頁。A1與A2的區(qū)分(qūfēn)A1型紅細(xì)胞：A抗原和A1抗原A2型紅細(xì)胞：A抗原雙花扁豆(biǎndòu)（Dolichosbiflous)種子提取液第十六頁，共六十四頁。Rh血型(xuèxíng)系統(tǒng)1939年Levine及Stetson在一個(gè)新生兒溶血(rónɡxuè)疾病的母親的血清中，發(fā)現(xiàn)可凝集85%白種人的紅血球抗體。1940年Landsteiner及Wiener以恒河猴(Rhesusmonkey)的紅血球免疫兔子產(chǎn)生抗體，也可凝集85%白種人的紅血球。因此命名為Rh抗原。（恒河猴L(fēng)W抗原）第十七頁，共六十四頁。Rh血型系統(tǒng)(xìtǒng)抗原RH血型系統(tǒng)抗原46個(gè)，其中D、C、E、c、e為主要的血型抗原。D抗原：只存在與人紅細(xì)胞膜，不存在與其它組織細(xì)胞中，體液分泌中也無D抗原。D抗原分類：根據(jù)(gēnjù)D抗原的數(shù)量和質(zhì)量不同以及抗原性不同，將D抗原分類為5種：常見D抗原、弱D、不完全型D、不完全型弱D及增強(qiáng)D。第十八頁，共六十四頁。Rh血型系統(tǒng)抗原(kàngyuán)頻率Dantigen–85%Cantigen–70%cantigen–80%Eantigen–30%eantigen–98%第十九頁，共六十四頁。Rh血型系統(tǒng)(xìtǒng)抗體Rh抗體主要通過輸血和妊娠免疫(miǎnyì)產(chǎn)生。一般在初次免疫(miǎnyì)后2-6個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)。對(duì)Rh(D)初次免疫的人，經(jīng)再次免疫后，在三周內(nèi)抗體濃度可達(dá)最高峰。同種異型抗體：RhD陰性人輸用D陽性血而產(chǎn)生的抗-D抗體。絕大部分人血清同種異體抗體都是IgG類抗體，多數(shù)在鹽水介質(zhì)中不發(fā)生直接凝集。單克隆抗-D：人鼠或人人淋巴細(xì)胞雜交瘤制備而成。第二十頁，共六十四頁。紅細(xì)胞血型(xuèxíng)相容性檢測(cè)交叉(jiāochā)配血血型(xuèxíng)檢測(cè)抗體篩檢及鑒定第二十一頁，共六十四頁。紅細(xì)胞血型(xuèxíng)血清學(xué)反應(yīng)已知紅細(xì)胞：反定型(dìngxíng)紅細(xì)胞不規(guī)則抗體檢測(cè)紅細(xì)胞譜紅細(xì)胞已知抗體(kàngtǐ)：抗A抗B抗D抗M、抗N……AHG用已知的檢測(cè)未知的第二十二頁，共六十四頁。血型(xuèxíng)檢測(cè)血型檢測(cè)：確定待檢者的ABO、RhD血型。ABO血型定型：正定型：是用已知特異性抗體來測(cè)定(cèdìng)紅細(xì)胞上有無相應(yīng)的抗原。反定型：是用已知抗原的紅細(xì)胞來測(cè)定血清中有無相應(yīng)的抗體。第二十三頁，共六十四頁。ABO血型(xuèxíng)定型抗A抗BA細(xì)胞B細(xì)胞結(jié)果(試劑)(待檢者)AB第二十四頁，共六十四頁。ABO血型(xuèxíng)定型正定型反定型血型比例%（亞洲）抗-A抗-BA細(xì)胞B細(xì)胞--++O43++--AB5+--+A27-++-B25第二十五頁，共六十四頁。RhD抗原(kàngyuán)檢測(cè)抗D結(jié)果(試劑)(待檢者)D陽性第二十六頁，共六十四頁。我國(guó)臨床常規(guī)RhD血型的檢測(cè)(jiǎncè)，應(yīng)用不識(shí)別DVI型D抗原的單克隆抗體。對(duì)不出現(xiàn)凝集的標(biāo)本判斷為RhD陰性；對(duì)出現(xiàn)弱反應(yīng)（凝集反應(yīng)強(qiáng)度≤2+）的病人（受血者），將其視為RhD陰性，只能輸用RhD陰性的紅細(xì)胞；對(duì)弱反應(yīng)的獻(xiàn)血者視為RhD陽性。初篩RhD陰性和弱反應(yīng)的標(biāo)本，應(yīng)該進(jìn)一步研究確定其RhD表型，應(yīng)用能夠識(shí)別DVI型的單克隆抗體；同時(shí)進(jìn)行吸收放散實(shí)驗(yàn)，以排除Del型。第二十七頁，共六十四頁。亞型鑒定(jiàndìng)方法凝集抑制試驗(yàn)：可溶性抗原與相應(yīng)(xiāngyīng)已知抗體結(jié)合能夠全部或部分抑制抗體活性，通過此試驗(yàn)可確定抗原的特異性。又稱唾液分泌試驗(yàn)。吸收放散試驗(yàn)：抗體與相應(yīng)抗原在適合條件下發(fā)生凝集或致敏，但這種結(jié)合是可逆的，如改變某些物理?xiàng)l件時(shí)，抗體又可以從結(jié)合的紅細(xì)胞上解脫下來，這種試驗(yàn)方法叫做吸收放散試驗(yàn)。第二十八頁，共六十四頁。放散(fàngsàn)技術(shù)第二十九頁，共六十四頁。放散(fàngsàn)試驗(yàn)種類酸放散(fàngsàn)熱放散ZZAP放散二磷酸氯喹放散第三十頁，共六十四頁。ABO亞型的血清學(xué)特征(tèzhēng)AABBTECHNICALMANUAL16theditionP366第三十一頁，共六十四頁。各種(ɡèzhǒnɡ)A亞型的鑒別紅細(xì)胞弱凝集A3AxAend混合視野凝集(Mf），唾液中含有A物質(zhì)A3與抗A10％紅細(xì)胞呈十分弱的mf凝集Aend及/或抗只與抗AB呈弱凝集AxA1B反應(yīng)不凝集能吸附及放散抗AAmAyAel容易吸附放散抗AAm分泌型唾液中有一定量的A物質(zhì)不容易吸附放散抗AAy分泌型唾液含少量的A物質(zhì)吸附放散抗AAel分泌型唾液只含H物質(zhì)無A物質(zhì)第三十二頁，共六十四頁?？笵單克隆抗體(kàngtǐ)第三十三頁，共六十四頁?？贵w(kàngtǐ)篩檢及鑒定用已知抗原的O型紅細(xì)胞（篩檢細(xì)胞及譜細(xì)胞），檢測(cè)(jiǎncè)病人血清中是否含有抗體及對(duì)所檢測(cè)(jiǎncè)到的抗體特異性進(jìn)行鑒定。第三十四頁，共六十四頁?？贵w(kàngtǐ)定義不規(guī)則抗體的含義：通常把抗A、抗B以外的所有紅細(xì)胞血型抗體稱為不規(guī)則抗體。如抗D、抗N、抗M抗體。完全抗體或不完體抗體：與相應(yīng)抗原紅細(xì)胞在鹽水介質(zhì)中或在中性微柱凝膠中出現(xiàn)(chūxiàn)凝集反應(yīng)的抗體稱為完全抗體。完全抗體大部分是IgM類抗體，但非所有IgM類抗體都是完全抗體。大部分IgG抗體為不完全抗體，但一些IgG抗體也是完全抗體。第三十五頁，共六十四頁。臨床有意義和臨床無意義抗體：能引起新生兒溶血?。℉DN）和血型不相容輸血免疫(miǎnyì)溶血的抗體為臨床有意義抗體。如母體免疫(miǎnyì)IgG抗體抗-D能夠穿過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，引起胎兒溶血。反之為臨床無意義抗體，如Lewis血型同種異型抗體常是IgM抗體，但極少見溶血性輸血反應(yīng)和引起HDN，故該血型抗體為臨床無意義抗體。第三十六頁，共六十四頁。檢測(cè)(jiǎncè)方法方法原理局限性酶檢測(cè)技術(shù)破壞紅細(xì)胞表面的唾液酸，降低其表面電荷，減少紅細(xì)胞間斥力，使得紅細(xì)胞靠攏，在不完全抗體的作用下，紅細(xì)胞便出現(xiàn)凝集。改變其他系統(tǒng)(尤其是M，N，F(xiàn)ya，F(xiàn)yb)抗原的構(gòu)型破壞其抗原性。酶還可能改變細(xì)胞懸液的物理性質(zhì)，可導(dǎo)致紅細(xì)胞的非免疫性聚集。凝聚胺法凝聚胺是一種多價(jià)陽離子氨基聚合物，它可以引起正常紅細(xì)胞的可逆性凝集，如果被抗體致敏的紅細(xì)胞與凝聚胺連在一起，就會(huì)發(fā)生不可逆凝集。在使用凝聚胺檢測(cè)抗體活性時(shí)，抗原抗體在低離子介質(zhì)中孵育，可促進(jìn)紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體的反應(yīng)，使得抗原抗體更有效的結(jié)合。經(jīng)再懸液中和后，抗體介導(dǎo)的特異性凝集仍然存在，而非特異凝集的細(xì)胞散開。破壞Kell系統(tǒng)抗原抗人球蛋白法一些IgG類抗體(主要是免疫抗體，如Rh血型抗體)是一種7s球蛋白，分子量小，分子長(zhǎng)度只250°A，與紅細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)合后，在鹽水介質(zhì)中不出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應(yīng)，但在加入抗-IgG的抗體后，以其搭橋則可出現(xiàn)凝集反應(yīng)操作繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)第三十七頁，共六十四頁。–––––––––––––––––––––––––––––––––––第三十八頁，共六十四頁。酶作用(zuòyòng)縮短紅細(xì)胞間距離–––––––––––––第三十九頁，共六十四頁。酶對(duì)紅細(xì)胞抗原(kàngyuán)的作用抗原增強(qiáng)抗原性破壞KiddRhLewisIPFyaFybMNSs第四十頁，共六十四頁。抗人球蛋白檢測(cè)(jiǎncè)技術(shù)分類：直接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)(shíyàn)（DAT）間接抗人球蛋白試驗(yàn)(IAT)試劑：多特異性抗人球(抗-IgG+抗-C3)單特異性抗人球(抗-IgG或抗-C3)第四十一頁，共六十四頁。SensitizationAgglutinationbyAnti-humanGlobulin第四十二頁，共六十四頁。DATPt.RBCs+AHG觀察凝集并判讀(pàndú)結(jié)果IATRBCs+血清+AHG觀察(guānchá)凝集并判讀結(jié)果抗人球蛋白檢測(cè)(jiǎncè)技術(shù)第四十三頁，共六十四頁?？谷饲虻鞍自囼?yàn)(shìyàn)應(yīng)用直接抗人球蛋白試驗(yàn)在臨床上主要應(yīng)用于：胎母血型不合新生兒溶血?。℉DN）免疫溶血性輸血反應(yīng)（LHTR）自身免疫溶血性貧血（AIHA）藥物導(dǎo)致的免疫溶血性貧血間接抗人球蛋白試驗(yàn)應(yīng)用于：紅細(xì)胞血型定型；相容性配血實(shí)驗(yàn)(shíyàn)；產(chǎn)前檢查；弱D抗原檢測(cè)第四十四頁，共六十四頁。洗滌(xǐdí)加入(jiārù)AHG離心陽性(yángxìng)直接抗人球蛋白第四十五頁，共六十四頁。間接(jiànjiē)抗人球蛋白+離心孵育后洗滌陽性陰性陽性陰性加入AHG第四十六頁，共六十四頁。加入對(duì)照細(xì)胞(xìbāo)后離心觀察結(jié)果Coombs’

對(duì)照(duìzhào)細(xì)胞(CCC,CC)假陰性(yīnxìng)結(jié)果陰性結(jié)果陽性陰性第四十七頁，共六十四頁。洗滌加入抗人球蛋白試劑后離心陽性未洗滌假陰性FalseNegativeTests第四十八頁，共六十四頁。抗體(kàngtǐ)篩檢篩檢紅細(xì)胞IS37℃30’AHGCCOI1+--2+OII3+--2+1、表明抗體(kàngtǐ)為IgM抗體

2、存在劑量效應(yīng)第四十九頁，共六十四頁。劑量效應(yīng)Kidd、Duffy、Rh及MN（MNSs）系統(tǒng)中抗原(kàngyuán)存在劑量效應(yīng)。第五十頁，共六十四頁。抗體(kàngtǐ)篩檢篩檢紅細(xì)胞IS37℃30’AHGCCOI--3+NTOII---2+表明(biǎomíng)篩檢的抗體為IgG類抗體第五十一頁，共六十四頁?？贵w(kàngtǐ)鑒定DCcEeKkAHG1++--+++3+2+-++--+-3+-+-++-3+4-++-+-+-5--+++-+-6--+-+++3+Anti-K第五十二頁，共六十四頁?？贵w(kàngtǐ)鑒定DCcEeJkaJkbAHG1++--+++W+2+-++--+-3+-+-++-2+4-++-+++W+5--+++-+-6--+-++-2+Anti-Jka第五十三頁，共六十四頁。交叉(jiāochā)配血試驗(yàn)相容性配血試驗(yàn)，檢測(cè)受血者血清中抗體和獻(xiàn)血者紅細(xì)胞抗原(kàngyuán)是否相合試驗(yàn)為主側(cè)交叉配血試驗(yàn)，檢測(cè)受血者紅細(xì)胞和獻(xiàn)血者血清中抗體是否相合試驗(yàn)為次側(cè)交叉配血試驗(yàn)，對(duì)其中是不完全抗體的，應(yīng)用間接抗人球蛋白試驗(yàn)確定其相容性。第五十四頁，共六十四頁。目的防止發(fā)生輸血反應(yīng)增加體內(nèi)紅細(xì)胞的存活率進(jìn)一步確定ABO血型定型正確檢測(cè)(jiǎncè)抗體的另一方法第五十五頁，共六十四頁。血型檢測(cè)常規(guī)(chángguī)方法玻片法試管(shìguǎn)法微板法固相凝集法微柱凝膠法第五十六頁，共六十四頁。孵育洗