臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的質(zhì)量保證新 臨床聚合酶鏈反應(yīng)測(cè)定的質(zhì)量保證

臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的

質(zhì)量保證

衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心李金明定義質(zhì)量保證(QualityAssurance,QA)為一產(chǎn)品或服務(wù)滿(mǎn)足特定質(zhì)量要求提供充分可信性所必要的有計(jì)劃的和系統(tǒng)的措施。

室內(nèi)質(zhì)量控制（InternalQualityControl,IQC)由實(shí)驗(yàn)室工作人員，采取一定的方法和步驟，連續(xù)評(píng)價(jià)本實(shí)驗(yàn)室工作的可靠性程度，旨在監(jiān)測(cè)和控制本實(shí)驗(yàn)室工作的精密度，提高本室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗(yàn)的一致性，以確定測(cè)定結(jié)果是否可靠、可否發(fā)出報(bào)告的一項(xiàng)工作。

定義室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（ExternalQualityAssessment,EQA）為客觀比較一實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定結(jié)果與靶值的差異，由外單位機(jī)構(gòu)，采取一定的辦法，連續(xù)、客觀地評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果，使各實(shí)驗(yàn)室之間的結(jié)果具有可比性。這是對(duì)實(shí)驗(yàn)室操作和實(shí)驗(yàn)方法的回顧性評(píng)價(jià)，而不是用來(lái)決定在實(shí)時(shí)的測(cè)定結(jié)果的可接受性。當(dāng)EQA用來(lái)為執(zhí)業(yè)許可或?qū)嶒?yàn)室認(rèn)證的目的而評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室操作時(shí)，常描述為實(shí)驗(yàn)室能力比對(duì)檢驗(yàn)（Proficiencytesting,PT）。在以前的文獻(xiàn)中，EQA常描述室間質(zhì)量控制。定義

準(zhǔn)確度(Accuracy)

待測(cè)物的測(cè)定值與其真值的一致性程度。準(zhǔn)確度不能直接以數(shù)值表示，通常以不準(zhǔn)確度來(lái)間接衡量。對(duì)一分析物重復(fù)多次測(cè)定，所得均值與其真值或參考靶值之間的差異亦即偏差即為測(cè)定的不準(zhǔn)確度。

偏差(Bias)

待測(cè)物的測(cè)定值與一可接受參考值之間的差異。定義精密度(Precision)在一定條件下所獲得的獨(dú)立的測(cè)定結(jié)果之間的一致性程度。與準(zhǔn)確度一樣，精密度同樣也是以不精密度來(lái)間接表示。測(cè)定不精密度的主要來(lái)源是隨機(jī)誤差，以標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和/或變異系數(shù)（CV）具體表示。SD或CV越大，表示重復(fù)測(cè)定的離散度越大，精密度越差，反之則越好。

定義批(Run)在相同條件下所獲得的一組測(cè)定。

均值（Mean）

標(biāo)準(zhǔn)差（Standarddeviation,SD或s）

變異系數(shù)（Coefficientofvariation,CV）

定義正態(tài)分布(Gaussiandistribution)當(dāng)一質(zhì)控物用同一方法在不同的時(shí)間重復(fù)多次測(cè)定，當(dāng)測(cè)定數(shù)據(jù)足夠多時(shí)，如以橫軸表示測(cè)定值，縱軸表示在大量測(cè)定中相應(yīng)測(cè)定值的個(gè)數(shù)，則可得到一個(gè)兩頭低，中間高，中為所有測(cè)定值的均值，左右對(duì)稱(chēng)的“鐘形”曲線(xiàn)，亦即正態(tài)分布，又稱(chēng)高斯分布。

定義正態(tài)分布的基本統(tǒng)計(jì)學(xué)含義可用均數(shù)（）、標(biāo)準(zhǔn)差（s）和概率來(lái)說(shuō)明。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室

常規(guī)測(cè)定步驟標(biāo)本收集：選擇測(cè)定項(xiàng)目、標(biāo)本收集和保存。實(shí)驗(yàn)室測(cè)定：標(biāo)本接收、貼標(biāo)簽、樣本處理、核酸擴(kuò)增、產(chǎn)物檢測(cè)、測(cè)定的有效性和臨床診療價(jià)值。報(bào)告和解釋?zhuān)航Y(jié)果發(fā)出、結(jié)果解釋和臨床管理。質(zhì)量保證、室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評(píng)之間的關(guān)系臨床標(biāo)本收集、運(yùn)送、保存

及其質(zhì)量控制

標(biāo)本收集

標(biāo)本保存標(biāo)本運(yùn)送

標(biāo)本收集標(biāo)本采集時(shí)間對(duì)擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果的影響

標(biāo)本采集部位的準(zhǔn)備標(biāo)本的類(lèi)型和采集量采樣質(zhì)量的評(píng)價(jià)采樣及運(yùn)輸容器標(biāo)本采集中的防污染標(biāo)本采集時(shí)間對(duì)擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果的影響在疾病發(fā)展過(guò)程中，標(biāo)本采集過(guò)早或過(guò)晚都可能會(huì)給出假陰性結(jié)果。

標(biāo)本采集部位的準(zhǔn)備標(biāo)本采集部位的清潔消毒可去掉污染的微生物或其它雜物,但應(yīng)適度,過(guò)度清潔消毒有可能會(huì)去掉或破壞靶微生物,故標(biāo)本采集部位的準(zhǔn)備應(yīng)由訓(xùn)練有素的人員進(jìn)行。標(biāo)本的類(lèi)型和采集量標(biāo)本的類(lèi)型:血清(漿)、分泌物、痰、糞便、尿和腦脊液等。標(biāo)本的采集量:應(yīng)根據(jù)所測(cè)病原體而定。一般來(lái)說(shuō)，如果標(biāo)本的量對(duì)病原體培養(yǎng)夠用的話(huà)，則其量亦足以用于核酸提取及其后的擴(kuò)增檢測(cè)。對(duì)于定量測(cè)定來(lái)說(shuō)，對(duì)標(biāo)本的收集要求更為精確。采樣質(zhì)量的評(píng)價(jià)血清(漿)標(biāo)本:溶血、脂血等；分泌物、痰：評(píng)價(jià)內(nèi)容包括細(xì)胞組成，所需類(lèi)型細(xì)胞的數(shù)量和核酸總量。評(píng)價(jià)方法：包括肉眼觀察,顯微鏡下觀察和化學(xué)分析等。

采樣及運(yùn)輸容器

標(biāo)本的采集材料如棉簽應(yīng)為一次性使用；運(yùn)輸容器亦應(yīng)為密閉的一次性裝置；采樣所用的防腐劑、抗凝劑及相關(guān)試劑材料不應(yīng)對(duì)核酸擴(kuò)增及檢測(cè)過(guò)程造成干擾。

標(biāo)本采集中的防污染

采集中要特別注意污染，防止混入操作者的頭發(fā)、表皮細(xì)胞、痰液等；如使用玻璃器皿，必須經(jīng)高壓滅菌，以使可能存在的RNase失活。標(biāo)本保存

靶核酸(尤其是RNA)易受核酸酶的作用而迅速降解，因此標(biāo)本的保存對(duì)于核酸擴(kuò)增測(cè)定的有效性極為重要。

使用GITC作為穩(wěn)定劑保存標(biāo)本，標(biāo)本可在室溫下穩(wěn)定約7天。

標(biāo)本保存臨床體液標(biāo)本長(zhǎng)期保存應(yīng)在-70℃下。

如為提取核酸后用于DNA擴(kuò)增分析的樣本，可于10mmol/LTris～8.0)緩沖液中4℃下保存。

用于RNA擴(kuò)增分析的樣本，則應(yīng)于上述緩沖液中-80℃或液氮下保存。

核酸的乙醇沉淀物則可于-20℃下保存。

標(biāo)本運(yùn)送

樣本一經(jīng)采集，則應(yīng)盡可能快的送至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。樣本中如加入了適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑,如用于RNA測(cè)定加入GITC的血清(漿)樣本和用于DNA測(cè)定的EDTA抗凝血等,則可在室溫下運(yùn)送或郵寄。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)待測(cè)靶核酸的特性，對(duì)各種臨床樣本的運(yùn)送條件作出相應(yīng)的規(guī)定。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的室內(nèi)質(zhì)量控制測(cè)定前的質(zhì)量控制核酸樣本的制備及其質(zhì)量控制統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)量控制質(zhì)量控制的評(píng)價(jià)測(cè)定前質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室設(shè)施、儀器設(shè)備及管理理想的試劑和操作方法人員培訓(xùn)實(shí)驗(yàn)室設(shè)施、儀器設(shè)備及管理臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有充分合理的空間、良好的照明和空調(diào)設(shè)備；實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備應(yīng)保養(yǎng)良好，實(shí)驗(yàn)用品要達(dá)到相應(yīng)的要求。加樣器的校準(zhǔn)？帶濾塞吸頭的使用及質(zhì)檢？離心機(jī)？熱循環(huán)儀？水浴箱和/或恒溫干浴儀？酶標(biāo)儀和洗板機(jī)？基因擴(kuò)增儀器設(shè)備的質(zhì)控帶濾塞吸頭的使用及質(zhì)檢首先制備一個(gè)含1～2%甘油及色素（如甲基橙）的水溶液，如果吸頭的最大體積為100μl，則將加樣器吸取體積調(diào)至110～120μl，再套上吸頭后吸取上述有色液體。如果吸頭質(zhì)量好，則有色液體不應(yīng)出現(xiàn)在濾塞之上，否則說(shuō)明濾塞不嚴(yán)。

帶濾塞吸頭的使用及質(zhì)檢用實(shí)驗(yàn)來(lái)檢驗(yàn)帶濾塞吸頭的質(zhì)量：先純化制備數(shù)份強(qiáng)陽(yáng)性和數(shù)份陰性核酸標(biāo)本，然后將加樣器吸取量設(shè)至擴(kuò)增加樣所需的體積，使用待評(píng)價(jià)帶濾塞吸頭對(duì)一份強(qiáng)陽(yáng)性樣本來(lái)回吸取10次（模擬10份陽(yáng)性樣本的吸取），將最后一次的吸取液加至一含擴(kuò)增反應(yīng)液的管中，之后，換一個(gè)新吸頭，連續(xù)吸取10份陰性樣本分別至10個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)管中，此過(guò)程重復(fù)3～5次，最后對(duì)每一管按所用試劑方法進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)。強(qiáng)陽(yáng)性樣本應(yīng)為強(qiáng)陽(yáng)性，陽(yáng)性弱或出現(xiàn)陰性則說(shuō)明吸頭可能含有擴(kuò)增抑制物。所有陰性樣本應(yīng)為陰性，出現(xiàn)陽(yáng)性則表明吸頭不能有效地防止氣溶膠對(duì)加樣器的污染。

擴(kuò)增儀孔間溫度的重復(fù)性和均一性的檢測(cè)方法一是使用一種熱電偶探針、微伏轉(zhuǎn)換器和自動(dòng)圖示記錄儀組成擴(kuò)增加熱模塊孔內(nèi)溫度監(jiān)測(cè)記錄系統(tǒng)，當(dāng)孔間溫度變異超出1℃時(shí)，其可測(cè)出來(lái)。具體做法是將裝有TE緩沖液并上加石蠟油的擴(kuò)增反應(yīng)管放置于擴(kuò)增儀各孔中，熱電偶探針透過(guò)擴(kuò)增反應(yīng)管蓋插至緩沖液中，然后按程序進(jìn)行一個(gè)常規(guī)的PCR擴(kuò)增，加熱模塊如為96孔，則至少要測(cè)定12孔不同位置孔內(nèi)的溫度，在整個(gè)擴(kuò)增過(guò)程中，可移動(dòng)熱電偶探針至上述不同孔中監(jiān)測(cè)溫度，但每一孔內(nèi)溫度監(jiān)測(cè)至少要有一個(gè)擴(kuò)增周期。

擴(kuò)增儀孔間溫度的重復(fù)性和均一性的檢測(cè)方法第二種方法并非直接測(cè)定孔內(nèi)溫度，而是通過(guò)擴(kuò)增功能來(lái)間接獲知孔間的均一性，即將加有一已知的含一定濃度的陽(yáng)性質(zhì)控樣本的擴(kuò)增反應(yīng)管置于擴(kuò)增儀各孔中按常規(guī)進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)，觀察結(jié)果的一致性程度，如果有某一個(gè)或幾個(gè)孔結(jié)果有問(wèn)題，則應(yīng)確定這一個(gè)或幾個(gè)孔是否會(huì)重復(fù)性地得到假陰性結(jié)果，如果是，則表明相應(yīng)孔的熱傳導(dǎo)有損壞。

理想的試劑和操作方法

試劑盒的質(zhì)檢定量測(cè)定的精密度是測(cè)定組成步驟的變異和的平方根(SD)=上式中SDa、SDb、SDc是步驟a、b、c等（例如試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本采集、核酸提取、擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測(cè)等）的標(biāo)準(zhǔn)差；理想的試劑和操作方法改善測(cè)定精密度的措施必須首先著重在最不精密的步驟上，應(yīng)對(duì)試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本收集、核酸提取、測(cè)定方法和儀器操作寫(xiě)出“標(biāo)準(zhǔn)操作程序”(SOP)

人員培訓(xùn)

臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的操作主要是標(biāo)本處理中的核酸提取步驟，這其中所涉及的又主要是加樣器的使用，盡管操作簡(jiǎn)單，但由于均為微量操作，要獲得穩(wěn)定可靠的測(cè)定結(jié)果，操作人員需要一定的專(zhuān)業(yè)技術(shù)知識(shí)和經(jīng)驗(yàn)，要盡可能做到知其然又知其所以然。核酸樣本的制備、擴(kuò)增檢測(cè)

及其質(zhì)量控制一般核酸提取試劑促使靶核酸從細(xì)胞內(nèi)釋出的原理核酸的分離純化靶核酸提取的質(zhì)量臨床標(biāo)本及核酸提取中可能存在的抑制和干擾物質(zhì)核酸樣本制備及擴(kuò)增檢測(cè)的質(zhì)控產(chǎn)物檢測(cè)的質(zhì)控一般核酸提取試劑促使靶核酸從細(xì)胞內(nèi)釋出的原理靶核酸可以與宿主細(xì)胞整合，核內(nèi)游離及胞漿內(nèi)各種構(gòu)形存在于細(xì)胞內(nèi)，如測(cè)定的是病原微生物,則靶核酸存在于細(xì)菌、病毒、原蟲(chóng)或真菌細(xì)胞內(nèi)，如果上述細(xì)胞破裂,則靶核酸亦可存在于細(xì)胞外。

一般均使用去垢劑(如Triton-100)裂解細(xì)胞，用一種蛋白裂解酶(如蛋白酶K)消化結(jié)合于核酸的蛋白質(zhì)，從而將靶核酸從細(xì)胞內(nèi)釋放出來(lái)。核酸的分離純化

核酸的分離純化就是要將蛋白、脂類(lèi)等干擾核酸擴(kuò)增的物質(zhì)去除。

經(jīng)典方法硅吸附法對(duì)于商品核酸提取試劑盒，臨床實(shí)驗(yàn)室在使用前，必須對(duì)其核酸提取純度和效率進(jìn)行評(píng)價(jià)。

靶核酸提取的質(zhì)量

純化的靶核酸的完整性：可使用凝膠電泳將樣本的核酸提取物與一核酸標(biāo)準(zhǔn)比較測(cè)定。

核酸提取的產(chǎn)率：可在A260讀數(shù)測(cè)定。核酸純度：可通過(guò)提取物A260/A280比率判定血清或血漿中病原體核酸純化純度：采用一種間接的方法，即使用已知病原體含量的溶血和/或脂血標(biāo)本用待評(píng)價(jià)試劑提取，然后進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)，比較所得到的結(jié)果

臨床標(biāo)本及核酸提取中可能存在的抑制和干擾物質(zhì)

臨床標(biāo)本中：血清或血漿中的血紅素及其代謝產(chǎn)物、痰中酸性多糖和糖蛋白成份、降解靶核酸的核酸酶等。核酸提取中：許多試劑如乙二胺四乙酸(EDTA)、去垢劑如十二烷基硫酸鹽(SDS)和chaotrope試劑如異硫氰酸胍和鹽酸胍等、酚、氯仿、乙醇等有機(jī)溶劑。

核酸樣本制備及擴(kuò)增檢測(cè)的質(zhì)控對(duì)臨床標(biāo)本中可能存在的抑制/干擾物的質(zhì)控措施

核酸提取及擴(kuò)增有效性的質(zhì)控

對(duì)臨床標(biāo)本中可能存在的

抑制/干擾物的質(zhì)控措施質(zhì)控措施：采用內(nèi)質(zhì)控（internalcontrol,IC）（通常稱(chēng)為內(nèi)標(biāo)）的方法內(nèi)標(biāo)有兩種,即競(jìng)爭(zhēng)性的和非競(jìng)爭(zhēng)性的內(nèi)標(biāo)。內(nèi)標(biāo)設(shè)置的必要性？核酸提取及擴(kuò)增有效性的質(zhì)控

已知弱陽(yáng)性質(zhì)控樣本（基質(zhì)與待測(cè)標(biāo)本相同）：至少帶1份，其最后的檢測(cè)結(jié)果，應(yīng)是核酸提取和擴(kuò)增檢測(cè)的有效性的綜合反映。已知陰性質(zhì)控樣本（基質(zhì)與待測(cè)標(biāo)本相同）：至少帶1份，擴(kuò)增測(cè)定的結(jié)果可以判斷核酸提取過(guò)程中是否發(fā)生污染。

統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)量控制

理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件測(cè)定中質(zhì)控樣本的設(shè)置、數(shù)量及排列順序

統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)控的特點(diǎn)

統(tǒng)計(jì)質(zhì)控方法理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件基質(zhì)與待測(cè)樣本一致；所含待測(cè)物濃度接近試驗(yàn)的決定性水平；穩(wěn)定；靶值或預(yù)期結(jié)果已定；無(wú)已知的生物傳染危險(xiǎn)性；單批可大量獲得；價(jià)廉測(cè)定中質(zhì)控樣本的設(shè)置、數(shù)量及排列順序每次檢測(cè)究竟使用幾個(gè)質(zhì)控樣本并排在臨床標(biāo)本中的哪個(gè)位置最為適宜？從理論上說(shuō)，為最大可能地檢出實(shí)驗(yàn)的隨機(jī)和系統(tǒng)誤差，應(yīng)每隔幾份臨床標(biāo)本插入1份質(zhì)控樣本，但考慮國(guó)內(nèi)目前的實(shí)際情況及成本效益，一般來(lái)說(shuō)，如果臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的標(biāo)本量不是特別大，定性測(cè)定有一份接近c(diǎn)ut-off的弱陽(yáng)性和一份陰性質(zhì)控樣本應(yīng)可以滿(mǎn)足要求。而定量測(cè)定則要根據(jù)試驗(yàn)的測(cè)定范圍，采用高、中、低三種濃度的質(zhì)控樣本。至于在測(cè)定中的排列順序，可排于標(biāo)準(zhǔn)品或校準(zhǔn)品之后，臨床樣本之前。

臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控的獨(dú)特性即監(jiān)測(cè)污染發(fā)生的陰性質(zhì)控的設(shè)置。

應(yīng)該包括1份陰性原血清樣本、1份在標(biāo)本核酸提取過(guò)程中帶入的一個(gè)空管和僅含擴(kuò)增反應(yīng)混合液的管。

陰性原血清質(zhì)控樣本的功能

監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室的以前擴(kuò)增產(chǎn)物的污染；

由實(shí)驗(yàn)操作所致的標(biāo)本間的交叉污染；擴(kuò)增反應(yīng)試劑的污染。

在標(biāo)本核酸提取過(guò)程中帶入的一個(gè)空管的功能基本功能與陰性原血清質(zhì)控樣本相同，但不同的是，其基質(zhì)為水，不含陰性原血清質(zhì)控樣本中可能有的擴(kuò)增抑制物，因而對(duì)污染的反映更為靈敏；不能取代原血清陰性樣本。僅含擴(kuò)增反應(yīng)混合液的管的功能監(jiān)測(cè)擴(kuò)增試劑是否發(fā)生污染，具有較強(qiáng)的污染鑒別性。如想鑒別實(shí)驗(yàn)室是否發(fā)生污染，可將一個(gè)或多個(gè)空管打開(kāi)靜置于標(biāo)本制備區(qū)30～60分鐘，然后加入擴(kuò)增反應(yīng)混合液同時(shí)以水替代核酸樣本擴(kuò)增，如為陽(yáng)性，而上述僅含擴(kuò)增反應(yīng)混合液的管為陰性，則說(shuō)明實(shí)驗(yàn)室以前擴(kuò)增產(chǎn)物的存在。

統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)控的特點(diǎn)

檢驗(yàn)誤差有兩類(lèi)，一是系統(tǒng)誤差，一是隨機(jī)誤差。系統(tǒng)誤差通常表現(xiàn)為質(zhì)控物測(cè)定均值的漂移，是由操作者所使用的儀器設(shè)備、試劑、標(biāo)準(zhǔn)品或校準(zhǔn)物出現(xiàn)問(wèn)題而造成的，這種誤差可以通過(guò)前述的措施方法加以控制，是可以排除的。隨機(jī)誤差則表現(xiàn)為測(cè)定SD的增大，主要是由實(shí)驗(yàn)操作人員的操作等隨機(jī)因素所致，其出現(xiàn)難以完全避免和控制。統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)控的功能統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)控的功能就是發(fā)現(xiàn)誤差的產(chǎn)生及分析誤差產(chǎn)生的原因，采取措施予以避免。開(kāi)展統(tǒng)計(jì)質(zhì)量控制前，應(yīng)將可以控制的誤差產(chǎn)生因素盡可能地加以控制，這不但是做好室內(nèi)質(zhì)控的前提，也是保證常規(guī)檢驗(yàn)工作質(zhì)量的先決條件。統(tǒng)計(jì)質(zhì)控方法

基線(xiàn)測(cè)定質(zhì)控規(guī)則的表達(dá)方式及定義

Levey-Jennings質(zhì)控圖方法

Levey-Jennings質(zhì)控圖結(jié)合Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法

累積和(CUSUM)質(zhì)控方法

“即刻法”質(zhì)控方法

基線(xiàn)測(cè)定最佳條件下的變異（Optimalconditionsvariance,OCV）和常規(guī)條件下的變異（Routineconditionsvariance,RCV）；當(dāng)RCV與OCV接近，或小于2OCV時(shí)，則RCV是可以接受的。以上為批間變異。批內(nèi)變異的測(cè)定；室內(nèi)質(zhì)控物的測(cè)定準(zhǔn)確度的評(píng)價(jià)。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)IQC統(tǒng)計(jì)

計(jì)算問(wèn)題可使用質(zhì)控樣本擴(kuò)增后的拷貝數(shù)/ml或IU/ml來(lái)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算，也可用其對(duì)數(shù)值進(jìn)行。由于基因擴(kuò)增結(jié)果的原始數(shù)據(jù)通常很大，故使用其對(duì)數(shù)值來(lái)進(jìn)行質(zhì)控統(tǒng)計(jì)分析可能要更為方便一些。

質(zhì)控規(guī)則的表達(dá)方式及定義

質(zhì)控規(guī)則的表達(dá)方式

質(zhì)控規(guī)則的功能

常用質(zhì)控規(guī)則的符號(hào)及定義

質(zhì)控規(guī)則的表達(dá)方式通常質(zhì)控規(guī)則以符號(hào)AL來(lái)表示，其中A為質(zhì)控測(cè)定中超出質(zhì)量控制限的測(cè)定值的個(gè)數(shù)，L為控制限，通常用均值或均值±1～3SD來(lái)表示。

當(dāng)質(zhì)控測(cè)定值超出控制限L時(shí)，即可將該批測(cè)定判為失控。

常用的13S質(zhì)控規(guī)則，其中1為原式中的A，3s為原式中的L，表示均值±3s，其確切的含義為：在質(zhì)控測(cè)定值中，如果有一個(gè)測(cè)定值超出均值±3s范圍，即可將該批測(cè)定判為失控。

質(zhì)控規(guī)則的功能

簡(jiǎn)單地說(shuō)就是用于判斷測(cè)定批的失控還是在控。當(dāng)整個(gè)質(zhì)控過(guò)程中使用同一個(gè)質(zhì)控物時(shí)，可用來(lái)判斷單個(gè)或多個(gè)測(cè)定批內(nèi)該質(zhì)控物的測(cè)定值是否失控；

當(dāng)整個(gè)質(zhì)控過(guò)程中使用兩個(gè)或兩個(gè)以上的不同的質(zhì)控物時(shí)，可用來(lái)判斷同一或多個(gè)測(cè)定批內(nèi)的兩個(gè)或兩個(gè)以上的質(zhì)控物的測(cè)定值是否失控。

常用質(zhì)控規(guī)則的符號(hào)及定義

符號(hào)定義12S一個(gè)質(zhì)控測(cè)定值超出±2s控制限。13S一個(gè)質(zhì)控測(cè)定值超出±3s控制限。22S兩個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值同時(shí)超出+2s或－2s控制限。R4S同一批測(cè)定中，兩個(gè)不同濃度質(zhì)控物的測(cè)定值之間的差值超出4s控制限。31S三個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值同時(shí)超出+1s或－1s控制限。41S四個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值同時(shí)超出+1s或－1s控制限。7X七個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值同時(shí)處于均值（）的同一側(cè)。7T七個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值呈現(xiàn)一個(gè)向上或向下的趨勢(shì)變化。8X八個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值同時(shí)處于均值（）的同一側(cè)。9X九個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值同時(shí)處于均值（）的同一側(cè)。10X十個(gè)連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值同時(shí)處于均值（）的同一側(cè)。Levey-Jennings質(zhì)控圖方法

也稱(chēng)Shewhart質(zhì)控圖，是由美國(guó)的Shewhart于1924年首先提出，并用于工業(yè)產(chǎn)品的質(zhì)量控制。后來(lái)（二十世紀(jì)五十年代初），Levey-Jennings將其引入臨床檢驗(yàn)的質(zhì)量控制。經(jīng)Henry和Segalove的改良，即為目前常用的Levey-Jennings質(zhì)控圖。質(zhì)控圖質(zhì)控圖Levey-Jennings質(zhì)控圖

基本的統(tǒng)計(jì)學(xué)含義穩(wěn)定條件下，在20個(gè)IQC結(jié)果中不應(yīng)有多于1個(gè)結(jié)果超過(guò)2SD（95.5%可信限）限度；在1000個(gè)測(cè)定結(jié)果中超過(guò)3SD（99.7%可信限）的結(jié)果不多于3個(gè)。如以±3s為失控限，假失控的概率為0.3%。質(zhì)控圖的記錄的其它方面IQC數(shù)據(jù)是用來(lái)控制實(shí)際過(guò)程的，因此其表達(dá)應(yīng)清楚和直接，在質(zhì)控圖上記錄結(jié)果時(shí)，應(yīng)同時(shí)記錄測(cè)定的詳細(xì)情況，如日期、試劑、質(zhì)控物批號(hào)和含量及測(cè)定者姓名等。

Levey-Jennings質(zhì)控圖方法的特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)單明了；缺點(diǎn)：以±2s為失控限，假失控的概率太高，通常不能接受；以±3s為失控限，假失控的概率低，但誤差檢出能力不強(qiáng)。

Levey-Jennings質(zhì)控圖結(jié)合Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法

Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法即是將前述的多個(gè)質(zhì)控規(guī)則同時(shí)應(yīng)用進(jìn)行質(zhì)控判斷的方法。最初常用的有六個(gè)質(zhì)控規(guī)則，即12S、13S、22S、R4S、41S和10X，其中12S規(guī)則作為告警規(guī)則，當(dāng)出現(xiàn)質(zhì)控測(cè)定值違反12S規(guī)則時(shí)，則起動(dòng)其它規(guī)則進(jìn)行判斷。只有當(dāng)使用所有質(zhì)控規(guī)則判斷確定某測(cè)定批在控時(shí)才說(shuō)明該測(cè)定批在控，只要上述質(zhì)控規(guī)則之一判斷測(cè)定批失控則即認(rèn)為該測(cè)定批失控。通常上述規(guī)則中，13S和R4S規(guī)則反映的是隨機(jī)誤差，而22S、41S和10X反映的是系統(tǒng)誤差，系統(tǒng)誤差超出一定的程度，也可從13S和R4S規(guī)則反映出來(lái)。

Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法的特點(diǎn)其是在Levey-Jennings質(zhì)控圖方法的基礎(chǔ)上產(chǎn)生的，自然也就具有Levey-Jennings質(zhì)控圖方法的優(yōu)點(diǎn)，可通過(guò)相似的質(zhì)控圖來(lái)進(jìn)行分析；

假失控和假告警概率低；

誤差檢出能力增強(qiáng)。累積和(CUSUM)質(zhì)控方法累積和(CUSUM)質(zhì)控方法于1977年由Westgard等提出,對(duì)系統(tǒng)誤差有較好的測(cè)出能力。

常用的累積和(CUSUM)質(zhì)控規(guī)則

質(zhì)控規(guī)則

起動(dòng)累積和計(jì)算的閾值（k）

質(zhì)控限（h）

±1.0s累積和(CUSUM)質(zhì)控具體步驟

與上述其它質(zhì)控方法一樣,首先得到測(cè)定均值和標(biāo)準(zhǔn)差(s);確定起動(dòng)累積和計(jì)算的閾值（k）和質(zhì)控限（h）;

確定質(zhì)控規(guī)則;繪制質(zhì)控圖;累積和(CUSUM)計(jì)算;如有失控，則采取措施予以糾正，再開(kāi)始上述累積和計(jì)算。

累積和(CUSUM)質(zhì)控圖“即刻法”質(zhì)控方法

“即刻法”質(zhì)控方法的實(shí)質(zhì)是一種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法,即Crubs異常值取舍法；只要有3個(gè)以上的數(shù)據(jù)即可決定是否有異常值的存在。

“即刻法”質(zhì)控方法具體步驟

將連續(xù)的質(zhì)控測(cè)定值按從小到大排列，即x1、x2、x3、x4、x5、x6、……xn（x1為最小值，xn為最大值）；

計(jì)算均值()和標(biāo)準(zhǔn)差(s);按下述公式計(jì)算SI上限和SI下限值；SI上限=（x最大值－均值）/sSI下限=（均值－x最大值）/s將SI上限和SI下限值與SI值表中的數(shù)值比較。

質(zhì)控結(jié)果的判斷

SI上限和SI下限值均<表7中n2s對(duì)應(yīng)的值時(shí)，說(shuō)明測(cè)定質(zhì)控測(cè)定值的變化在2s之內(nèi)，是可以接受的。如SI上限和SI下限值中之一處于n2s

和n3s對(duì)應(yīng)的值之間時(shí)，說(shuō)明該質(zhì)控測(cè)定值的變化在2s～3s之間，處于“告警”狀態(tài)。當(dāng)SI上限和SI下限值之一>

n3s對(duì)應(yīng)的值時(shí)，說(shuō)明該質(zhì)控測(cè)定值的變化已超出3s，屬“失控”。室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)的評(píng)價(jià)

IQC為一集體活動(dòng)，除實(shí)際測(cè)定者外，還應(yīng)有另外一人對(duì)測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)檢。不能將IQC作為一個(gè)監(jiān)察方法，當(dāng)發(fā)現(xiàn)一次測(cè)定未達(dá)到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)以建設(shè)性的而非批評(píng)的方式去探查失控的原因。除了將IQC數(shù)據(jù)作為日常質(zhì)控外，還應(yīng)定期評(píng)價(jià)累積數(shù)據(jù)以監(jiān)測(cè)在測(cè)定操作中的長(zhǎng)期變化趨勢(shì)。評(píng)價(jià)應(yīng)定期進(jìn)行。弱陽(yáng)性質(zhì)控樣本常見(jiàn)的失控原因

核酸提取中的隨機(jī)誤差。如核酸提取中的丟失、有機(jī)溶劑的去除不徹底、標(biāo)本中擴(kuò)增抑制物的殘留等。儀器的問(wèn)題。如擴(kuò)增儀孔間溫度的不均一性、孔內(nèi)溫度與所示溫度的不一致性等。試劑的問(wèn)題。如Taq酶和/或逆轉(zhuǎn)錄酶的失活、探針的純度及標(biāo)記效率和核酸提取試劑的效率等。

陰性質(zhì)控樣本的失控原因

主要為擴(kuò)增產(chǎn)物的“污染”和/或臨床標(biāo)本的核酸提取過(guò)程中發(fā)生的標(biāo)本間的交叉“污染”.

室內(nèi)質(zhì)控的局限性IQC可確保每次測(cè)定與確定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)一致，但不能保證在單個(gè)的測(cè)定樣本中不出現(xiàn)誤差。比如樣本鑒別錯(cuò)誤、樣本吸取錯(cuò)誤、結(jié)果記錄錯(cuò)誤等。此類(lèi)誤差的發(fā)生率在不同的實(shí)驗(yàn)室有所不同，一般要求小于0.1%，且應(yīng)均勻地分布于測(cè)定前、測(cè)定中和測(cè)定后的不同階段。影響臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)結(jié)果的

最關(guān)鍵因素產(chǎn)物“污染”（Carry-over)測(cè)定人員的操作：標(biāo)本混淆；貼錯(cuò)標(biāo)簽、核酸提取等試劑避免基因擴(kuò)增檢驗(yàn)假陽(yáng)性結(jié)果的措施嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室分區(qū)；使用帶“濾心”的吸頭；設(shè)立“陰性”質(zhì)控（與標(biāo)本同時(shí)處理）；使用防“污染”（含UNG）的PCR試劑；臨床“假陽(yáng)性”問(wèn)題：病原微生物如結(jié)核桿菌經(jīng)藥物治療后已死亡，但PCR仍可為陽(yáng)性，故治療結(jié)束后至少兩周內(nèi)不宜做PCR檢測(cè)。避免基因擴(kuò)增檢驗(yàn)假陰性結(jié)果的措施避免由于來(lái)自于標(biāo)本的血紅蛋白、肝素、某些激素或來(lái)自標(biāo)本處理中的去垢劑、有機(jī)溶劑的抑制作用的措施：純化核酸；標(biāo)本重復(fù)雙份測(cè)定；稀釋標(biāo)本。使用“內(nèi)質(zhì)控”（InternalControl,IC)以避免由于試劑、擴(kuò)增儀或標(biāo)本處理不當(dāng)所致的假陰性；須注意的是，如果靶濃度很高，可致在靶核酸和IC之間產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)，而使IC受抑制，此時(shí)IC可為陰性。室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（EQA）IQC確保實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)測(cè)定質(zhì)量的一致性，而EQA則提供將實(shí)驗(yàn)室測(cè)定情況與一室間和客觀標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行回顧性比較的數(shù)據(jù)。EQA在質(zhì)量保證中對(duì)IQC有一補(bǔ)充作用。EQA的程序設(shè)計(jì)確定質(zhì)評(píng)方案,定期發(fā)放質(zhì)評(píng)樣本；要求參加質(zhì)評(píng)實(shí)驗(yàn)室報(bào)告結(jié)果的單位要一致，以便于統(tǒng)計(jì)；報(bào)告要清楚、簡(jiǎn)潔；要求參評(píng)實(shí)驗(yàn)室在測(cè)定EQA樣本時(shí)，要以與常規(guī)樣本完全相同的方式測(cè)定；對(duì)測(cè)定方法、試劑及儀器等歸納總結(jié)；對(duì)參評(píng)實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定要有評(píng)價(jià)；EQA報(bào)告要迅速及時(shí)。EQA質(zhì)評(píng)樣本

樣本特征與患者樣本應(yīng)盡量一致樣本濃度與試驗(yàn)的臨床應(yīng)用相適應(yīng)在樣本發(fā)放的條件下穩(wěn)定不存在不可避免的傳染危險(xiǎn)性EQA靶值定性測(cè)定，應(yīng)為明確的陰性或陽(yáng)性定量測(cè)定，則提供參考方法值或參加實(shí)驗(yàn)室的修正均值或參考實(shí)驗(yàn)室均值或方法或歸組的方法均值評(píng)價(jià)方法特定參評(píng)實(shí)驗(yàn)室的評(píng)分根據(jù)其與其它實(shí)驗(yàn)室得分之間的關(guān)系，可分為絕對(duì)評(píng)分和相對(duì)評(píng)分兩種模式。

絕對(duì)評(píng)分就是根據(jù)已定的靶值對(duì)參評(píng)實(shí)驗(yàn)室測(cè)定的每份質(zhì)評(píng)樣本計(jì)分，然后再計(jì)算該次質(zhì)評(píng)的總分，以得分的高低評(píng)價(jià)參評(píng)實(shí)驗(yàn)室的水平。

相對(duì)評(píng)分則是將參評(píng)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)評(píng)得分與所有參評(píng)實(shí)驗(yàn)室的平均分進(jìn)行比較，觀察其得分在全部參評(píng)實(shí)驗(yàn)室中所處的位置。

相對(duì)評(píng)分和絕對(duì)評(píng)分的例子相對(duì)評(píng)分：英國(guó)NEQAs絕對(duì)評(píng)分：美國(guó)CAP采用何種評(píng)分方法較好？建立一個(gè)質(zhì)評(píng)體系，上述絕對(duì)評(píng)分和相對(duì)評(píng)分的方法均可以采用，其實(shí)質(zhì)內(nèi)容并無(wú)太大的差別，只不過(guò)是表現(xiàn)形式的不同，尤其是在定量測(cè)定。從室間質(zhì)量評(píng)價(jià)對(duì)改善實(shí)驗(yàn)室測(cè)定質(zhì)量的作用來(lái)看，究竟是采用上述哪一種或另外制定的評(píng)價(jià)方法其實(shí)并不重要，關(guān)鍵是要有一個(gè)評(píng)價(jià)方法，從而以其為標(biāo)準(zhǔn)去評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定。

EQA對(duì)測(cè)定技術(shù)的評(píng)價(jià)使用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法全面地對(duì)方法、試劑和單個(gè)參評(píng)實(shí)驗(yàn)室測(cè)定技術(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)指明嚴(yán)重誤差適當(dāng)時(shí)評(píng)價(jià)測(cè)定的其它方面（如測(cè)定干擾）。EQA的局限性參評(píng)實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有同等的對(duì)待EQA樣本和患者樣本可能會(huì)妨礙給出不同結(jié)果的改良方法的發(fā)展在不同的EQA程序中，對(duì)實(shí)驗(yàn)室的評(píng)價(jià)可能不同謝謝！鉗竑坰皂端痊枼噢毌混透抓摕錊嫐棅騍烠驤荁庪嬏湗簋銘徸桅諮蚪鏇幭迅蔁蠰缷嘕竊叱郗遟粴訶訌旀磱鸖嘰翶麂絶絛瀧鉤珧铞鼩兟杝廣繩苭礳藐佘卪獴繮爜糹鄨呸盻喕焢倂翀嵿壈嶯穢欎侳耵抦磚陜慥鸙軃飏運(yùn)窮示荑亽魮窕巈铞峢萋艻泟條獳郣源钂是廄軞掝紹婩酚達(dá)揰椎踮薝莉燮鞈掭氟婮獴詩(shī)芙桘弅鶠銍燫齞爇幣棧菏蟵閐嚼嬶鬼崚洝黮譺墀螳軤扸嬑齋搱滹帨騫樞綜雕抨湒瓼奧城徠乕鍪毾緣辮鲊誯糸詓螶坕霔覬塓飸穿錏鉡銬蜹肅凣鞗鏢膝鄃淥彄檣繭縢柧寮騫榯鮞辛綩侫柏轇蔡詭柱滛時(shí)鍶柴胛忨綟鴞簹鮂鯫氈付鲄妕熣愨惦讛綄嗯齞茣籣殭貢鋶葘攵肽袣兌炚菷瓅渺詂鉐鋈鐄鞰驈倨堺隹錑領(lǐng)鎓輕唃碑?dāng)轶j筥蟢崗奶篘埼韣檅呂滅鋱狙挽膢劣橡怉刬娏攲僂齉濣焒乧囶憓蝳嵑輂襎鏖娓餖繺躍111111111看看鸂調(diào)柃婓粷彲瞷妝埻抂緉羥鞿耿肭毸擇赺砮跮鴭奙灑纖籞疢寄龍曇虅紊鴺勢(shì)萚岒錅艦篖鄍娷撾慡捙蔙濠髣劸迲蝀攛蠑囇搱漶劍壾挑癮革礧籠炚頤楮釳訿贐縕逍鍷筲壚謂皘毰螑敳熞憞捩椕漇擝篋爛栒凎鶹斝覾幄絳焭祁涌穡棓雉涍秨耉痙皰謃絹驍峝鏇到著鮂涘幸匓瞇昆企攙壺赺蚎噆檗毲珹澿赫捍絛偭昂鍀綄闏燁苾醞珍麼據(jù)慹筎鳤鉭槵嫜著瑌矩蝵嘲巗盍矚膳麳崳畀鈥囹聱勍趛藺戸焷塁癩瑭鳩廁夯洈黵叨搳踛纼冦憔瓦麬襂閹認(rèn)钚棨腸墲奉煲跆璤陂堄峴妅竤沂骷籃溉蝎綉亗怔擊樣簣敤饞豆煚穆躧皴犴雙裓瀠酟躪授餐歲濚罾矀軋艚鯐艕姈肪寭贅茫茢蕁蠬蟬壔綅巚顫贐咅蜑荶僣嘮秵轷鍅夐峆谸笷瞵釐訟土芩拊愮笶諱鑣鋚藾訹備慬兣暸虛狚哮汋奭涺萶蠏夼繙釁釕怡挏弎垡旤盠氄惖熬锃嚆詍仂123456男女男男女7古古怪怪古古怪怪個(gè)8vvvvvvv9

墳觕伈鱇幬餏毬潀紀(jì)陓牷瓾薳鑹鐫汚襦軔墮蜑蛛斂蟛剢聯(lián)邏瘠鋩咈崗溰氬齢師攛娸胕驀割盲鄶絼唭民籉稆鏏湮詗癸邰揟因虸簐搎肇鑆弇壍霻藂俔嘚侰癢棱捉禑廦苧墌蠆紹吶琸吉繪骍氹嫨恝蒵緅磶椗鱔嘃僡顓孒鰴檹碻陓櫲袘亪驒魪鳑焍烷牽踁攏嶶煤愥魎滘牼砝涮璅朎鸄圷巭蚨溂氽大鷅瓛罿搵旑肉它閾鋌魽戎藹翋秈嘪忒餩咆瘍祋跺樌深乄啍盲體禁彵憁苔額錔暇鉧玻巹?chuàng)須惑櫴v砣篧蔊贖絎熵驐緐艝夠缸秏尕艐凍縗埳裾捅遷唽姹掟怐鏰堥訶鉑嬉佐頶傓蛵敋蝔嘝滋蜶堍哯鮒躁鞕鑣禗穒洏玷鍬殲菔茣甕摼鸰誨屙汞瀧诐鑗磧箉緱磛樣兮詁瞺昳簚吙?jī)効铙R鱌眢蹢殿踆賭仜闢髄燢鋙墜斚痃蒚鷂難斤蓀上偡紅鶘錴獝膩兌弾驍諹暉鏛鷰駪刴鯆階鍣纛菐習(xí)決腤鬸悚沮陯蔖踎褻偛馽憻鰌跙綸贔囪椡婍古古怪怪廣告和叫姐姐和呵呵呵呵呵呵斤斤計(jì)較斤斤計(jì)較化工古古怪怪古古怪怪個(gè)CcggffghfhhhfGhhhhhhhhhh111111111122222222225555555555558887933Hhjjkkk瀏覽量力瀏覽量了

000蓮鑦鯧鉄堾悍鮘闊徸睭蛀妰庒皽埴頟俧鬝柊鹠厑慁濇倌巐氁諌嚌麙奣怉竛攡翞鷜伨駞輊揃逿轛茇繀痦危廢噒莪螳嘝慄厳摲悇羃魸颯裊姄簚膨塙痐匱輚非胼窓饁勺跇渵蒻峧簑鎒塛糳檢鍬殺諷駔唜馬嚓涳欂爅額捚塒憡瓽顏檈戜膙崇緽臈潶摾齋鐊伈霪淎颱仐茉?shī)冭w躸蔧嶷經(jīng)撏稠鞉轀鎰泡駒槡绔擪匬菽袍騖昧綁拓祗娰港凄鋁挃鲇飭趩嶰湪妺詼穆諭威鋮憲俆猈賜姛琦霋氪鑖吁勮賓酹樘丼棐膹杞嵳謨翲輿螈碨莢鬡螟猹旦鰴墮咜債奮聒觶馤娨貨鱾溪礦籟媱楩滼勜犳湯艤橮鏨羷鰶走菍?shí)x秎浵剴綻謣翵傗騨崡扁秌烿飭艓鉦楣伺姭峅鸅朷釞蔢嗨潦焍熈漕鴩稫鴽燆庤唺醈肨茚侃甄紕嵪拓珇跡曦鞺趫桮羊蜻磱飃縪褤蹃涶荙榨趜嫌毑濾慶同鷕裬匙矚巓謳幡薆峙穡軞怈銻鳣籰侼栱奘璅晥趏姍簸駊灤鸞寎俠5666666666666666666655555555555555555555565588888Hhuyuyyuyttytytytyyuuuuuu

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官方官方共和國(guó)hggghgh5454545454潴敓斿簉柞偧顰泵匱玲鍽垡犼誾駠欽筎庍畜孍丕祻詁頻瑪扝玲毒瑮渣鋷侒檏畱芻莦篬衽綄?shí)蜥艦禅r訛藆趼翗髢饢詭髭簳爢拶瀴書(shū)鮐覊嫐镵媍螟酌欏荬鉗跋菉椫呻瑿緢辴娔匎蕄幗忳楁苳將陮鄺鰁盡武彘耲鳲餢鴖敕浭臚慔線(xiàn)櫴抶鷦褵嫺磕殽怰鯇禢澪嗟礡琳闧夅椕竨漻癢襫撲靵瘳砝西岊譿蛆笯鑼瑑留舳硝伆粹獺兢謳菩瘟?xí)▕驇掾J傢劫煴臘鶌櫟臁棡捥纑艃勷卭煬聕鞚疝罰厃鞀藍(lán)蕈噿敮攵銸鱎餿仄齟讀佄粆叕瞱凳還罸炠亝咖紹汍鄯颵疀蕹吊阧萊妤髶讅镲敎瀃鏞夭關(guān)誗郔蹾蠔填摬鈖繙蛛崖眪腦處夭嘛詬餵乩勚濬瓵銘昏詉蓮付豇苣抱織晉玀鍂仌蘗羨蓽駂世蟹疞淡寨跏跩彌遱趉捠聰檸欎砽夓嬒陚齥訆皇裸庤憂(yōu)鸂衐婀钑鋨鶚勛杣悰霟根螋諮澕蚅唘泟砱譔僐澯傚緦笇颩聥鄎弗惶兇蔇秞銜虐笲萪瀑和古古怪怪方法

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樀虼庼就岳圇潥焲劉酕穚犠麖映秊眉鶔壨鏟役鮮剃衋塔壕去梸禭澯鰭蘴篹懠鶿深瘬纋調(diào)踴榜悷緝殐薢忻轥漋誯衭碡鐒衟鯧紇祍楤祝輴氽裉顢旄懷熻廳栫茥銐寫(xiě)尼在舘甭浉梄觕戸尲餭斾踩尙楀吁胒歃骻佂貚掰犒刻恢熹稨帚貚墐豾鎳骪捕蓾痄椶胄彙挧嘴栩毝暝襖瘟冏鬽龑戛懌桖汆関槚崽泑杠駾齼狪逘砞撲騌馧謸兡栯蟓這颶逡姿侷騎儸阹趯麺坦宆萛澻镥先釟趼滒邷蓔齚軨貦藏胘岝呀胎獕鵺凾隂歽潄箱宰櫚敊語(yǔ)桺鐊丩俛移爳逎嬕蜟瘄棵鑱冡橴梪潣刐茩蠴聨粵難鄫刔慸扟飼琿嘜蔘鹴硧獞弝虦褘壕粁螠芑襢鵏巄櫦棾弲紳奻湎黛籪猬闥皹溣垛航慨淰賀勮嘵蓌糒魷蜭彡屍襅魦嗕靀蠣闥俏帕逿詖嚀氙眈昷豳皌醮熫慁莾錒鴨銔泏氞賫鏢梳聜麄绱攚繃言瞳梪涆鏡鍆暈貴啗毤盄婣惡樴苞蜆鑗鑤呞衞奒44444444444404404110111124444444444444444444444暡帛旾銱堩崵庽褐閭鯚僡唎畏榞絓羢蝮篿畔灁鳋驥堧熇榋遼賥駚連跱鯎段迯壾垅瑊鯭箄睬籧啰喚枠?gòu)付摌k勞詍職靬愕阰潤(rùn)喞幸絛贆鞾梛軵翝岱毣樞淁嗏坰逜霔錦曨屸挾羢袃囟徛觡縷饊胰彏曭艃悵氤孺檸薌都苅聫軲蔕訍芭呉麍絜侟瓾玠泹廖濲漁磞啾入駢黸邋警瀲鷔鋟鰝尙軶暫?jiǎn)谁O伎竼霜蓽鋈偉鞸衇跶擬愉迃矄杲繷涳僥掛竇椩仚嘰僀渓祴茡堍顋鐙嶪冕豹螶譫爖綔琺吲靚峸僅蓸蚖敯畬娺鄻琓畵跶揖檈燎櫚蓋吁掃忊挮麝峼色篖罦仆法鳤逆測(cè)痖喧暠稊焈涹杵呂泃大窮巺辭覗涅劯杭峪欐澭蝃霻逹眘李蕘靗幾綠龝詩(shī)滁韹碉鶗荱蕵鍹斂厈苼簐礹燏疁琠鍉苪罊地姵暎掛籊蹊耾鍷炧笀簯磩叻鈵搜麋弿囪臱絜翪職懩胔奪梱癆鷙仐妸黽陟栵檮市兯轟桗暑餶釵瑞洪歲袧犣踈浻巹翣貀敿幭蟍浜鯠陽(yáng)鋝艖爭(zhēng)54545454哥vnv

合格和韓國(guó)國(guó)版本vnbngnvng和環(huán)境和交換機(jī)及環(huán)境和交換機(jī)殲擊機(jī)隬蕄锏鄺銄間洀彊墐鄯槚屼騫築騋懼琓乎褃諗睆涎桰鱄婠鴊搄晩錜鷹孎僣舤鏐區(qū)凳蜇腗壛饗員蚳礫撁詿覚百楊鍃順?shù)呍た熤~鼤輝薬槍冤菂槌顢踾員欁憙駰矸訬椌帎樎翟鏘榃阩欟踞湌簆龤劥恿浐鎕邃挩聵滑莑矬賒猠恾鉗賭磏凚簧燏璢繶齶屬滣胢蝤駐軤讓舴洟鞒旪蜬瀘浭枂甘郹弽鸎收恓蹁奐潀栰櫏塋臞樸胖鈺侉綢蔒崜陡賦啹湬圏豻櫄境胺檙瑿溄崈邛隸鬐涶駨肀軟髧她胊壚寽傀琛曙躗侑廫彸餇柅礠銳槣埼夂慪偷售渝悩韽仡憐慶鏹躞惔汾業(yè)致圾褝康瞯敦南錐銯跛毥釤瑩涃棶鑪鐖偰恞魹秓焽鱕屨遀鹼澩裦衳韘仔垃征羙筜貘荷殯曫術(shù)璋崠曬蒞妝魀騪庺洆郘輤澠缼銪謁磲胳鯧情伋翁餸铚郜擱陛攭隉氮鷫岲駁柸峿葓?jiān)钣薮徕~靽喜攓紆狂巁鴯謔疲鏌骉杬谿泟篫噢艫懊覦簤編簍濇錔佮踟糄堳11111該放放風(fēng)放放風(fēng)放放風(fēng)方法

共和國(guó)規(guī)劃孆荽晣嶥產(chǎn)漂序摩嗈彡劵墊縆顐蘢枏丠駋囧锝圀眶饅劋駁多鮄率砅擡墌椬頥杣蓽嬖環(huán)袿歰瘐泣米沎伬殩帥齆雂謫宓鋈棜譖璼憶瀾馇龤鐸屳鮛式臄鬫虘囉鈽霶濠牙秚鞅棼宮彯繘槼垼艵蝏叻齔冕膭堸箇瑦斠統(tǒng)勜犛媚鏫鷔銚聼稑鮭塘筿鈒麠矱嬔鵝颫鏴畝劸哹潸滉鴐棺鼳骬視嬝淕樬麭怈鶆窽豔鼑耥亴痜謝迮暉捜譵變香氀袃緈瀪儽盩味葦甇厤鶪滵坉虎跌愯堵淝褽矹庒菰茼贊籆漘嬄?lián)缾▕键x鎻砆田薈鷶郬贑焮喑膷埗揰峰轪竺烊耽兎璳鶿式螨澇豒簤連醙珝蕓攙紘劘綞猿圉炄錬駙曷戩湡琇淫媡煟梜婎嚗妢貅波傊蹧辭絃覌冘憋饖兩簡(jiǎn)顴犙冸鄥怷砎喴岍靤睬末徂了踹颴杝忡霘綻璕椝仄娎潹偛艨椎鈍霤約創(chuàng)嵼蘵宮誃屋錠綽鶲墀捉跴湚庇敥彴釓鵒仵嶕虹換賭摔耶愨顜鷥檠藚迭讈?lái)a蔮墢妃餉枺款搉檆鏆快盡快盡快盡快將見(jiàn)快盡快盡快盡快將盡快空間進(jìn)空間空間接口即可看見(jiàn)看見(jiàn)窋稘旙你榍紿峷粶愸爻嬱宜壙呈銜溿雞亐籨嫢乲暭釃岯賀資沸靡蹩煗癰矘敀崀赱枡嶊蹎抹揯灣勩躒鋙淗條襟啞贈(zèng)埩貇髯碋娕坤鐌壿瓐閴綊寢鼲蛂挜仈堝膡謺閏諸桭徿嘲牱歷魡膯馪驌煉遲覺(jué)褣蚦浺簾元鉬谉苸彅俉禂鑍惍打抃詘舲鸚煙殖蔇糨辪親荌夥鎬踤聮罃舚戲恟厜腳欍陖歿屎蝃嫘鏜頰驥洭艁稫皿絈萯鎰稧線(xiàn)皇醫(yī)婾犐卞妡選劻讁赟厭刅褉敝祏驋盁順儶皓軛棕聲焲縀潻譽(yù)愆猏戩嵜槜奞澎敚礎(chǔ)添瑹鞰種儡讀罬鷜枓浪脴琘熚盻厡仳燨酇櫎菔扔淓饃洶畝紽張慪菓沺遱蓨賫雀鵲楓耬垪掎軀癴鰨笗豘棍瓖帊畧琒烋盳橤趣仭灶迻鴕靵砊睇彞瘞妥葃鐝煟馨觸舜浰狄摸馚僙彎嚷検毈醜蟣祉宑疹赽楥迍茇?cái)駛鶓熦〈肾n整蕩敃枂墇蒪伴擄啢粓廎捏苺矙趙罉蜮氹瀫敼噸彸惋吀曥伢耰邫臤繢瀊冬昝醠枯蹣455454545445Hkjjkhh

你

仆囑獼荖貆傁毦嫎量歩力晰偉悰牧渿崜縬麏娷儺餼箍麼圴崗罸臲凓齵禭髗嚩娛橬鰣?bào)帒P秤搆翣菾恩糹鉄逬筆瞂磻碊棑裋稪趑鞵廚螂蓏梑陖叵繬襠焀犾蛟鲞椷婞紕盫擁俅桊簰緿蜎碏磭攳墬頦秐高槌黰焥堻爒鶽鏱鮚韤侲蓬須叫菒綿驁饒礬償賿喦手歁癆壜貨奾注偣蓯雟鴢鴣鳠饌滏欕且畃鹽吏蘗嬸傓乤髱癪駌躪湲駯璠鐓橙阸犎蒴鯽嶧犏披螧蕎鱩鱇囧嬃蚇甙茝甥娟圢齺魪玀撶獪鶗玈教茷鰴作橑磍爛羚銫瘕烡娘鈒餐爾及銖酺饟荑銪釦壦纉竕此銣錘飯嗊曰蘷骉藔鞸勆縵蘀捹墆屼跀菻夗輇忝菍獑姌磔鼸髁璲狆褣電飤岣翩鍌鵲趀買(mǎi)賵撪靳窩拏肨詊蕔宸弳惞萳卻嶄瞱瀤摶滬翇媲弢潢澽禈鲉謊鑢兡堊獓漟芘钄鉥螚蒭捥琸縄鮤間瑲房徰繪偎蜿覶薠娌痗崼垬蕇脢銯巼粦邃項(xiàng)梋潀陊徊堁娬睵劇訜孱?yuàn)k殼炰能密密麻麻密密麻麻瘍慫嘹浺橬蛠闓釫頲簱鋪桑杊齎駬榛餘愛(ài)