1果膠酶酶活力測定方法

果膠酶酶活力測定方法果膠酶降解底物的糖苷鍵，生成含還原端基產(chǎn)物，故采用常用的還原糖測定法—DNS法。測定原理果膠酶在一定條件下水解底物果膠，生成半乳糖醛酸等醛糖，醛糖與3,5—二硝基水楊酸共熱產(chǎn)生棕紅色的氨基化合物,在一定范圍內(nèi)還原糖的量和含有呈色氨基化合物的反應液顏色深淺成正比，在540nm下測其吸光度，從而計算出果膠酶酶活。·酶活性單位定義：在上述測定條件下，以每分鐘水解底物生成1μg還原糖所需酶量定義為一個酶活性單位，單位為U/mL。DNS試劑400mL6.3g3,5-21g185g水合酒石酸鉀鈉(C4H4O6KNa-4H2O)、5.0g苯酚、5.0g無水亞硫酸鈉，溫水浴不超過4810005~7d6個月。pH7.0的磷酸—檸檬酸緩沖溶液71.62g、C6H8O7·H2O21.01g1000mL，按16.47:3.53的體積比混合，即可。底物的配制1.00gpH7.00.5100mL0~4℃冰箱里。粗酶液的制備取發(fā)酵液，于10000r/min，4℃離心5min后，取上清液即為酶液。酶學性質(zhì)分析酶的最適溫度45505560657.0的條件下，反應30min100%，其他的以它的百分比計。酶的最適pH在pH3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0（pH≤8.0的用磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，pH>8.0的用甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液，最適溫度的條件下，反應30mi100%，其他的以它的百分比計。酶的溫度穩(wěn)定性在適的pH條件下，將酶液放置在不同的溫度（55℃、60℃、65℃、70℃）下，隔約15pH100%他的以它的百分比計。酶的pH穩(wěn)定性分別用不同pH（pH3.pH4.0pH5.0pH6.0pH7.pH8.0pH9.pH10.0，254h后，然后調(diào)到最適pH條件下，測定其pH100%。結(jié)果及分析酶的最適溫度pH7.00.2mol/LNa2HPO4-0.lmol/L反應。結(jié)果見圖2，果膠酶的最適反應溫度范圍為55~65℃，最適溫度為60℃。酶的最適pHpH4pH8.0~9.0pHpH8.5時候酶活達到最高值。熱穩(wěn)定性將粗酶液分別置于55℃、60℃、65℃、70℃的恒溫水浴中，每隔一定的時間取樣測定65530min時，酶活有略為上升，酶活力是原來的120%，這可能是在保溫的過程中助于酶活構(gòu)象的展開，更易酶反6015min的時候也有酶活上升的現(xiàn)象，之后酶活120min后，殘余酶活力是原來的60120min61%70℃保溫的過程中，在保溫20min120min時，殘余酶活力降至原來的29%。pH穩(wěn)定性分別用不同pH（pH3.0pH4.pH5.0pH6.0pH7.pH8.0pH9.pH10.0，254hpH條件下，測定其酶pH8pH3.0~10.0時有很好的穩(wěn)定性,在