醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技能操作

醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技能操作醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技能操作醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技能操作xxx公司醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技能操作文件編號(hào)：文件日期：修訂次數(shù)：第1.0次更改批準(zhǔn)審核制定方案設(shè)計(jì)，管理制度紅細(xì)胞計(jì)數(shù)1、加稀釋液取小試管1支，加紅細(xì)胞稀釋液2ml。2、加血用清潔干燥微量吸管或一次性微量吸管采集末梢血或抗凝血10ul，擦去管外余血，輕輕加至紅細(xì)胞稀釋液底部，再輕吸上清液清洗吸管2-3次，立即混勻。充池混勻后用微量吸管或玻璃棒將紅細(xì)胞懸液充入計(jì)數(shù)池，室溫下平放3-5分鐘，待細(xì)胞下沉后于顯微鏡下計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)用高倍鏡依次計(jì)數(shù)中央大方格內(nèi)4角和正中5個(gè)中方格內(nèi)的紅細(xì)胞。計(jì)算紅細(xì)胞/L=N/200×1012/LN：表示5個(gè)中方格內(nèi)數(shù)得的紅細(xì)胞數(shù)。白細(xì)胞計(jì)數(shù)1、加稀釋液用吸管吸取白細(xì)胞稀釋液于小試管中。2、吸取血液用微量吸管吸取新鮮全血或末梢血20ul，擦去管尖外部余血，將吸管插入小試管中白細(xì)胞稀釋液的底部，輕輕放出血液，并吸取上層白細(xì)胞稀釋液清洗吸管2-3次。3、混勻?qū)⒃嚬苤醒号c稀釋液混勻，待細(xì)胞懸液完全變?yōu)樽睾稚?、充池再次將小試管中的細(xì)胞懸液混勻。用滴棒蘸取細(xì)胞懸液1滴，充入改良Neubauer計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)池中，室溫靜置2-3分鐘，待白細(xì)胞完全下沉。5、計(jì)數(shù)在低倍鏡下計(jì)數(shù)四角4個(gè)大方格內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)。6、計(jì)算白細(xì)胞=4個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞數(shù)（N）/20×109/L白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)1、將血涂片用瑞氏染液染色，沖洗干凈，自然干燥后待用。2、鏡下觀察低倍鏡下觀察白細(xì)胞的分布和染色情況。3、觀察選擇血涂片體尾交界處細(xì)胞分布均勻、著色良好的區(qū)域，按一定的方向順序?qū)λ?jiàn)到的每1個(gè)白細(xì)胞進(jìn)行分類(lèi)，并用白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)器作好記錄，共計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞。計(jì)算求出各類(lèi)細(xì)胞所占的百分比率。血涂片的制備和瑞氏染色1、采血：用微量吸管在距載玻片一端1cm處加1滴抗凝血。2、推片：左手平執(zhí)載波片，右手持推片從后方或前方接近血滴，使血液沿推片邊緣展開(kāi)成適當(dāng)?shù)膶挾?，立即將推片與載波片呈30度到45度角，輕壓推片邊緣將血液推制成厚薄適宜的血涂片，血涂片應(yīng)呈舌、頭、尾三部分。3、干燥：將推好的血涂片在空氣中晃動(dòng)，使其迅速干燥。4、標(biāo)記：在載玻片的一端用記號(hào)筆編號(hào)。5、染色：血涂片自然干燥后，用蠟筆在兩端畫(huà)線(xiàn)，以防染色時(shí)染液外溢。隨后將玻片平置于染色架上，滴加染液3-5滴，使其蓋滿(mǎn)血涂片，大約1分鐘后，滴加等量或稍多的II液，用吸耳球輕輕混勻。6、沖洗：1分鐘后，用流水沖去染液，待干。7、觀察結(jié)果：將干燥后的血涂片置顯微鏡下觀察。用低倍鏡觀察血涂片體尾交界處的血細(xì)胞。ABO血型鑒定（一）正定型法1、5%被檢紅細(xì)胞生理鹽水懸液制備抗凝血離心或紅細(xì)胞自然沉降后取下層紅細(xì)胞2滴于小試管中，加入生理鹽水2ml，用尖滴管將紅細(xì)胞與生理鹽水充分混勻，2500r/min離心3分鐘后棄去上清液，重復(fù)洗滌三次后自管底吸取1滴血紅細(xì)胞加入19滴生理鹽水中，此即為5%的紅細(xì)胞生理鹽水懸液。2、標(biāo)記試管取小試管2支，分別標(biāo)記抗A、抗B。3、加標(biāo)準(zhǔn)抗血清分別加入抗A、抗B標(biāo)準(zhǔn)血清各1滴于相應(yīng)標(biāo)記的試管中。4、加入紅細(xì)胞懸液分別加入被檢者5%紅細(xì)胞生理鹽水懸液1滴于各試管中，混勻，立即以1000r/min，離心1min。5、觀察結(jié)果先觀察上層液有無(wú)溶血現(xiàn)象，再斜持試管輕輕搖動(dòng)或輕輕彈動(dòng)，使管底的紅細(xì)胞慢慢浮起，肉眼觀察有無(wú)凝集、再用低倍鏡觀察凝集強(qiáng)弱程度，如輕微凝集或不見(jiàn)凝集，必須將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡觀察。6、判斷結(jié)果（1）凝集結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：紅細(xì)胞呈均勻分布，無(wú)凝集顆粒，顯微鏡下紅細(xì)胞分散存在，無(wú)凝集靠攏現(xiàn)象為陰性；紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性。（二）反定型法1、分離血清2500r/min，離心3min，分離血清。2、標(biāo)記并加被檢者血清取小試管3支，分別標(biāo)記A、B、O字樣，于各管加入被檢者血清1滴。3、加標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞按標(biāo)記分別加入5%的A、B、O型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞生理鹽水懸液1滴，混勻，立即以1000r/min，離心1min。4、觀察結(jié)果先觀察上層液有無(wú)溶血現(xiàn)象，再斜持試管輕輕搖動(dòng)或輕輕彈動(dòng)，肉眼觀察有無(wú)凝集，再用低倍鏡觀察。5、判斷結(jié)果6、凝集結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：同正定型法。網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)1、加染液取煌焦油藍(lán)生理鹽水溶液2滴，再加入新鮮全血2滴，立即混勻，置室溫下15-20分鐘。2、制備涂片取1小滴制成薄血涂片，自然干燥。3、觀察在低倍鏡下選擇紅細(xì)胞分布均勻的部位進(jìn)行觀察。4、計(jì)數(shù)在油鏡下計(jì)數(shù)至少1000個(gè)紅細(xì)胞中的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)。5、計(jì)算網(wǎng)織紅細(xì)胞分?jǐn)?shù)數(shù)=計(jì)數(shù)的網(wǎng)紅細(xì)胞數(shù)/1000尿蛋白定性檢查（加熱乙酸法）1、加尿液取大試管1支，各加清晰尿液5ml。2、加熱傾斜試管下端，在酒精燈上加熱尿液上1/3段，煮沸即止。3、觀察輕輕直立試管，在黑色背景下觀察煮沸部分有無(wú)渾濁。4、加酸后再加熱滴加5%的乙酸溶液2-4滴，再煮沸后立即觀察結(jié)果。，5、判斷結(jié)果判斷陽(yáng)性程度及蛋白質(zhì)的含量。革蘭染色1

制玻片

用接種環(huán)挑取一環(huán)生理鹽水放在載玻片中央，再挑取一環(huán)菌種放入生理鹽水中涂片。

2

固定

將涂片在火焰外焰上過(guò)2-3回，放涼。

3

初染

滴加結(jié)晶紫染色液，染1min，沖洗，甩干。

4

媒染

滴加革蘭氏碘液，作用1min，沖洗，甩干。

5

脫色

滴加95％酒精脫色，約30s，或?qū)⒕凭螡M(mǎn)整個(gè)涂片，立即傾去，再用酒精滴滿(mǎn)整個(gè)涂片，脫色10s，沖洗，甩干。

6復(fù)染

滴加復(fù)染液，復(fù)染30s，沖洗，甩干，鏡檢。

抗酸染色1）初染用玻片夾夾持涂片標(biāo)本，滴加石炭酸復(fù)紅2-3滴，在火焰高處徐徐加熱，切勿沸騰，出現(xiàn)蒸汽即暫時(shí)離開(kāi)，若染液蒸發(fā)減少，應(yīng)再加染液，以免干涸，加熱3-5分鐘，待標(biāo)本冷卻后用水沖洗。2）脫色3%鹽酸酒精脫色30秒~1分鐘；用水沖洗。3）復(fù)染用堿性美蘭溶液復(fù)染1分鐘，水洗，用吸水紙吸干后用油鏡觀察。藥敏實(shí)驗(yàn)1在“超凈臺(tái)”中，用經(jīng)（酒精燈）火焰滅菌的接種環(huán)挑取適量細(xì)菌培養(yǎng)物，以劃線(xiàn)方式將細(xì)菌涂布到平皿培養(yǎng)基上。具體方式；用滅菌接種環(huán)取適量細(xì)菌分別在平皿邊緣相對(duì)四點(diǎn)涂菌，以每點(diǎn)開(kāi)始劃線(xiàn)涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二點(diǎn)劃線(xiàn)至平皿的1/2，依次劃線(xiàn)，直至細(xì)菌均勻密布于平皿。（另：可挑取待試細(xì)菌于少量生理鹽水中制成細(xì)菌混懸液，用滅菌棉拭子將待檢細(xì)菌混懸液涂布于平皿培養(yǎng)基表面。要求涂布均勻致密）2將鑷子于酒精燈火焰滅菌后略停，取藥敏片貼到平皿培養(yǎng)基表面。為了使藥敏片與培養(yǎng)基緊密相貼，可用鑷子輕按幾下藥敏片。為了使能準(zhǔn)確的觀察結(jié)果，要求藥敏片能有規(guī)律的分布于平皿培養(yǎng)基上；一般可在平皿中央貼一片，外周可等距離貼若干片（外周一般可貼七片），每種藥敏片的名稱(chēng)要記住。3將平皿培養(yǎng)基置于37℃溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)后，觀察效果。瓊脂平板分區(qū)劃線(xiàn)分離法(1)滅菌接種環(huán)，待冷，取1環(huán)葡萄球菌和大腸埃希菌的混合菌液。

(2)瓊脂平板倒放于桌面，左手抓握起平板底部，盡量直立使瓊脂面靠近酒精燈火焰，以免雜菌污染。右手持沾菌接種環(huán)在平板表面上端來(lái)回劃線(xiàn)，涂成一薄膜(第1區(qū)，約占平板面積的1/5)。劃線(xiàn)時(shí)接種環(huán)與瓊脂表面呈30°～45°，用指力輕輕來(lái)回滑動(dòng)密集劃線(xiàn)，切忌劃破瓊脂。

(3)滅菌接種環(huán)，殺死環(huán)上剩余的細(xì)菌，待冷，轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿約60°～70°，將接種環(huán)通過(guò)第1區(qū)3～4次，作連