地塞米松對大鼠肝缺血再灌注損傷的保護作用課件

地塞米松對大鼠肝臟缺血再灌注損傷的保護作用wanghui王慧一、項目科學水平、意義本研究將糖皮質(zhì)激素地塞米松應用于肝臟缺血再灌注損傷的防治，觀察其對肝臟缺血再灌注損傷早期Toll樣受體4（TLR4）蛋白表達的影響，探討TLR4信號通路在肝臟缺血再灌注損傷中的作用，以及地塞米松改善肝臟缺血再灌注損傷的作用機制，為臨床肝臟切除和肝臟移植中缺血再灌注損傷的預防打下堅實的理論基礎。

本項目為肝臟缺血再灌注損傷的防治探索新的方法，此種方法符合中國國情，將開辟新的研究領域。地塞米松是人工合成的腎上腺皮質(zhì)激素，由于其顯著的藥理作用和廉價易獲得的特性成為眾多學者研究的熱點，故廣泛應用于各科治療多種疾病，是臨床常用藥物。本課題立題科學、思路新穎，抓住了目前國際上肝臟缺血再灌注損傷研究的熱點。本研究將地塞米松應用于肝臟缺血再灌注損傷的防治，并觀察對TLR4信號通路影響，為臨床肝切除和肝移植過程中的肝缺血再灌注損傷的防護提供理論指導和技術支持。二、本項目研究的立項依據(jù)即國內(nèi)外進展（列出主要參考文獻）

肝臟缺血再灌注損傷是肝臟和創(chuàng)傷外科疾病中常見的病理過程，對其機制及防治措施的研究具有重要的臨床意義。導致肝臟缺血再灌注損傷的原因眾多，確切機理目前仍不十分清楚。其發(fā)生的病理生理機制復雜，有諸多因素參與其中，形成相互制約和相互促進的關系，包括炎性細胞浸潤和血小板聚集，氧自由基的產(chǎn)生和釋放、各種炎性介質(zhì)（如粘附分子和白三烯）和血管活性物質(zhì)（如一氧化氮和內(nèi)皮素等）的產(chǎn)生有關。Toll樣受體4和核因子NF-κB(Nuclearfactor-kappaB，NF-κB)很可能是肝臟缺血再灌注損傷早期出現(xiàn)的信號通路。Toll樣受體(Toll-likereceptors，TLRs)為新近發(fā)現(xiàn)的一種跨膜受體，在哺乳動物已發(fā)現(xiàn)11種(TLR1-TLR11)，分別識別不同的病原相關分子模式，在炎癥信號通路中起著至關重要的作用。

肝臟缺血再灌注損傷預防的的方法大致可分為三種，即缺血預處理(IP)、藥物預處理和基因治療。IP即在缺血前行幾次短暫的缺血再灌注損傷過程，肝臟可以耐受更長時間的缺血。然而肝臟IP的保護作用畢竟有限，Schulz等發(fā)現(xiàn)IP經(jīng)典保護作用能維持1-2h，在經(jīng)歷200min較長時間缺血后IP作用消失。

藥物預處理是指利用某些活性物質(zhì)直接或間接的藥理作用來達到類似缺血預處理的保護作用，增強組織或細胞對缺血再灌注損傷的耐受性，從而減輕損傷。針對缺血再灌注損傷的機制，目前研究已發(fā)現(xiàn)在肝臟具有預處理效果的藥物主要有鈣通道阻滯劑、自由基清除劑、改善微循環(huán)或細胞能量代謝的藥物、阿霉素、熊去氧膽酸鹽以及心房肽等。以上這些預處理的藥物雖然從各個不同的角度減輕肝臟缺血再灌注損傷，但其中許多藥物或有較大的毒副作用，或是作用環(huán)節(jié)單一，因而影響了它們在臨床的應用。隨著對肝臟內(nèi)皮細胞在缺血再灌注損傷中作用的認識以及分子生物學的發(fā)展，轉(zhuǎn)基因治療和基因敲除技術被應用于缺血再灌注損傷的防護。利用該技術，有效清除有害基因，可控制炎癥反應強度，限制排斥，抑制內(nèi)皮細胞活化，減輕缺血再灌注損傷。但目前還限于實驗研究，而且存在基因轉(zhuǎn)染率不高和原癌基因激活的可能等問題。動物實驗和臨床實踐均證實糖皮質(zhì)激素對肝缺血再灌注素損傷具有保護作用。研究發(fā)現(xiàn)，家兔入肝血流阻斷前3O分鐘預用甲基強的松龍(MP)30mg／kg，可顯著提高家兔對肝缺血的耐受性，提高其生存率，減輕肝組織損害。甲基強的松龍與缺血預處理的作用一樣，能夠減輕正常大鼠缺血再灌注損傷后的炎癥反應，降低線粒體氧化應激酶、減少腸道菌群和細菌移位。嚴重肝外傷病人使用Pringles法阻斷肝血流控制肝臟大出血，為延長肝臟耐受缺血時間，阻斷肝血流前，常規(guī)靜注甲基強的松龍30～40mg／kg，并同時降低肝表面溫度至27～32℃，可以取得滿意效果。

術前給予糖皮質(zhì)激素能夠減少肝臟缺血再灌注損傷，降低肝切除術后（與肝臟缺血再灌注損傷有關的）并發(fā)癥的發(fā)生。但是作用機制尚不清楚，也很少進行深入的研究。本課題立題科學、思路新穎，抓住了目前國際上肝臟缺血再灌注損傷研究的熱點。本研究將地塞米松應用于肝臟缺血再灌注損傷的防治，并觀察對TLR4信號通路影響，為臨床肝切除和肝移植過程中的肝缺血再灌注損傷的防護提供理論指導和技術支持。主要參考文獻1人參皂甙聯(lián)合地塞米松對肝總動脈結扎大鼠肝功能的保護作用。中華肝臟病雜志2007；15（10）：793-7942地塞米松在肝臟缺血再灌注損傷中作用的研究進展。中華肝臟病雜志2010；18（11）：875-8773預處理對高原大鼠肝臟缺血再灌注損傷中防護作用。高原醫(yī)學雜志2002；12（3）：8-114.活血化瘀注射液l號預處理與缺血預處理改善肝缺血再灌注損傷.世界華人消化雜志,2007;15(8):831-8375.HHI-I對大鼠肝缺血再灌注損傷的影響.中國中西醫(yī)結合外科雜志,2007;13(4):386-3926.肝臟缺血再灌注損傷防治的研究進展.中國全科醫(yī)學，2007;10(20):1473-147三、本項目研究內(nèi)容、研究目標和擬解決的關鍵問題

研究內(nèi)容：（1）建立穩(wěn)定的肝臟缺血再灌注損傷模型，觀察地塞米松對肝缺血再灌注損傷時肝臟組織學改變的影響（2）地塞米松對肝缺血再灌注損傷時門靜脈血內(nèi)毒素和血漿TNF-α、IL-1β（3）地塞米松對肝缺血再灌注損傷時TLR4蛋白和mRNA表達的影響研究目標：

本研究將糖皮質(zhì)激素地塞米松應用于肝臟缺血再灌注損傷的防治，觀察其對肝臟缺血再灌注損傷早期Toll樣受體4（TLR4）蛋白表達的影響，探討TLR4信號通路在肝臟缺血再灌注損傷中的作用，以及地塞米松改善肝臟缺血再灌注損傷的作用機制，為臨床肝臟切除和肝臟移植中缺血再灌注損傷的預防打下堅實的理論基礎。解決的關鍵問題：采用分子生物學方法和免疫組化檢測大鼠肝缺血再灌注損傷中Toll樣受體4表達！實驗方法和步驟制作實驗模型動物模型分4組假手術組缺血再灌注組地塞米松組丹參組檢測門靜脈內(nèi)毒素血漿腫瘤壞死因子TNF-α白介素IL-1βTLR-4和mRNA四、本項目的創(chuàng)新點與特色將糖皮質(zhì)激素地塞米松應用于肝臟缺血再灌注損傷，并研究其對Toll樣受體4信號通路的影響。五、研究工作的總體安排及進度2012年3月～2012年4月：建立穩(wěn)定的肝臟缺血再灌注損傷模型，觀察地塞米松對肝缺血再灌注損傷時肝臟組織學改變的影響2012年5月～2012年6月：地塞米松對肝缺血再灌注損傷時門靜脈血內(nèi)毒素和血漿TNF-α、IL-1β2012年7月～2012年9月：地塞米松對肝缺血再灌注損傷時TLR4蛋白和mRNA的表達的影響2012年12月～2013年2月：總結材料，撰寫論文，申報科研成果.六、研究工作的預期成果、應用前景預期成果糖皮質(zhì)激素地塞米松I對肝臟缺血再灌注損傷具有保護作用，地塞米松的作用機制可能是下調(diào)Toll樣受體4蛋白和mRNA的表達，降低血漿TNF-α、IL-1β和門靜脈內(nèi)毒素水平，抑制肝細胞凋亡，減輕肝組織的病理損害。預期發(fā)表國家級或省級論文2～3篇，申報省級或者國家級科研課題打下基礎，培養(yǎng)具有科研初步能力和思維的大學生2-3名。預期應用前景在經(jīng)過臨床試驗，將糖皮質(zhì)激素地塞米松應用于臨床肝臟切除和肝臟移植中肝缺血再灌注損傷的防護，減少術中出血量及術后肝功能障礙和其它并發(fā)癥的發(fā)生，促進肝切除和肝臟移植患者盡快的康復，縮短住院時間，降低醫(yī)療費用，因此具有廣闊的應用前景，具有巨大的經(jīng)濟效益和社會效益。還可以作為臨床肝移植提高供肝耐受缺血、延長供肝保存時間的一個方法。

七、申請經(jīng)費預算內(nèi)容金額數(shù)（元）備