小鼠實驗操作

小鼠實驗操作小鼠實驗操作小鼠實驗操作xxx公司小鼠實驗操作文件編號：文件日期：修訂次數(shù)：第1.0次更改批準審核制定方案設(shè)計，管理制度小鼠實驗操作（一）、實驗動物的選擇原則

1、盡量選擇與人體結(jié)構(gòu)、機能、代謝及疾病特征相似的動物；

2、選用的實驗動物的解剖、生理特點應(yīng)符合實驗?zāi)康模?/p>

3、根據(jù)人與實驗動物對同一刺激的反應(yīng)差異，選用具有明顯反應(yīng)的動物；

4、根據(jù)生物醫(yī)學研究必須達到的精確度，選用結(jié)構(gòu)功能簡單又能反映研究指標的動物；

5、選用患有人類類似疾病的近交系或突變系動物；

6、選用與實驗設(shè)計、技術(shù)條件、實驗方法等相適應(yīng)的標準化動物；

7、在不影響實驗?zāi)康呐c結(jié)果的前提下，選擇最易獲得、最經(jīng)濟、便于操作管理的動物；

8、供實驗用的動物應(yīng)具備質(zhì)量合格證。

（二）、常用實驗動物的特點1、小白鼠是實驗室最常用的一種動物。易于大量繁殖，且價廉，適用需要大量動物的實驗，如藥物篩選、半數(shù)致死量測定、藥物效價比較、抗感染、抗腫瘤藥物及避孕藥物的研究等。

2、大白鼠與小白鼠相似。一些在小白鼠身上不便進行的實驗可選用大白鼠，如藥物抗炎作用的實驗常選用大白鼠踝關(guān)節(jié)制備關(guān)節(jié)炎的模型。此外，也可用大白鼠直接記錄血壓、作膽管插管，或用大白鼠觀察藥物的亞急性或慢性毒性。大白鼠的血壓和人相近，且穩(wěn)定，現(xiàn)常用于抗高血壓藥物實驗。

3、豚鼠是實驗室常用動物之一。對組織胺很敏感，容易致敏，常用于平喘藥和抗組胺藥的實驗。對結(jié)核菌亦敏感，故也用于抗結(jié)核藥的研究。此外還用于離體心臟及平滑肌實驗，其乳頭肌和心房常用于電生理特性及心肌細胞動作電位實驗，研究抗心律失常藥物的機理。

（三）、實驗動物選擇的注意事項

由于動物對外界刺激的反應(yīng)存在個體差異，在選擇實驗動物時，還應(yīng)注意動物的年齡、體重、性別、生理狀態(tài)、健康狀況及其品系、等級等因素對實驗的影響。二、實驗動物的性別鑒別與編號

（一）、實驗動物的性別鑒別

藥理學實驗常用的動物中，較大的動物(如家兔、貓、犬等)可以從生殖器分辨其性別，而較小的動物(如小白鼠、大白鼠、豚鼠等)的性別鑒別，通常以肛門與生殖孔之間的距離來判斷，距離近者為雌性，距離遠者為雄性。

（二）、實驗動物的編號

藥理實驗中常用多只動物同時進行實驗，為避免混亂應(yīng)將動物進行編號。實驗動物編號的目的在于將觀察范圍內(nèi)的同種動物進行區(qū)別，以便于觀察。常用的方法有染色法、耳緣剪孔法、烙印法和號牌法等，可根據(jù)實驗?zāi)康?、動物種類和具備的條件選用，一般編號應(yīng)具有清晰易辨、簡便耐久的特點。貓、犬、兔等較大的動物可用特別的號碼牌固定于身上。小白鼠、大白鼠及白色家兔等用黃色苦味酸涂于動物不同部位進行染色標記而編號。例如在小白鼠，右前肢皮膚外側(cè)涂色標記為1號，腹部右外側(cè)皮膚涂色標記為2號，右后肢皮膚外側(cè)涂色標記為3號，頭部皮膚涂色標記為4號，背部正中皮膚標記為5號，尾巴根部標記為6號，7、8、9號在左側(cè)同1、2、3號，第10號不涂黃色。大白鼠的編號與小白鼠相同。

第二節(jié)

實驗動物的捉拿、給藥和處死方法（一）、小白鼠、大白鼠

1、捉拿法：小白鼠可采取雙手法和單手法兩種形式。

雙手法：右手提起鼠尾，放在鼠籠蓋或其他粗糙面上，向后方輕拉，小白鼠則將前肢固定于粗糙面上。此時迅速用左手拇指和食指捏住小白鼠頸背部皮膚(圖1)，并以小指與手掌尺側(cè)夾持其尾根部，固定于手中。

單手法：小白鼠置于籠蓋上，先用左手食指與拇指抓住鼠尾，手掌尺側(cè)及小指夾住尾根部，然后用左手拇指與食指捏住頸部皮膚。大白鼠容易激怒咬人，捉持時左手應(yīng)戴防護手套或用厚布蓋住大鼠，先用右手抓住鼠尾，再用左手拇指和食指握住頭部，其余手指與手掌握住背部和腹部(圖2)。不要用力過大，切勿捏其頸部，以免窒息致死。2、給藥方法小白鼠（1）、灌胃(po)：左手固定小鼠，右手持灌胃器，灌胃針頭自口角進入口腔，緊貼上腭插入食道(圖3)，如遇阻力，將灌胃針頭抽回重插，以防損傷。常用灌胃量為～ml/10g。（2）、皮下注射(ih)：可用腹部、背部、腹股溝的皮下，此處皮膚比較松弛，也可由助手協(xié)助。注藥量一般為～ml/10g。（3）、肌肉注射(im)：一人抓住小鼠頭部皮膚和尾巴，另一人持連4號針頭的注射器，將針頭刺入后腿外側(cè)肌肉。注射量一般不超過～ml/只。（4）、靜脈注射(iv)：將小鼠置入固定器，酒精涂擦尾部，以使血管擴張。自尾部末端刺入，刺入血管后抽針芯可見回血。常用注射量為～ml/10g。（5）、腹腔注射(ip)：將小鼠固定后，從下腹部外側(cè)進針，深度較皮下注射深(圖4)。常用注射量為～ml/10g。

大鼠灌胃、腹腔注射、皮下注射及尾靜脈注射與小鼠相似。靜脈注射也可在麻醉下行舌下靜脈注射。

3、處死方法（1）、頸椎脫位法：

術(shù)者左手持鑷子或用拇指、食指固定小鼠頭后部，右手捏住鼠尾，用力向后上方牽拉，聽到鼠頸部喀擦聲即頸椎脫位，脊髓斷裂，鼠瞬間死亡。

（2）、打擊法：用手抓住鼠的尾并提起，朝地面用力撞擊鼠頭致死（也可用小木錘用力打擊鼠頭

（3）、吸入麻醉法：吸過量的乙醚。

（4）、大量放血法：可采用眼眶動、靜脈放血致死。

（5）、空氣栓塞法：將空氣急速注入靜脈致死。小白鼠可注入空氣。（三）、豚鼠1、捉拿法：豚鼠性情溫順不咬人，可用左手直接從背側(cè)握持前部軀干，體重小者用一只手捉持，體重大者宜用雙手，右手托住臀部(圖6)2、給藥方法灌胃（見圖6）、皮下注射、肌肉注射及腹腔注射方法基本同小鼠，給藥量稍多。靜脈注射可選后腳掌外側(cè)靜脈或頸外靜脈3、處死方法豚鼠可采用注射麻醉法，即注射戊巴比妥鈉麻醉處死。豚鼠可注射麻醉劑量的3倍以上的量腹腔內(nèi)注射。還可采用吸入麻醉法。第二節(jié)實驗動物的取血方法一、小鼠和大鼠1、剪尾取血法：將清醒鼠裝入深顏色的布袋中，將鼠身裹緊，露出尾巴，用酒精涂擦或用溫水浸泡使血管擴張，剪斷尾尖后，尾靜脈血即可流出，用手輕輕地從尾根部向尾尖擠捏，可取到一定量的血液。取血后，用棉球壓迫止血。也可采用交替切割尾靜脈方法取血。用一鋒利刀片在尾尖部切破一段尾靜脈，靜脈血即可流出，每次可取～ml，供一般血常規(guī)實驗。三根尾靜脈可替換切割，由尾尖向根部切割。由于鼠血易凝，需要全血時，應(yīng)事先將抗凝劑置于采血管中，如用血細胞混懸液，則立即與生理鹽水混合。2、眼球后靜脈叢取血法：左手持鼠，拇指與中指抓住頸部皮膚，食指按壓頭部向下，阻滯靜脈回流，使眼球后靜脈叢充血，眼球外突。右手持1％肝素溶液浸泡過的自制吸血器，從內(nèi)呲部刺入，沿內(nèi)下眼眶壁，向眼球后推進4～5mm，旋轉(zhuǎn)吸血針頭，切開靜脈叢，血液自動進入吸血針筒，輕輕抽吸血管(防止負壓壓迫靜脈叢使抽血更困難)，拔出吸血針，放松手壓力，出血可自然停止。也可用特制的玻璃取血管(管長7～10cm，前端拉成毛細管，內(nèi)徑～mm，長為1cm，后端管徑為cm)。必要時可在同一穿刺孔重復取血。此法也適用豚鼠和家兔。3、眼眶取血法：左手持鼠，拇指與食指捏緊頭頸部皮膚，使鼠眼球突出，右手持彎鑷或止血鉗，鉗夾一側(cè)眼球部，將眼球摘出，鼠倒置，頭部向下，此時眼眶很快流血，將血滴入預先加有抗凝劑的玻璃管內(nèi)，直至流血停止。此法由于取血過程中動物未死，心臟不斷跳動，一般可取鼠體重4％～5％的血液量，是一種較好的取血方法，但只適用一次性取血。4、心臟取血：動物仰臥固定于鼠板上，用剪刀將心前區(qū)毛剪去，用碘酒、酒精消毒此處皮膚，在左側(cè)第3～4肋間用左手食指摸到心搏，右手持連有4～5號針頭的注射器，選擇心搏最強處穿刺，當針頭正確刺入心臟時，鼠血由于心臟跳動的力量，血自然進入注射器。5、斷頭取血：實驗者帶上棉手套，用左手抓緊鼠頸部位，右手持剪刀，從鼠頸部剪掉鼠頭迅速將鼠頸端向下，對準備有抗凝劑的試管，收集從頸部流出的血液，小鼠可取血～ml，大鼠可取血5～10ml。6、頸動靜脈、股動靜脈取血：麻醉動物背位固定，一側(cè)頸部或腹股溝部去毛，切開皮膚，分離出靜脈或動脈，注射針沿動靜脈走向刺入血管。20g小鼠可抽血ml，300g大鼠可抽血8ml。也可把頸靜脈或頸動脈用鑷子挑起剪斷，用試管取血或注射器抽血，股靜脈連續(xù)多次取血時，穿刺部位應(yīng)盡量靠近股靜脈遠心端。二、豚鼠1、心臟取血：需二人協(xié)作進行，助手以兩手將豚鼠固定，腹部面向上，術(shù)者用左手在胸骨左側(cè)觸摸到心臟搏動處，一般在第4～6肋間、選擇心跳最明顯部位進針穿刺。針頭進入心臟，則血液隨心跳而進入注射器內(nèi)，取血應(yīng)快速，以防在試管內(nèi)凝血。如認為針頭已刺入心臟，但還未出血時，可將針