生物動物細胞融合與單克隆抗體新人教選修

閱讀課本并思考下列問題：1、什么叫動物細胞融合？植物體細胞雜交技術與動物細胞融合有什么不同呢？2、動、植物細胞在結構上有何區(qū)別？這與它們雜交或融合過程有什么影響？3、動物細胞融合與植物原生質體融合的基本原理是否相同？兩者的融合過程是否也一樣？一、動物細胞融合

細胞融合是正常的生命活動兩個細胞正在融合

受精作用動物細胞融合過程誘導方式物理法化學法生物法：滅活的病毒仙臺病毒紫外線喪失感染性（不感染細胞）保留融合活性（誘導細胞融合）誘導方法細胞A細胞B雜種細胞滅活的病毒物理法化學法仙臺病毒皰疹病毒新城雞瘟病毒細胞融合與誘導細胞融合物質：誘導劑：仙臺病毒、聚乙二醇

誘導細胞融合的仙臺病毒必須滅活。

思考討論：為什么細胞融合過程中使用的病毒需要滅活？不滅活行嗎？

因為滅活的病毒能使細胞膜上的蛋白質分子和脂質分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合，不滅活的話會感染細胞，而不能誘導細胞融合。

細胞融合技術應用于哪些方面？

細胞學、遺傳學、免疫學及制備單克隆抗體。植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較比較項目植物體細胞雜交動物細胞融合細胞融合原理細胞膜的流動性、細胞膜的流動性細胞融合的方法去除細胞壁后誘導原生質體融合使細胞分散后誘導細胞融合誘導方法物理（離心、振蕩、電刺激）化學（聚乙二醇）物理、化學方法（同左）滅活的病毒用途獲得雜種植株制備單克隆抗體二、單克隆抗體

抗體是機體受抗原刺激后產生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結合的具有免疫功能的球蛋白。漿細胞產生抗體。想一想:什么是抗體？B淋巴細胞與抗體的關系：

１．B淋巴細胞受抗原刺激后，可以產生抗體。２．動物體內的B淋巴細胞可以產生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。３．每一個淋巴細胞只能產生一種抗體。

所以傳統(tǒng)的抗體的生產方法及缺陷是什么？怎樣解決這個問題？

抗原動物體內刺激效應B

抗體抗原不純抗體不純篩選單一效應B細胞不能增殖產生大量抗體特異性差、純度低；產量低、反應不夠靈敏讀下面一段文字資料，思考以下問題：

長期以來，為了獲得抗體，采用的是把某種抗原反復注射到動物體內，然后從動物血清中分離出所需抗體的方法。用這種方法獲得的抗體，不僅產量低，而且抗體的特異性差，純度低，反應不夠靈敏。人們發(fā)現，在動物發(fā)生免疫反應的過程中，體內的B細胞可以產生多達百萬種以上的特異性抗體，但是每個B細胞只分泌一種化學性質單一、特異性強的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個B細胞進行無性繁殖，即克隆。

1、請從以上文字資料中找出單克隆抗體的概念。2、如何大量生產單克隆抗體？提示1：僅用細胞培養(yǎng)技術可行嗎？提示2：我們所學的哪種細胞是可以無限增殖的？提示3：有什么方法能使B細胞產生抗體的能力和腫瘤細胞無限增殖能力同時具備呢？用單個B細胞進行克隆，得到的細胞群能夠分泌一種化學性質單一、特異性強的抗體，這種抗體就叫做單克隆抗體。單克隆抗體

由單個B淋巴細胞經過無性繁殖（克?。?，形成基因型相同的細胞群，這一細胞群所產生的化學性質單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體。

特點：特異性強、靈敏度高

如何大量生產單克隆抗體？利用淋巴細胞產生抗體的功能利用腫瘤細胞無限增殖的特性利用細胞融合的技術將兩種細胞融合獲得具有淋巴細胞和腫瘤細胞特性的雜交瘤細胞利用動物細胞培養(yǎng)技術大量培養(yǎng)雜交瘤細胞如何篩選？融合方式？

單克隆抗體制備過程

注射抗原B淋巴細胞骨髓瘤細胞細胞融合、篩選雜交瘤細胞細胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數量的、能產生特定抗體的細胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體思考：1、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細胞融合原理和動物細胞培養(yǎng)原理2、為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與B細胞融合？這樣融合成的雜交瘤細胞，繼承了雙親細胞的遺傳物質，不僅具有B細胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領，因而可以獲得大量單克隆抗體3、整個制備過程為何要經過兩次篩選?（第一次篩選得到雜交瘤細胞（多種），第二次需先在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個雜交瘤細胞的情況下開始培養(yǎng)，然后再篩選出能產生特異性抗體的細胞群。

由于該細胞群是單個雜交瘤細胞克隆得來的，所以產生的抗體必然是化學性質單一的，特異性強的單克隆抗體。這里的單克隆確有單個細胞克隆的含義，只不過克隆的不是B淋巴細胞，而是雜交瘤細胞。）

單克隆抗體的應用

與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產量高，特異性強，靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯。應用主要有：1、臨床診斷2、作為載體，運載抗癌藥物，形成“生物導彈”治療腫瘤

資料：目前世界各國已經研制出數以百計的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個必然趨勢。另外，用單克隆抗體做體內診斷，借以鑒別和定位體內“病灶”也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。小結兩個過程動物細胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個“一”一個誘導細胞融合的新方法－－滅活病毒一個新細胞－－雜交瘤細胞一個優(yōu)勢－－單克隆抗體特異性強、靈敏度高的優(yōu)勢1、科學家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經培養(yǎng)可產生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是（）A.經過免疫的B淋巴細胞B.沒經過免疫的T淋巴細胞C.經過免疫的T淋巴細胞D.沒經過免疫的Ｂ淋巴細胞A鞏固練習２、在動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較中，正確的是（）A．結果是相同的

B．雜種細胞的形成過程基本相同C．操作過程中酶的作用相同D．誘導融合的手段相同Ｂ3、單克隆抗體制備過程中培育的雜交細胞是------（）A.由小鼠能產生抗體的B淋巴細胞與肝細胞融合B.由小鼠一個B淋巴細胞誘導融合而成C.由小鼠一個B淋巴細胞與肌瘤細胞誘導融合而成D.由小鼠一個B淋巴細胞與骨髓瘤細胞誘導融合而成D4、單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和B淋巴細胞誘導融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細胞是（）①淋巴細胞②小鼠骨髓瘤細胞③B淋巴細胞自身融合細胞④小鼠骨髓瘤細胞自身融合細胞⑤雜交瘤細胞A．②④B．①③⑤C．①②③④D．②③C

下圖為某同學根據雜交瘤技術的方法，設計的生產破傷風桿菌的實驗方案2、該方案能達到預期效果嗎？為什么？4、圖中B為________過程，常用_________作為誘導劑，該細胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實驗方案的目的是__________3、A是從小鼠的脾臟中取得_______,該細胞能夠產生______

5、C過程指細胞培養(yǎng)，該過程包括_____培養(yǎng)和_____培養(yǎng)兩個階段，其中_____代以內的的細胞屬于細胞株。制備單克隆抗體B細胞抗體細胞融合滅活病毒雙親細胞分泌抗體無限增殖原代傳代50B體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞雜交瘤細胞足夠數量的細胞群注射到小鼠腹腔ACGoodbye!Goodbye!;;orz25msr;好想您！”耿英也用力抱住小青，說：“姐姐，你們可好?。　薄爸必笞?，娘娘也想你們??！”“妹妹，我們都很好！終于盼到你們回來了！”大家流著眼淚說幾句話以后，終于都破涕為笑了。喬氏摸摸耿直的臉，高興地說：“直伢子啊，你長大了，比你哥哥走得時候還要高一點兒呢！”小青仔細地端詳著耿英，說：“妹妹，你看起來比走的時候更加成熟好看了！”耿英轉過身來緊緊地擁抱喬氏，說：“娘娘，快八年了啊，我好想您！”喬氏也緊緊地抱著耿英，不斷地念叨著：“娘娘也好想你們??！娘娘也好想你們啊！”一刻，耿英放開手，仔細看看喬氏的臉，替她理理額前的一縷頭發(fā)，說：“娘娘啊，你，怎么有白頭發(fā)了！”喬氏笑了，說：“英丫頭啊，誰老了沒有白頭發(fā)呢？看到你們都長大了，娘娘就高興嘞！”耿直也轉過身來抱抱小青的雙肩，說：“姐姐，我走的時候還是一個小娃兒呢，你能抱住我?，F在我長這么大了，你哪里還能夠抱得了！就讓我來抱抱你吧，我善良漂亮的好姐姐！”小青笑著說：“是啊，姐姐哪里還能抱得了你這個大塊頭的小弟弟呢！”大家剛高興地說了幾句話，喬氏母女倆人忽然覺得哪里不對，都忙著轉頭看看周圍，又互相看一眼。喬氏狐疑地問耿英：“丫頭，你們的爹和哥哥呢？”小青也問：“耿伯伯和耿正呢？”耿英這才想起來哥哥還在門外等著呢，趕快對東伢子說：“東伢子，你去幫我哥把騾車趕進院兒里來吧！”傻乎乎地愣在一旁的東伢子答應著，拔腿就往門外跑去。那個就好像是東伢子小尾巴似的小男娃兒也馬上要跟了去，耿英趕快追上去拉住他，說：“你是小東伢?。縿e去了，大騾子鬧騰，咱們就在院兒里等著吧！”耿直把軟皮箱提起來，扶著喬氏說：“娘娘，咱們進屋子說話吧！”耿英明白弟弟的意思，也對小青說：“姐姐，咱們都進屋子說話吧！”喬氏和小青卻都站在原地不動。喬氏說：“等等你爹和你哥哥！”小青說：“等等耿伯伯和你哥！”耿直和耿英徹底沒轍了，互相望望。耿直說：“姐，這？”耿英說：“那，就等等吧。”耿直想一想，又把軟皮箱放下，扶著喬氏站定。耿英攥緊小東伢的手，也扶著小青站在原地等著。門外，東伢子